實驗室生物安全列問題交流

生物安全，是一個重要的國際性問題。世界衛生組織（WHO）早就認識到這個問題，因此早在1983年就出版了《實驗室生物安全手冊》（LaboratoryBiosafetyManual）第1版。

LaboratoryBiosafetyManual1stedition1983199320032004WHOLaboratoryBiosafetyManual該手冊的第2版于1993年出版于2004年在網上公布了該手冊的第3版中文版

WHO《實驗室生物安全手冊》對各個國家都是有益的參考和指南，它可以幫助制訂并建立微生物學操作規范，確保微生物資源的安全。

實驗室生物安全就是在實驗研究過程中，為避免危險生物因子造成實驗室人員暴露，向實驗室外擴散并導致危害而采取的綜合措施，以達到對人、環境生態和社會的安全防護。實驗室工作人員的責任廢棄物的安全處理；樣本的安全運輸（包裝容器的正確使用）；正確使用安全設備；發生突發事件時，迅速匯報；如果發現存在某種潛在危險，必須及時指出；安全意識。生物安全術語與定義

生物安全biosafety：避免危險生物因子造成實驗室人員暴露、向實驗室外擴散并導致危害的綜合措施。生物因子biologicalagents：一切微生物和生物活性物質。病原體

pathogens：可使人、動物或植物致病的生物因子。危害廢棄物

hazardouswaste：有潛在生物危險、可燃、易燃、腐蝕、有毒、放射和起破壞作用的對人、環境有害的一切廢棄物。生物安全術語與定義

危險risk：傷害發生的概率及其嚴重性的綜合。氣溶膠aerosols：懸浮于氣體介質中的固態或液態微小粒子（粒徑一般為0.001-100μm）形成的相對穩定的分散體系。生物安全術語與定義

生物安全實驗室biosafetylaboratory

：通過防護屏障和配套管理措施，達到生物安全要求的生物實驗室和動物實驗室。生物安全術語與定義

一級屏障primarybarrier：是操作者和被操作對象之間的隔離，也稱一級隔離。如生物安全柜、個體防護裝備等。二級屏障secondarybarrier：是生物安全實驗室和外部環境的隔離，也稱二級隔離。生物安全術語與定義

實驗室生物危害因子分級

實驗室生物危害因子就是所研究的病原微生物及其毒素；根據其致病性、傳播方式和防治措施等將生物危害程度分為4級：

實驗室生物危害因子分級危害等級I的微生物

(低個體危害、低群體危害):指確定的、有特征的，已知不會使健康成人致病的微生物菌落。這些微生物菌落是機會性病原體，因而存在著在青少年、老年及免疫缺陷或免疫受抑的個體中傳播的可能性。通常生物危險等級為1級的微生物都在基礎生物教學、基礎微生物技術工作室等場所存在。實驗室生物危害因子分級危害等級Ⅱ的微生物

(中等個體危害、有限群體危害):即能引起人或動物發病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環境不會引起嚴重危害的病原體。實驗室感染可能發生，但不會導致嚴重疾病，具有有效治療和預防措施，并且傳播危險有限。當病源形成大量氣溶膠的潛力較大時，會增加人員感染的危險。通常危害等級Ⅱ的微生物都在初級生物學診斷、基礎醫學研究上存在，需要張貼生物危險標志。

實驗室生物危害因子分級危害等級Ⅲ的微生物

(高個體危害、低群體危害):即能引起人類或動物嚴重疾病，造成嚴重經濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能用抗生素、抗寄生蟲藥物治療的病原體。危害等級Ⅲ的微生物都在特殊的醫學研究、生物學研究中存在，需要裝配特殊防護衣、定向氣流疏通器、生物安全柜等特殊研究裝置防止生物感染。工作時與這些病源體接觸的人員面臨偶然性自動接種和空氣吸入的危險。實驗室生物危害因子分級危害等級Ⅳ的微生物

(高個體危害、高群體危害):即能引起人類或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人、或動物與人、或人與動物、或動物與動物之間傳播的病原體。危害等級Ⅳ的微生物需要裝備更多更嚴密的防護設備和隔離設備。研究人員需要身著完全密封性防護衣，雙門高壓蒸氣滅菌器，空氣過濾防毒面具等高安全系數防護設備。實驗室相關感染源培養物和儲存物實驗動物標本被上述內容污染的物品實驗室相關感染的原因

80％是由工作人員操作失誤引起的；20％是由設備故障引起的；導致感染最多的4種實驗室事故：A溢出和潑灑；B．針頭和注射器；C．銳器、碎玻璃；D．動物咬傷或抓傷、或其身上的寄生蟲叮咬。實驗室相關感染暴露途徑經皮接種感染氣溶膠吸入感染粘膜接觸感染食入感染生物安全實驗室分級生物安全實驗室是按照相應的生物安全防護水平要求設計建造的，根據所處理對象的生物危險程度不同，把生物安全實驗室分為4級：生物安全實驗室分級

(BiosafetyLaboratory)Ⅰ級生物安全實驗室：英文縮寫為BSL-1Ⅱ級生物安全實驗室：英文縮寫為BSL-2Ⅲ級生物安全實驗室：英文縮寫為BSL-3Ⅳ級生物安全實驗室：英文縮寫為BSL-4生物安全實驗室分級及適用范圍Ⅰ級生物安全實驗室

適用于已知其特征的，在健康人群中不引起疾病的，對實驗室工作人員和環境危害最小的生物因子的工作，如枯草芽孢桿菌、格式阿米巴原蟲和感染性犬肝炎病毒等。不需要特殊的一級和二級屏障，除需要洗手池外，依靠標準的微生物操作即可獲得基本的防護水平。生物安全實驗室分級及適用范圍Ⅱ級生物安全實驗室

適合從事對人和環境有中度危害的生物因子的工作，如O157：H7大腸桿菌、沙門氏菌、甲、乙和丙型肝炎病毒等。

一級屏障：需要I或Ⅱ級生物安全柜和個人防護

；

二級屏障：在I級BSL的基礎上增加高壓滅菌器和洗眼裝置等。生物安全實驗室分級及適用范圍Ⅲ級生物安全實驗室

適用于主要通過呼吸途徑吸入使人感染嚴重的甚至是致死疾病的微生物及其毒素，如炭疽芽孢桿菌、黃熱病毒、漢坦病毒、HIV、SARS冠狀病毒。

一級屏障：特殊的人體防護和呼吸道防護措施，以及嚴格的操作規范，Ⅱ級或Ⅲ級生物安全柜。

二級屏障：在Ⅱ級BSL的基礎上，實驗室和進入走廊隔開，雙門進入，自動關閉，排出的空氣不循環，室內負壓，雙開門高壓滅菌器。生物安全實驗室分級及適用范圍Ⅳ級生物安全實驗室

適用于對人體、動植物或環境具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效疫苗或治療方法的致病性微生物或未知傳播風險的有關病原體及其毒素。

一級屏障：Ⅲ級生物安全柜，正壓防護服

二級屏障：在Ⅲ級BSL的基礎上，應為單獨建筑或隔離的獨立區域，有供氣系統、排氣系統、真空系統、消毒系統、外排空氣二次HEPA過濾。個人防護裝置選擇原則實驗室工作人員應根據不同級別生物安全水平和工作性質來選擇個人防護裝置并掌握正確的使用方法。個人防護裝置主要包括：眼睛防護（安全鏡、護目鏡）頭面部及呼吸道防護（口罩、面罩、個人呼吸器、防毒面具、帽子）軀體防護（實驗服、隔離衣、連體衣等）手、足防護（手套、鞋套）耳防護（聽力保護器等）安全眼鏡和護目鏡在所有易發生潛在眼睛損傷的生物安全實驗室中工作時，必須采取眼睛防護措施。口罩口罩可以保護部分面部免受生物危害物質如血液、體液、分泌液以及排泄物等噴濺物的污染。防護面罩

對整個臉部進行防護：必須使用一種標準的防護面罩以罩住整個臉部，或使用口罩加護目鏡（或口罩加安全鏡）。防護帽在生物安全實驗室中佩戴簡易防護帽可以保護工作人員避免化學和生物危害物質飛濺至頭部(頭發)所造成的污染。呼吸防護裝備當實驗室操作不能安全有效的將氣溶膠限定在一定的范圍內要求使用呼吸防護裝備。呼吸防護的有效裝備---防毒面具（面具、個人呼吸器和正壓防護服）手部防護裝備——手套在接觸感染性物質（血液、體液、分泌液、滲出液、以及接觸粘膜和非完整皮膚時），必須使用合適的手套以保護工作人員避免受到污染物濺出或生物污染的事故所造成的損害；手套被污染，應該盡可能早的脫下，消毒后丟棄；手套應按所從事操作的性質符合舒適、靈活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求，并應對所涉及的危險提供足夠的防護；防護服（實驗服、隔離衣、連體衣、圍裙以及正壓防護服）防護服（實驗服、隔離衣、連體衣、圍裙以及正壓防護服）在實驗室中工作人員應該一直或持續穿上防護服；清潔的防護服應放置在專用存放處；污染的防護服應放置在有標志的防漏消毒袋中；每隔適當的時間應更換防護服以確保清潔；

當防護服已被危險材料污染后應立即更換；離開實驗室區域之前應脫去防護服。足部防護裝置

BSL-2和BSL-3實驗室要堅持穿鞋套或靴套；BSL-3和BSL-4實驗室要求使用專用鞋。生物安全柜

Biologicalsafetycabinets，BSCs

是為操作原代培養物、菌毒株以及診斷性標本等具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗室環境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的操作裝置。

生物安全柜分級

可分為一級、二級和三級三大類以滿足不同的生物研究和防疫要求。一級生物安全柜可保護工作人員和環境而不保護樣品；氣流原理和實驗室通風櫥一樣，不同之處在于排氣口安裝有HEPA過濾器；一級生物安全柜本身無風機，依賴外接通風管中的風機帶動氣流，由于不能保護柜內產品，目前已較少使用。圖6Ⅰ級生物安全柜原理圖A：前開口；B：窗口；C：排風HEPA過濾器；D：壓力排風系統一級生物安全柜二級生物安全柜是目前應用最為廣泛的柜型；依照入口氣流風速、排氣方式和循環方式可將二級生物安全柜分為4個級別：A1型，A2型(原B3型),B1型和B2型；二級生物安全柜它們不同于Ⅰ級生物安全柜之處為，只讓經HEPA過濾的（無菌的）空氣流過工作臺面；所有的二級生物安全柜都可提供工作人員、環境和實驗對象的保護；可用于操作危險度2級和3級的感染性物質。A：前開口；B：窗口；C：排風HEPA過濾器；D：后面的壓力排風系統；E：供風HEPA過濾器；F：風機。Ⅱ級A1型生物安全柜原理圖

A：前開口；B：窗口；C：排風HEPA過濾器；D：供風HEPA過濾器；E：負壓壓力排風系統；F：風機；G：送風HEPA過濾器。安全柜需要有與建筑物排風系統相連接的排風接口。Ⅱ級B1型生物安全柜原理圖

三級生物安全柜用于操作危險度4級的微生物材料，可以提供最好的個體防護。Ⅲ級生物安全柜適用于三級和四級生物安全水平的實驗室。三級生物安全柜所有接口都是“密封的”，其送風經HEPA過濾，排風則經過兩個HEPA過濾器。三級生物安全柜由一個外置的專門的排風系統來控制氣流，使安全柜內部始終處于負壓狀態。只有通過連接在安全柜上的結實的橡膠手套，手才能伸到工作臺面。A：用于連接等臂長手套的艙孔；B：窗口；C：兩個排風HEPA過濾器；D：送風HEPA過濾器；E：雙開門高壓滅菌器或傳遞箱；F：化學浸泡槽。安全柜需要有與獨立的建筑物排風系統相連接的排風接口。Ⅲ級生物安全柜（手套箱）示意圖實驗室中生物安全柜的使用安裝位置

生物安全柜應位于遠離人員活動、物品流動以及可能會擾亂氣流的地方。在安全柜的后方以及每一個側面要盡可能留有30cm的空間，以利于對安全柜的維護。

實驗室中生物安全柜的使用操作者

操作者在移動雙臂進出安全柜時，需要小心維持前面開口處氣流的完整性，雙臂應該垂直地緩慢進出前面的開口。手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約一分鐘，以使安全柜調整完畢并且讓里面的空氣“掃過”手和雙臂的表面以后，才可以開始對物品進行處理。

注意：要在開始實驗之前將所有必需的物品置于安全柜內，以盡可能減少雙臂進出前面開口的次數。實驗室中生物安全柜的使用物品放置Ⅱ級生物安全柜前面的進氣格柵不能被紙、儀器設備或其他物品阻擋；所有物品應盡可能地放在工作臺后部靠近工作臺后緣的位置，并使其在操作中不會阻擋后部格柵；實驗室中生物安全柜的使用可產生氣溶膠的設備（例如混勻器、離心機等）應靠近安全柜的后部放置。像有生物危害性的廢棄物袋、盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶等體積較大的物品，應該放在安全柜內的某一側。實驗室中生物安全柜的使用放入安全柜內的物品應采用70%酒精來清除表面污染。可以在消毒劑浸濕的毛巾上進行實驗，以吸收可能濺出的液滴；在工作臺面上的實驗操作應該按照從清潔區到污染區的方向進行；實驗室中生物安全柜的使用操作和維護大多數生物安全柜的設計允許整天24h工作，連續工作有助于控制實驗室中灰塵和顆粒的水平；生物安全柜的所有維修工作應該由有資質的專業人員來進行。實驗室中生物安全柜的使用明火在生物安全柜內所形成的幾乎沒有微生物的環境中，應避免使用明火。使用明火會對氣流產生影響，并且在處理揮發性物品和易燃物品時，也易造成危險。在對接種環進行滅菌時，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應使用明火。實驗室中生物安全柜的使用溢出一旦在生物安全柜中發生有生物學危害的物品溢出時，應在安全柜處于工作狀態下立即進行清理。要使用有效的消毒劑，并在處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢出物品的材料都要進行消毒和／或高壓滅菌。實驗室中生物安全柜的使用清潔和消毒在每天實驗結束時，應擦拭生物安全柜的工作臺面、四周以及玻璃的內外側等部位來清除表面的污染；推薦將安全柜一直維持運行狀態。如果要關閉的話，則應在關機前運行5min以凈化內部的氣體。采集病原微生物樣本的生物安全措施具有掌握相關專業知識和操作技能的工作人員來采集；具有與采集病原微生物樣本所需要的生物安全防護水平相適應的設備，包括個人防護用品（隔離衣、帽、口罩、鞋套、手套、防護眼鏡等）、防護材料、器材和防護設施等；采集病原微生物樣本的生物安全措施具有有效的防止病原微生物擴散和感染的措施；具有保證病原微生物樣本質量的技術方法和手段。采集過程中應對樣本的來源、采集過程和方法等應作詳細記錄。

采樣的主要生物危害微生物氣溶膠吸入飛沫皮膚、黏膜污染食入……感染性物質的運輸空運：鐵路：水路：汽車：感染性物質的運輸實驗室人員必須按照可適用的運輸規定來運送感染性物質。按照規定執行可以實現：

1、減少包裝受損和泄漏的可能性，因此

2、減少可能造成傳染的暴露；

3、提高運輸效率。感染性物質的運輸感染性物質（Infectioussubstances）定義為已知或合理推測可能含有病原體的物質。感染性物質可以劃分為A、B兩類。A類感染性物質

（Infectioussubstances,CategoryA）一類在運輸中，一旦有暴露發生，即能夠在所有人類和動物中引起永久性殘疾、導致威脅生命或致命疾病的傳染性物質。當感染性物質從保護性的包裝中釋放出來即為暴露發生。A類感染性物質

（Infectioussubstances,CategoryA）達到該標準的能引起人體疾病或引起人與動物疾病的感染性物質的聯合國編號為UN2814，恰當的運輸名稱是“感染性物質，感染人類”。而只能引起動物疾病的該類感染性物質則為UN2900；恰當的運輸名稱是“感染性物質，僅感染動物”。B類感染性物質

（Infectioussubstances,CategoryB）沒有達到歸屬為A類標準的感染性物質。B類感染性物質的編號為UN3373。UN3373恰當的運輸名稱是：“診斷樣本”(Diagnosticspecimens)或“臨床樣本”(Clinicalspecimens)。B類感染性物質

（Infectioussubstances,CategoryB）從2007年1月起，“診斷標本”或“臨床標本”這一運輸名稱將改為“生物性物質B類”（Biologicalsubstance,CategoryB）。感染性物質的運輸在感染性及潛在感染性物質運輸中選擇使用的三層包裝系統；這一包裝系統由三層組成：內層容器、第二層包裝以及外層包裝。感染性物質的運輸內層容器（主容器）裝載標本的主容器必須防水、防漏；主容器的表面貼上標簽，標明標本類別、編號、名稱、樣本量等信息。

感染性物質的運輸主容器可以采用玻璃、金屬或塑料等材料，必須采用可靠的防漏封口，如熱封、帶緣的塞子或金屬卷邊封口。內層容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便內層容器打破或泄漏時，能吸收溢出的所有液體。感染性物質的運輸第二層包裝（輔助容器）

輔助容器是在主容器之外的結實、防水和防泄漏的第二層容器，它的作用是包裝及保護主容器。感染性物質的運輸多個主容器裝入一個輔助容器時，必須將它們分別包裹，防止彼此接觸，并在多個主容器外面襯以足夠的吸收材料；輔助容器必須用適當的襯墊材料固定在外包裝內，在運輸過程中使其免受外界影響，如破損、浸水等。感染性物質的運輸第三層包裝：用于保護第二層包裝在運輸過程中免受物理性損壞。按照最新規定的要求，還應提供能夠識別或描述標本的特性，以及能夠識別發貨人和收貨人的標本資料單、信件和其他各種資料，以及其他任何所需要的文件。A類感染性物質的包裝與標簽B類感染性物質的包裝與標簽感染性物質的轉移實驗室廢棄物處理

感染性生物材料：

實驗室應有盛裝廢棄物的容器，最好是防碎裂的，里面盛裝適宜的消毒液，消毒液使用時新鮮配制。廢棄物應保持和消毒液直接接觸并根據所使用的消毒劑選擇浸泡時間，然后把消毒液及廢棄物倒入一個容器里以備高壓或焚燒。

實驗室廢棄物處理所有感染性材料都應該在防滲漏的容器里高壓滅菌，在處理以前，感染性材料裝入可高壓的黃色塑料袋。高壓后，這些材料可放到運輸容器里以備運輸至焚燒爐。

實驗室廢棄物處理焚燒是處理污染物（包括宰殺后的實驗動物）的終末最后步驟，污染物的焚燒必須取得公共衛生機構和環衛部門的批準，也要得到實驗室生物安全員的批準。實驗室廢棄物處理非感染性生物材料：單克隆抗體、質粒、細胞等非感染性生物材料集中放置在所里指定的位置，以備高壓蒸汽滅菌后廢棄；嚴格區分非感染性生