第二十六章移植免疫及其免疫檢測P339第一節移植免疫學transplantationimmunology一.概述

器官移植成功于20世紀50年代除大腦外，其他器官均有移植的例子器官移植的發展依賴于：顯微外科技術、臟器凍存技術、移植免疫學理論和技術（一）概念移植（transplantation）：

把具有正常結構和功能的器官或細胞種植到另一部位或個體，以替代功能已衰竭了的器官或細胞，借以恢復和重建機體生理功能的技術，這一過程叫移植。移植已成為臨床上重要的治療手段之一。

（二）移植的種類

按移植物來源不同及供、受體基因的差異分為四類移植類型與移植物間的關系

基因型個體種系移植物命運臨床病例自體移植同同同長期存活自體植皮同基因移植

同異同長期存活同卵雙生間腎移植同種異體移植異異同無免疫學措施短期內被排斥異種移植異異異迅速排斥臨床上大多數器官移植二.排斥反應的種類及發生機制（P350）（一）機理：實質是免疫應答1.原因：

供、受體間HLAⅠ類、Ⅱ類抗原的差異差異越大排斥越強。

DR—最重要

A、B、DQ、DP—次重要2.機制：

排斥反應的發生以細胞免疫為主，也有體液免疫參與（1）CTL的細胞毒作用：溶解實質細胞和血管內皮細胞（2）NK細胞的自然殺傷作用（3）抗體介導的細胞毒作用：破壞實質細胞和血管內皮細胞（4）細胞因子介導的炎癥作用（二）排斥反應的臨床分類分兩大類：

宿主抗移植物反應移植物抗宿主反應

宿主抗移植物反應初次反應再次反應急性排斥反應慢性排斥反應超急性排斥反應以腎移植為例介紹各種排斥反應1.超急性排斥反應：移植后48小時內出現的移植腎無功能的情況表現：腎由鮮紅變為青紫，血流停止。顯微鏡下可見腎小血管壞死，微血栓形成，間質水腫出血，皮質廣泛壞死。機理：受者體內預存有抗供體細胞的抗體（針對HLA），抗體與供體細胞的HLAAg結合，激活補體，細胞破壞；補體活化產物使血小板凝聚，釋放凝血因子XⅡ，產生血管內凝血預存抗體產生的原因：多次輸血，血液透析，多次妊娠，再次移植。個別原因不明，可能與曾感染某些病毒細菌有關，產生同種異型抗體。避免方法：移植前取受體血清與供體細胞進行細胞毒試驗CDC試驗，complementdependentcytotoxicity檢測受者血清中是否預存有抗供體細胞的抗體。檢測方法：

受體血清+供體Lc＋補體→

觀察淋巴細胞死亡情況，死亡率大于10%，應放棄此供體2.急性排斥反應臨床上最多見，發生在移植后數周-數月臨床表現：原因不明發燒，血壓上升，進行性腎功能損害，腎區壓痛顯微鏡：腎小血管腔內及周圍大量淋巴細胞浸潤，間質水腫，內壁壞死，血栓形成機理：供、受者HLAAg型別不完全一致早期以細胞免疫為主（CTL直接殺傷、活化的Th1介導的遲發型超敏反應）晚期體液免疫為主（抗體介導的細胞毒作用，NK）避免方法：盡可能選擇HLAAg型別一致的供體3.慢性排斥反應移植術后數月-數年發生表現：漸進型腎功能衰竭，蛋白尿、高血壓（類似慢性腎炎表現）顯微鏡：呈局限性細胞浸潤，間質纖維化，基底膜增厚，小血管內膜增生，管腔逐漸狹窄機理：供、受者HLAAg型別不完全一致體液免疫為主（Ⅳ型超敏反應引起的免疫損傷；特異性Ab活化補體及通過ADCC作用破壞血管內皮細胞；急性排斥反應引起的退行性病變等）避免方法：盡可能選擇HLAAg型別一致的供體移植物抗宿主反應

多發生在骨髓移植中移植物中免疫活性細胞攻擊宿主臨床表現：宿主的淋巴系統、造血系統、單核吞噬系統、皮膚、消化道、肝臟等均受到損傷，出現：皮疹、腹瀉、消化不良、血細胞減少、肝脾腫大、肝功受損等全身情況下降，易繼發感染死亡。

產生原因：（1)供、受者HLAAg型別不完全一致（2）移植物中含有大量的免疫活性細胞，尤其是TLC（3）受體免疫活性細胞處于反應無能狀態在骨髓移植中可發生移植物抗宿主反應，也可發生宿主抗移植物反應，主要取決哪一方的力量強。第二節HLA配型與應用分析（P341）移植成功的四要素：

1.移植物選擇

2.器官保存

3.外科手術

4.免疫抑制劑使用一.選擇供體的一般要求1.一般情況（1）移植物組織器官、細胞健康（2）供者無傳染病（3）年齡相仿（4）供體器官與受區的大小接近接近2.ABO血型相容相容

最好一致，遵照輸血原則3.HLA型別盡可能差異小二.移植前選擇供體的檢測（一）交叉配合試驗（P345）1.預存抗體檢測—檢測測受體血清中有無抗供體細胞的抗體（1）補體依賴的細胞毒試驗（complementdependentcytotoxicity,CDC

試驗)檢測方法：受體血清+供體Lc＋補體觀察細胞死亡情況，大于10%應放棄此供體2.淋巴細胞交叉配合受者LC+供者LC觀察二者LC的增殖轉化程度細胞增殖反應程度與供、受體HLA抗原相容性呈負相關雙向、單向培養均可。（二）HLA型別檢測（P341)1.血清學方法（Serologicallydefinedantigen,

SD抗原）（1）檢測位點：A、B、C、DR、DQ（2）檢測細胞：檢測A、B、C位點—用總淋巴細胞檢測DR、DQ位點—用B淋巴細胞（3）方法：CDC試驗（4）原理：用抗相應位點抗原的抗體（標準分型血清）與待測細胞結合，在補體作用下，有相應HLA抗原的細胞死亡，結果為陽性，即細胞上有與抗體相應的HLA抗原。作為分型試劑的標準分型血清應具備以下條件：特異性強、重復性好、結果清楚、反應快（幾分鐘就出結果）

2.細胞分型法（lymphocytedefinedantigen,

LD抗原）

檢測位點：DP

待測細胞：BLC

方法：混合淋巴細胞培養試驗（mixedlymphocyte

culture,MLC)

分雙向與單向混合培養兩種方法雙向淋巴細胞混合培養試驗：供BLC+受BLC培養由于細胞表面HLA抗原不同，雙方細胞受對方異種抗原刺激而活化，使細胞發生增殖、轉化成為淋巴母細胞。增殖轉化強度與兩者抗原的差異呈正比，即差異越小，反應越小；差異越大，反應越大。由于雙方均可發生反應，所以稱為雙向。

此試驗的缺點是并不能定出各自HLA的型別。

+增殖分化雙向混合淋巴細胞培養試驗原理異種抗原刺激異種抗原刺激增殖分化供受單向混合淋巴細胞培養試驗

此種試驗是將供、受者一方的淋巴細胞先處理，使其失去增殖分化能力，稱這種細胞為刺激細胞（其表面的抗原仍可刺激對方淋巴細胞）。另一方淋巴細胞為反應細胞（被刺激后可發生反應）。將這兩種細胞混合培養，刺激細胞表面含有與反應細胞不同的抗原就可以刺激反應細胞發生反應。這種試驗中只有一方細胞可以反應（增殖分化），故稱為單向混合淋巴細胞培養試驗。細胞分型法就是用此種試驗。刺激細胞：用X線或絲裂霉素處理。

刺激細胞（保留免疫原性，但不發生增殖分化）反應細胞+增殖分化單向混合淋巴細胞培養試驗原理異種抗原刺激（1）陰性分型法原理：標準純合子分型細胞（已知DP位點是什么型，如DPw3）經處理后成為刺激細胞,這種細胞作為分型試劑。當其與待測細胞混合培養時，如待測細胞DP位點有與分型細胞相同的基因（表面有相同的抗原），則不受刺激，反應為陰性；當待測細胞發生增殖分化時，不能定型。這種方法陰性時才能定型，故稱為陰性分型法。DPw3++增殖：DP位點是什么型別不清楚不增殖分化說明反應細胞上有DPw3單向MLC的陰性分型法混合培養DPw3純合子分型細胞刺激細胞

反應細胞（待查細胞）（2）陽性分型法（預致敏細胞分型法）預致敏細胞的制備：取僅有一條單倍型相異的兩個體淋巴細胞進行MLC，其中一個處理為刺激細胞，另一個細胞為反應細胞。兩者混合培養后，反應細胞已被刺激細胞上不同的DP位點（已知）刺激，即成為預致敏細胞（對該DP位點的型別有所記憶），將其凍存作為分型試劑。

試驗時將待測的淋巴細胞處理為刺激細胞，與預致敏細胞混合培養，如待測細胞上的DP位點編碼的抗原與預致敏細胞所識別的特異性相同，預致敏細胞會迅速發生增殖分化（二次刺激，24h內），有這種反應即為陽性，說明待測細胞上含有預致敏細胞所能識別的DP位點的抗原。陽性結果就能分出型別，故稱陽性分型法。此法優點：快；缺點：預致敏細胞難得到三．排斥反應的免疫學監測（P352)

目的：盡早發現排斥反應，臨床采取措施，抑制排斥反應1.T細胞功能檢測—3H-TdR四小時摻入法

如患者即將發生排斥反應，實際體內淋巴細胞已被同種異型抗原刺激，已有增殖分化。取出患者淋巴細胞，加入3H-TdR，培養4小時，收獲細胞，測cpm，根據cpm值推測T細胞的致敏狀態。優點：四小時得結果。（2）外周血T細胞及其亞群檢測

采用免疫熒光法進行外周血T細胞計數；采用流式細胞儀檢測CD4+/CD8+

，原來低，現在升高，＞1.2，預示急性排斥反應發生；＜

1.