實驗室儀器設備器皿及用具第一頁，共六十四頁，2022年，8月28日一、實驗室設置二、實驗室儀器三、實驗室器皿及用具四、洗滌技術五、滅菌技術六、無菌操作技術第二頁，共六十四頁，2022年，8月28日

組織培養實驗室布局的總體要求

便于隔離便于操作便于滅菌便于觀察一、實驗室設置基本布局規律根據實驗操作程序排列實驗室；接種室和培養室設在與外界環境隔離性好的區域；滅菌室與接種室相鄰；其他實驗室的布局可根據條件，以方便使用為宜。第三頁，共六十四頁，2022年，8月28日基本實驗室輔助實驗室實驗室組成準備室緩沖室無菌操作室培養室細胞生物學實驗室溫室生化分析實驗室第四頁，共六十四頁，2022年，8月28日基本實驗室布局平面圖實驗臺擱架培養架培養架培養架培養架藥品及儀器柜無菌臺無菌臺擱架拉窗冰箱擱架水槽電爐門4.5m3.0m3.5m4.0m準備室緩沖室無菌室培養室第五頁，共六十四頁，2022年，8月28日植物組織培養實驗室布局示意圖培養室準備室滅菌室儲藏室接種室緩沖室第六頁，共六十四頁，2022年，8月28日組織培養準備實驗室第七頁，共六十四頁，2022年，8月28日1.準備室1.1洗滌間根據工作量的大小決定其大小，一般面積控制在30-50m2。在實驗室的一側設置專用的洗滌水槽，用來清洗玻璃器皿。中央實驗臺還應配置2個水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以購置一臺洗瓶機。準備1-2個洗液缸，專門用于洗滌對潔凈度要求很高的玻璃器皿。此外還應配置落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器等。地面應耐濕并排水良好。第八頁，共六十四頁，2022年，8月28日超聲波清洗器第九頁，共六十四頁，2022年，8月28日

面積60平方米左右，配備的主要儀器設備有：冰箱、天平、微波爐、pH計、培養基分裝器、藥品柜、器械柜、抽氣泵、電爐、各種規格的培養瓶、培養皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶、儲藏瓶等。冰箱以體積180-200L為宜，用于儲存培養基母液、激素維生素等貴重藥品、彩色膠卷、及保存植物材料。天平應有不同感量。

1.2培養基配制間1.準備室第十頁，共六十四頁，2022年，8月28日第十一頁，共六十四頁，2022年，8月28日

配備實驗臺、高壓滅菌鍋、排風滅火設備、細菌過濾設備、干熱消毒柜、電爐等。滅菌鍋的選擇應根據不同的要求選擇不同型號的滅菌鍋。一般實驗室可選用小型的醫用手提式高壓滅菌鍋，較大的實驗室可選用立式自動控制壓力和溫度的滅菌鍋。生產性的實驗室可選用大型的臥式滅菌鍋。

如果沒有條件的話，可以將上述工作間合并成一個準備間，要求是設備的安裝和排列要合理、房間要寬敞、明亮、透風，地面要便于清潔、防滑。

1.3消毒間1.準備室第十二頁，共六十四頁，2022年，8月28日2.緩沖室第十三頁，共六十四頁，2022年，8月28日無菌操作室主要用于實驗材料的接種操作，所以又叫接種室。通常由里外兩間組成，外間是緩沖間，用于準備工作，還有防止污染的作用。緩沖間的門應該與接種室的門錯開，兩個門也不要同時開啟，以保證無菌室不因開門和人的進出帶進雜菌。緩沖間內應該設有水槽、實驗臺、鞋帽架、和柜子、紫外燈。無菌操作室的內壁應當用塑鋼板或瓷磚裝修，工作人員進入操作間前要穿上消過毒的工作服和拖鞋。

室內應配有超凈工作臺，紫外燈、解剖鏡、各種接種器械等。3.無菌操作室第十四頁，共六十四頁，2022年，8月28日無菌室第十五頁，共六十四頁，2022年，8月28日無菌室第十六頁，共六十四頁，2022年，8月28日

為了控制培養室的溫度和光照時間及其強度，培養室的房間不要窗戶，但應當留一個通氣窗，并安上排氣扇。室內溫度由空調控制，光照由日光燈控制。天花板和內墻最好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設，一般要分兩間，一為光照培養室，一為暗培養。

培養室外應有一預備間或走廊。

培養室應配有培養架、轉床、搖床、光照培養箱、生化培養箱、自動控時器等。日光燈一般用40W，固定在培養架的側面或擱板的下面，每層有兩支日光燈，距離在20cm，光照強度為2000-3000lx。

4.培養室第十七頁，共六十四頁，2022年，8月28日設計組培實驗室時的注意事項為了減少污染，實驗室最好設一走廊且走廊上方最好安裝紫外燈；培養室最好設在南面，設大玻璃窗，以雙層玻璃窗為最好。如果培養室是設在房屋的邊側，其東邊或西邊的墻上也可設置大玻璃窗；培養室房間及門要小，而且密閉性要好，最好裝移門；無菌操作室要小，要設緩沖間，也最好裝移門，且門要稍大一些。第十八頁，共六十四頁，2022年，8月28日二、儀器與設備1、基本設備

冰箱、電爐、酸度計、純水器、天平、培養基分裝器、攪拌器等。第十九頁，共六十四頁，2022年，8月28日酸度計電熱套第二十頁，共六十四頁，2022年，8月28日天平第二十一頁，共六十四頁，2022年，8月28日培養基分裝器攪拌器第二十二頁，共六十四頁，2022年，8月28日2、滅菌設備蒸汽壓力滅菌鍋、干熱消毒柜、過濾滅菌裝置、噴霧消毒器、紫外燈。第二十三頁，共六十四頁，2022年，8月28日蒸汽壓力滅菌鍋第二十四頁，共六十四頁，2022年，8月28日干熱消毒柜

利用高溫干熱對微生物有氧化、蛋白質變性、電介質濃縮引起中毒等作用。其中主要是通過氧化作用破壞細胞原生質，使微生物死亡，所以在一定的加熱時間內可殺死一切微生物。第二十五頁，共六十四頁，2022年，8月28日無菌瓶頂過濾裝置噴霧消毒器（參考圖）（參考圖）第二十六頁，共六十四頁，2022年，8月28日接種器具消毒器第二十七頁，共六十四頁，2022年，8月28日3、無菌操作設備

超凈工作臺第二十八頁，共六十四頁，2022年，8月28日無菌接種箱第二十九頁，共六十四頁，2022年，8月28日4、細胞培養設備搖床第三十頁，共六十四頁，2022年，8月28日培養架第三十一頁，共六十四頁，2022年，8月28日恒溫振蕩培養箱

光照培養箱第三十二頁，共六十四頁，2022年，8月28日5、細胞學鑒定設備光學研究顯微鏡、實體顯微鏡、倒置顯微鏡倒置顯微鏡光學顯微鏡第三十三頁，共六十四頁，2022年，8月28日1、玻璃器皿三、培養器皿及實驗用具培養皿三角瓶培養瓶第三十四頁，共六十四頁，2022年，8月28日2、金屬材質用具鑷子解剖刀接種針第三十五頁，共六十四頁，2022年，8月28日1、玻璃器皿洗滌新購置玻璃器皿1%稀HCl浸漬12h洗衣粉洗滌清水沖洗晾干備用已用過的玻璃器皿四、洗滌技術第三十六頁，共六十四頁，2022年，8月28日清洗后器皿內外不可掛有水珠，否則重洗，若重洗后仍掛有水珠，則需用洗液浸泡數小時后（或用去污粉擦洗），重新清洗。

第三十七頁，共六十四頁，2022年，8月28日2、塑料用品洗滌新的塑料器皿打開即用已用過的塑料器皿2%NaOH浸泡12h清水沖洗2%—5%鹽酸浸泡30min清水沖洗蒸餾水沖洗晾干備用第三十八頁，共六十四頁，2022年，8月28日

金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌（新的可以用熱洗衣粉水洗凈），需要清洗時，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。3、金屬用品洗滌第三十九頁，共六十四頁，2022年，8月28日

（一）、滅菌工作是極其重要的。

首先應建立有菌和無菌的概念有菌的范疇：

有菌：凡是暴露在空氣中的物體，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超凈工作臺的臺面，未處理的工具和手等。

無菌：高壓高溫處理（工具、器皿、培養基等）

物理或化學處理；

火烤后的物體；

健康的動植物不與內外部表面接觸的組織

內部可能是無菌的（有時也有內生菌，但

不會影響培養，也不會污染）

五.滅菌技術第四十頁，共六十四頁，2022年，8月28日1、物理方法：干熱、濕熱、過濾（0.25微米）紫外燈、超聲波等。

2、化學方法：使用滅菌劑或抗菌素，如酒精、次氯酸鈉、升汞、漂白粉、高錳酸鉀、雙氧水、福爾馬林等。

五.滅菌技術第四十一頁，共六十四頁，2022年，8月28日干熱滅菌玻璃器皿、器械濕熱滅菌培養基、蒸餾水、器械、棉塞等熏蒸滅菌接種室、培養室過濾滅菌液體培養基、蒸餾水藥劑滅菌培養材料燒灼滅菌器械、瓶口、棉塞、包頭紙輻射滅菌

接種室、培養間（一）各種滅菌方法及其使用范圍第四十二頁，共六十四頁，2022年，8月28日

適用于玻璃器皿和金屬器械的滅菌。操作方法：150℃、40min或120℃、120min，如果發現芽孢桿菌，160℃、90～120min（1）干熱滅菌第四十三頁，共六十四頁，2022年，8月28日

適用于各種器皿、培養基、器皿、蒸餾水、棉塞、紙等。121℃維持20～30min

注意點：加足水、排盡氣、氣壓降到0時，才能開蓋。（2）濕熱滅菌第四十四頁，共六十四頁，2022年，8月28日

培養基的滅菌一般用高壓高溫處理，但如果培養基中某些成分遇到高溫分解（如某些生長調節劑GA3、玉米素等），就需要過濾滅菌。另外酶、血清等也需要過濾滅菌。

滅菌方法：將生長調節劑或酶配成一定濃度，用注射器注入微孔濾膜慮，濾膜孔徑0.22～0.45微米。制培養基時，現將培養基高壓滅菌，待降至50℃左右時，加入適量的激素，然后分裝。

（3）過濾滅菌第四十五頁，共六十四頁，2022年，8月28日主要是利用紫外燈進行照射，適合實驗室空氣、操作臺等，滅菌時間20～30min。

注意：關燈后5min后再進入。超凈工作臺關燈后要打開風機。（4）射線滅菌第四十六頁，共六十四頁，2022年，8月28日

用火焰灼燒達到滅菌目的，適用于接種器皿的滅菌。（5）火焰灼燒滅菌第四十七頁，共六十四頁，2022年，8月28日

適用外植體、實驗器皿、操作表面、皮膚等。

幾種常用消毒劑的效果比較

消毒劑使用濃度(%)消毒時間(min.)效果殘液去除難易乙醇70-750.1-3好易新潔爾滅10～205～30好易氯化汞0.1～12～15最好最難過氧化氫10～125～15較好最易抗菌素4～50mgl-130～60較好較難次氯酸鈣/納9～105～30好易（6）消毒劑第四十八頁，共六十四頁，2022年，8月28日

長期不用的培養室或接種室要進行熏蒸。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。

甲醛的用量通常按每立方米空間2-6毫升計算，高錳酸鉀的用量是甲醛的一半。室內準備妥當后，把稱好的高錳酸鉀放在瓷碗或燒杯內(最好在碗或杯下面鋪一張報紙，以利清洗)，然后將甲醛也倒入碗或杯內，立即出屋關門。幾秒鐘后，甲醛溶液即沸騰揮發。高錳酸鉀是一種氧化劑，當它與一部分甲醛作用時，由氧化反應產生的熱可使其余的甲醛揮發為氣體。（7）熏蒸滅菌第四十九頁，共六十四頁，2022年，8月28日

甲醛熏蒸接種室應至少在使用前24小時進行，熏蒸后密閉保持4小時以上再進入室內工作。甲醛對人的眼、鼻有強烈刺激作用。因此，可在使用前用氨進行中和。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個燒杯里，迅速放入熏蒸室內，使甲醛和氨水發生中和反應，以消除甲醛味，減少對人體的刺激作用。使用氨水應在工作前2小時進行。

對有材料的培養室，也可以采用乙二醇加熱熏蒸。第五十頁，共六十四頁，2022年，8月28日（二）接種室滅菌空氣消毒滅菌接種室超凈工作臺紫外燈照射70%—75%的酒精擦洗培養材料的接種紫外燈照射第五十一頁，共六十四頁，2022年，8月28日（三）外植體滅菌流水沖洗10—20min或更長時間70%—75%酒精中浸泡30s0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸餾水沖洗4—5次在10%的次氯酸鈉、飽和漂白粉浸泡30min左右備用第五十二頁，共六十四頁，2022年，8月28日常用消毒劑消毒滅菌比較表消毒劑使用濃度（%）去除難易消毒時間（min）效果次氯酸鈣次氯酸鈉漂白粉溴水過氧化氫升汞酒精抗生素硝酸銀9~102飽和溶液1~210~120.1~170~754~5（mg/L1易易易易最易較難易中較難5~305~305~302~105~152~100.2~230~605~30很好很好很好很好好最好好較好好第五十三頁，共六十四頁，2022年，8月28日污染來源人為因素（工作人員本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。物品因素器皿和用具培養皿：洗→熱壓玻璃器皿：洗→干熱（干熱箱）或晾干接種用具：用CCL4布擦→濕布擦→泡75%~95%酒精→燒培養基：濕熱培養材料外部細菌：用水沖洗→化學藥劑處理內部細菌莖尖培養加抗生素：青霉素、利福平操作的空氣：洗刷地板95%酒精擦超凈工作臺用化學試劑薰蒸六、無菌操作技術

第五十四頁，共六十四頁，2022年，8月28日

1、實驗器具和材料的準備

2、用75%的酒精擦拭超凈工作臺，然后室內及超凈工作臺用紫外燈殺菌20min-30min。注意：臺面上的用品不要放置太多或重疊放置，以免降低滅菌效果。

3、關紫外燈、打開風機，過5-10min進入緩沖間，以75%洗手和手臂，更換無菌服、帽子和口罩。進入接種室。（注：沒有特別情況，盡量不要下工作臺）

六、無菌操作技術

第五十五頁，共六十四頁，2022年，8月28日

4、用70－75％的酒精拭擦臺面并消毒雙手。試驗用具也應該用酒精消毒。點燃酒精燈，將金屬器械在其火焰上灼燒，冷卻待用。

注意：所有操作應在火焰近處并經過灼燒進行。金屬器械不能過度灼燒，以防退火。移液管不能灼燒，培養瓶口、塑料材料、橡膠材料過火焰不能時間太長。第五十六頁，共六十四頁，2022年，8月28日5、取流水沖洗（至少30min）過的外植體，用一定的消毒劑浸泡消毒，用無菌水沖洗3~4次，放入無菌培養皿中，置于酒精燈火焰下方，用無菌的接種器械進行分離、切割或其他處理。

6、打開培養瓶，瓶口在燈焰處旋轉灼燒，用鑷子將培養材料置于培養基上，灼燒鑷子放回，灼燒瓶口，蓋上瓶塞。

7、用酒精擦洗工作臺和手。進行下一輪操作。第五十七頁，共六十四頁，2022年，8月28日注意（1）進行培養時，動作要準確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機會。（2）不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。（3）為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應是右手使用的