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文檔簡介
石蠟切片與冷凍切片的區分是什么簡潔的說簡潔的說,石蠟切片是標本要這固定后經脫水,浸蠟后才能用于切片,冷凍切片是直接把標本放在切片機上使它即刻冰凍,就可以切片了.再簡潔的說一種是要經過很多工序才能用于切片,一種是直接用于切片.簡介冰凍切片〔簡介冰凍切片〔frozensection〕是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到肯定硬度,然后進行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便,而多應用于手術中的快速病理診斷。冰凍切片這些方法,隨著時代的變遷,科技的進展,很多年前被認為是格外重要的技術,現在也逐步被淘汰了。固然有些技術,如低溫恒冷箱冰凍切片法,正在受到青睞。冰凍切片的應用〔冰凍切片的應用〔1〕在手術進展中,突然覺察病人的病變與原診斷,原定手術方案不相符合,或者懷疑時,需要病理確定。〔2〕了解淋巴結內是否有轉移的腫瘤細胞,或者轉移的程度,以利于確定是否需要徹底掃除淋巴結或者其它的治療措施。〔3〕對于已確定為惡性腫瘤的患者,則需要了解其手術范圍是否足夠,上下切緣是否有殘存的腫瘤組織。〔4〕在做剖腹探查時所覺察的腫塊或者異樣的組織。〔5〔5〕顯示組織中的脂肪和脂類物質,這常見于某些病例如脂肪瘤及肉瘤,某些科研組織等。〔6〕某些酶的顯示如ATP酶,琥珀酸脫氫酶等。〔7神經病理學技術中的某些染色法如EagerMarchiCajalHortega氏法和Holzer氏法等。〔8〕對某些物質所進展的免疫熒光的爭論。術中為何做冰凍切片術中為何做冰凍切片病理檢查首先需要將切下的病變組織器官作一系列技術處理,包括固定、取材、脫水、浸蠟、包埋、切片和染色等,一般需花費24小時方可完成全部制片過程,然后由病理醫生石蠟切片病理檢查中最常用的方法。但是,這種方法從外科醫生將病變組織切下,到做出病理診斷,前后通常需要3天的時間。病理醫生切片是目前應用的最廣泛的方法。快速冰凍切片是用于手術中病理診斷的一種方法,病理醫生在收到手術標本后約l5分病理診斷的正確與否直接關系到手術臺上處理患者的下一個步驟乳腺腫塊切除后的冰凍報告是良性的纖維腺瘤,則可宣告手術完畢;如冰凍報告是乳腺癌,就需要進一步擴大手術范圍有重大幫助和指導意義,診斷要力求正確、快速和牢靠。然而,快速冰凍切片要在如此之短的時間內做出診斷,難度相當高,取材有局限性,制作切片的質量也不如常規石蠟切片常規石蠟切片比照和存檔。快速冰凍切片主要用于以下幾種狀況:〔如甲狀旁腺、輸卵管或輸精管等〔如甲狀旁腺、輸卵管或輸精管等;[1]冰凍切片的制作方法冰凍切片的制作方法低溫恒冷箱冷凍切片制作法以ShandonAs620E冷凍鍵和除霜鍵,啟動即時冷凍鍵,機器馬上進展工作狀態,并可持續10mins。啟動即時除霜鍵,可將工作間頂部后面的制冷柵上的霜除掉,并可持續15mins。有照明鍵一個,啟,鎖住工作間。除此之外,箱面的左邊有四個按鍵,兩個為快速自動進退鍵,兩個為微小進退鍵,還有一個手動旋鈕,調整修組織塊時的進退。冷凍箱內左邊的冷凍臺,溫度可達-60℃左右,冷凍箱的中間為一臺切片機,工作間的溫度在0-30℃間可任意調整,并在箱面上的熒屏顯示出來。操作方法及步驟為24×24×2mm。可稍為厚切,一般在5~10um間。即可。定,不能一概而論。如:切未經固定的腦組織,肝組織和淋巴結時,冷凍箱中的溫度不能調太低,在-10--15℃左右,切甲狀腺、脾、腎、肌肉等組織時,可調在-15~20℃左右,切帶脂肪的組織時,應調至-25℃左右,切含大量的脂肪時,應調至-30℃。冰凍切片時的留意事項方,假設有剩余的包埋劑粘于刀或板上,將會破壞甚至撕裂切片,便切片不能完整切出。然后依據不同的編號,依序切片,這樣做既不費時也不會亂。“砍柴看柴勢”,切片也是如此,假設胡亂放置,就不能收到很好的效果。組織中,形成了冰晶。刻,再行切片,或者用口中哈氣,或者用大拇指按壓組織塊,以此來軟化組織,再行切片。另者,調高冰凍點。從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差生了一種吸附力,使切片與載玻片結實地附貼在一起。假設使用冷藏的載玻片來附貼切片,由于溫度一樣,沒有發生上述的現象。冰凍切片的快速染色法冰凍切片附貼于載玻片后,馬上放入恒冷箱中的固定液固定1分鐘后即可染色。以往,起來,核染色質清楚,核仁明顯,其他物質都完好保存。方法:30秒-1分鐘。3-5分鐘。⑤于堿水中返藍⑤于堿水中返藍20秒。⑦脫水,透亮,中性樹膠封固。冰凍組織1-2分鐘,切片1分鐘,固定1分鐘,染色共五分鐘。總共在10分鐘內完成快速制片過程,結果與石蠟切片不相上下。冰凍切片的方法還有很多種,如甲醇循環的半導體冰凍切片法,二氧化碳冰凍切片法,闡述。優缺點優點優缺點優點1.簡便,可以不需要對組織固定、脫水、透亮、包埋等手續即可進展切片,削減了一些中間環節。2.快速,用時短。3.組織變化不大。4.能很好保存脂肪,類脂等成分。5.能夠比較完好地保存各種抗原活性及酶類,特別是對于那些對有機溶劑或熱的溫度耐受力量較差的細胞膜外表抗原和水解酶保存較好。缺點1.不簡潔做連續切片。2.切取的組織不能過大,組織過大不簡潔凍結或者組織凍結不均,影響切片及染色效果。3.不簡潔制作較薄的切片。4.組織塊在凍結過程中簡潔產生水的結晶而影響細胞的形態構造及抗原物質的定位,并且組織構造也不如石蠟切片清楚。操作中的留意事項操作中的留意事項穎的組織制備CO2〔-78℃〕〔-80℃〕〔-190℃〕④烷〔19。液氮適用于組織化學,較安全。缺點:組織塊易發生龜裂。固定組織的制備為防止水解酶和其他物質的移位、彌散,常用4℃、24小時的甲醛固定能很好地保存酶類。但對很多脫氫酶和轉移酶能滅活。故不宜使用,低溫,冷甲醛短時間固定〔10分鐘左右〕固定,可顯示琥珀酸脫氫酶。電鏡消滅后,需要保存細胞的超微構造,以4%緩沖戊二醛〔25%戊二醛16ml;0.1M二甲胂酸pH84m8〕氧化復原酶和轉移酶。恒冷箱溫度一般在冷凍后10分鐘,到接近冷室溫度時再切,一般組織在-15~-20℃切片最易成Pearse及Bancroft的閱歷如下:組織刀溫度組織溫度恒冷箱溫度肝-18-10-5腎-15-8-5皮膚-35-10-5腦-18-5-5固定組織一般高3-5度切片機的使用抗卷板的前緣與刀面須有足夠的距離,使切片平滑通過。抗卷板略高于刀面的最高點。可憑閱歷調整刀對組織的角度,一般刀為20゜。操作程序:先接通電源,調定恒冷箱溫推動器上。即可切片。恒冷箱視使用狀況每周或每月清潔一次冰霜。刀切片滿足,舊刀用自動磨刀機磨刀較好。假設切片刀與抗卷板的位置,角度符合要求,又有一把銳利的刀,就能獲得抱負的切片。其他其他冰凍枯燥冰凍枯燥原理為冰凍組織保持高度真空,直到去除組織中的水分。過程小塊組織驟冷→馬上在真空枯燥脫水〔-30~-40℃〕冰升華,水氣去除,不會發生酶的彌散→材料干后,升到室溫浸于石蠟或碳蠟包埋。特點能精彩地保存組織的酶活性,
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