ICS6502030

B41..

中華人民共和國國家標準

GB/T286302—2012

.

白斑綜合征WSD診斷規程

()

第2部分套式PCR檢測法

:

Diagnosticprotocolsforwhitespotdisease—

Part2NestedPCRmethod

:

2012-07-31發布2012-11-01實施

中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布

中國國家標準化管理委員會

GB/T286302—2012

.

前言

白斑綜合征診斷規程分為五個部分

GB/T28630《(WSD)》:

第部分核酸探針斑點雜交檢測法

———1:;

第部分套式檢測法

———2:PCR;

第部分原位雜交檢測法

———3:;

第部分組織病理學診斷法

———4:;

第部分新鮮組織的染色法

———5:T-E。

本部分為的第部分

GB/T286302。

本部分按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本部分由中華人民共和國農業部提出

。

本部分由全國水產標準化技術委員會歸口

(SAC/TC156)。

本部分起草單位中國水產科學研究院黃海水產研究所農業部全國水產技術推廣總站

:、。

本部分主要起草人黃倢楊冰陳愛平宋曉玲史成銀楊叢海魏琦劉莉

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T286302—2012

.

白斑綜合征WSD診斷規程

()

第2部分套式PCR檢測法

:

警告使用本標準的人員應有正規實驗室工作的實踐經驗本標準并未指出所有可能的安全問題

:,。

使用者有責任采取適當的安全和健康措施并保證符合國家有關法規規定的條件

,。

1范圍

的本部分規定了白斑綜合征病原的套式檢測方法所需試劑與材料儀器設備

GB/T28630PCR、、

操作步驟和結果判定

。

本部分適用于在對蝦的各種樣品環境生物和餌料生物的各種樣品以及其他各種非生物樣品中對

、,

白斑綜合征病原帶毒情況的高靈敏度定性檢測以進行病原篩查和疾病的確診

,。

本部分單獨使用時不適用于對病毒量或感染活性的估測以及宿主感染程度的評估

。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡不注日期的引用文件其最新版本包括所有修改單適用于本文件

。,()。

白斑綜合征診斷規程第部分組織病理學診斷法

GB/T28630.4—2012(WSD)4:

3原理

31白斑綜合征的病原和病理學特征

.

見的

GB/T28630.4—20122.1。

32技術原理

.

聚合酶鏈式反應是以待測樣品的一段作為模板以與模板

(polymerasechainreaction,PCR)DNA,

兩端序列互補的一對特異性寡核苷酸序列作為引物在四種脫氧核糖核苷三磷酸存在下利用依賴

,,

的聚合酶的合成作用經過數十次變性退火和延伸的反應循環使模板上介于兩個引物

DNADNA。、,

之間的片段得到特異性地級數擴增再通過電泳等手段檢測到被特異性擴增的片段從而可揭示

DNA,,

微量病毒的存在套式是在第一步擴增的產物內再用一對引物進行第二步擴

DNA。PCRPCR,PCR

增套式可大大增加檢測的靈敏度和反應特異性

。PCRPCR。

4試劑和材料

41除非另有說明在分析中僅使用確認為分析純的化學試劑和蒸餾水或去離子水或相當純度的水

.,