免疫增殖性疾病及其免疫檢測第一頁，共四十四頁，2022年，8月28日第二十四章

免疫增殖性疾病及其免疫檢測陳福祥第二頁，共四十四頁，2022年，8月28日目錄第一節概述第二節免疫增殖性疾病常用檢驗項目及其臨床意義第三節異常免疫球蛋白的檢測方法及應用原則第三頁，共四十四頁，2022年，8月28日第一節概述第四頁，共四十四頁，2022年，8月28日重點提示免疫增殖性疾病的概念及分類免疫增殖性疾病的免疫損傷機制常見免疫球蛋白增多病第五頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫增殖性疾病的概念及分類免疫增殖性疾病是由免疫器官、免疫組織或免疫細胞異常增生所致的一組疾病。包括良性增生和惡性增生兩類。主要表現為免疫球蛋白異常（質和量）和免疫功能異常。第六頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫增殖性疾病的概念及分類良性增生多見于多克隆增殖性疾病，由產生各種免疫球蛋白的B細胞全面增殖所致。包括慢性肝病/肝硬化、結締組織病、慢性感染、惡性腫瘤、獲得性免疫缺陷癥及淋巴母細胞性淋巴結病等。惡性增生主要指單克隆增殖性疾病，是一個B細胞在某一分裂階段發生突變，然后急劇分化、增殖，并大量表達某種單一的免疫球蛋白。第七頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫增殖性疾病的概念及分類因單克隆免疫球蛋白異常增多也可繼發于某些疾病和表現為良性增多，某些淋巴系統的增殖性疾病也可分泌單克隆免疫球蛋白，故單克隆免疫球蛋白增多病又可分為三類:1.原發性惡性單克隆丙種球蛋白病

包括多發性骨髓瘤、原發性巨球蛋白血癥、孤立性漿細胞瘤、淀粉

樣變性、重鏈病、輕鏈病、惡性淋巴瘤和慢性淋巴細胞白血病等。2.繼發性單克隆丙種球蛋白病

包括非淋巴網狀系統腫瘤、單核細胞白血病、風濕性疾病、慢性炎癥、冷球蛋白血癥、原發性巨球蛋白血癥性紫癜、丘疹性粘蛋白沉積癥和家族性脾性貧血等。第八頁，共四十四頁，2022年，8月28日3.原發性良性單克隆丙種球蛋白病

包括一過性單克隆丙種球蛋白增多病和持續性單克隆丙種球蛋白增多病等。

第九頁，共四十四頁，2022年，8月28日漿細胞惡性增殖漿細胞異常增殖在內因和外因的作用下，漿細胞發生永生性病變。正常體液免疫抑制漿細胞瘤患者體內IL-6水平異常增高，致使IL-4的產生受到抑制，從而抑制了正常體液免疫反應。此外，漿細胞瘤細胞可以分泌大量無抗體活性的免疫球蛋白，其Fc段可與正常B細胞及其他有Fc受體的細胞結合，從而封閉這些細胞表面并影響其對其它生物信息的接收，繼而影響B細胞的增殖、分化和抗原提呈。二、免疫增殖性疾病的免疫損傷機制第十頁，共四十四頁，2022年，8月28日異常免疫球蛋白增多所造成的病理損傷漿細胞異常增殖產生大量無活性的異常免疫球蛋白或其片段，沉淀于組織后可引起組織變性和淋巴細胞浸潤，進而導致相應器官的功能障礙。此外，免疫球蛋白濃度過高還可導致血液黏稠度增加，產生一系列直接或間接的病理損害。溶骨性病變漿細胞瘤患者大多伴有溶骨性破壞，可能是由骨質形成細胞調節功能紊亂所致。二、免疫增殖性疾病的免疫損傷機制第十一頁，共四十四頁，2022年，8月28日三、常見免疫球蛋白增多病免疫球蛋白增多病特指由漿細胞的異常增殖而導致的免疫球蛋白異常增多進而造成機體病理損傷的一組疾病。常見免疫球蛋白增多病包括多發性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、重鏈病、輕鏈病、意義不明的丙種球蛋白血病和淀粉樣變性等。第十二頁，共四十四頁，2022年，8月28日（一）多發性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)也稱為漿細胞骨髓瘤，是由合成和分泌免疫球蛋白的漿細胞發生惡變，造成大量單克隆的惡性漿細胞增生所致。腫瘤多侵犯骨質和骨髓，產生溶骨性病變。本病多發于40歲～70歲的中老年人，98%患者的發病年齡>40歲。IgG型最多，IgA型次之，IgM型少見，IgD型更少見，IgE型罕見。三、常見免疫球蛋白增多病第十三頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫學檢測：1.免疫球蛋白測定時相應單克隆IgG、IgA、IgM、IgD、IgE升高。2.血、尿輕鏈測定時相應輕鏈κ或升高，κ/比值異常。3.血清區帶電泳時出現狹窄濃集的異常區帶，其區帶寬度與Alb帶大致相等或較其狹窄，即M蛋白帶。4.免疫固定電泳時泳道出現相應的異常條帶，可以對多發性骨髓瘤進行進一步的鑒定和分型。三、常見免疫球蛋白增多病第十四頁，共四十四頁，2022年，8月28日（二）巨球蛋白血癥（macroglobulinemia）是由淋巴細胞和漿細胞無限制的增殖，并產生大量單克隆IgM所引起。以高粘滯血癥、肝脾腫大為特征,患者血清常分離不出或呈膠凍狀。男性患者多于女性患者，中位年齡65歲。免疫學檢測：1.血清區帶電泳在-球蛋白帶內可見高而窄的尖峰或密集帶，免疫電泳證實為單克隆IgM。2.尿液中有單克隆輕鏈存在。三、常見免疫球蛋白增多病第十五頁，共四十四頁，2022年，8月28日（三）重鏈病(heavy-chaindisease,HCD)是一組少見的淋巴漿細胞惡性增殖性疾病。其特征為單克隆免疫球蛋白重鏈過度生成。包括IgA重鏈(鏈)病、IgG重鏈(鏈)病、IgM重鏈(鏈)病、IgD重鏈(δ鏈)病和IgE重鏈(ε鏈)病。重鏈病的免疫學診斷需在免疫電泳或免疫固定電泳中檢測到只與相應抗重鏈抗血清而不與抗輕鏈抗血清反應的異常血清成分。三、常見免疫球蛋白增多病第十六頁，共四十四頁，2022年，8月28日IgA重鏈(鏈)病：1.最常見，10歲～30歲。2.幾乎所有患者都有彌漫性的腹部淋巴瘤和吸收不良綜合征。3.血清區帶電泳可能不出現孤立的M峰，2與-球蛋白區出現寬帶或-球蛋白帶組分減少。4.本-周蛋白陰性。5.免疫學診斷需在免疫電泳上檢測到只與抗IgA抗血清而不與抗輕鏈抗血清反應的異常成分。三、常見免疫球蛋白增多病第十七頁，共四十四頁，2022年，8月28日IgG重鏈(鏈)病1.老年男性,患者通常有淋巴結腫大和肝脾腫大。2.常見貧血、白細胞減少、血

小板減少、嗜酸性粒細胞增多以及外周血出現不典型的淋巴細胞或漿細胞。3.診斷的依據是免疫電泳或免疫固定電泳在血清和尿中檢出游離的單克隆IgG重鏈碎片，未檢出與單克隆輕鏈的生成有關的證據。三、常見免疫球蛋白增多病第十八頁，共四十四頁，2022年，8月28日IgM重鏈(鏈)病1.報道較少。2.患者表現為病程漫長的慢性淋巴細胞性白血病或其他淋巴細胞增殖性疾病的征象。3.本-周蛋白尿(型)見于10%～15%患者。4.血清區帶電泳通常正常或顯示低丙種球蛋白血癥。5.免疫電泳如果發現一種血清成分可與抗鏈的抗血清起反應，但不與抗輕鏈的抗血清起反應，可作出診斷。6.IgD重鏈(鏈)病，罕見。7.IgE重鏈(鏈)病，罕見。三、常見免疫球蛋白增多病第十九頁，共四十四頁，2022年，8月28日（四）輕鏈病輕鏈病(lightchaindisease,LCD)是由于異常的漿細胞產生過多的輕鏈，而重鏈的合成相應減少，過多游離輕鏈片段在血清或尿液中大量出現而引起的疾病；一旦免疫球蛋白輕鏈在全身組織中沉積，引起相應的臨床表現，即為輕鏈沉積病(lightchaindepositiondisease,LCDD)。患者以不明原因的貧血、發熱、周身無力、出血傾向，淺表淋巴結及肝、脾腫大，繼而出現局限性或多發性骨痛、病理性骨折或局部腫瘤等癥狀為特征。三、常見免疫球蛋白增多病第二十頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫學檢測：1.血清免疫球蛋白定量可見各種免疫球蛋白正常或減少，輕鏈/比值異常。2.血清區帶電泳可能出現輕鏈帶。3.免疫固定電泳各重鏈泳道均無免疫沉淀帶，只有輕鏈出現異常免疫沉淀帶。4.尿免疫球蛋白定量可見單克隆輕鏈蛋白，輕鏈/比值異常，本-周蛋白陽性。三、常見免疫球蛋白增多病第二十一頁，共四十四頁，2022年，8月28日（五）意義不明的單克隆丙種球蛋白病(monoclonalgammophathyofundeterminedsignificance,MGUS)指患者血清或尿液中出現單克隆免疫球蛋白或輕鏈，但排除

惡性漿細胞病，其自然病程、預后和轉歸暫時無法確定的疾病。M蛋白多為IgG，IgA和IgM共占1/4左右。三、常見免疫球蛋白增多病第二十二頁，共四十四頁，2022年，8月28日三、常見免疫球蛋白增多病免疫學檢測：1.血清區帶電泳時在區帶內可見高而窄的尖峰或密集帶，免疫電泳證實為單克隆M帶，M蛋白以IgG型最多，約占60%，IgA和IgM型各占20%，未見IgD和IgE型MGUS的報道。2.M蛋白濃度增高，但IgG一般<30g/L，如為IgA或IgM則<10g/L。3.尿液中沒有或僅有微量M-蛋白。第二十三頁，共四十四頁，2022年，8月28日（六）淀粉樣變性(amyloidosis)是患者體內產生的淀粉樣蛋白質沉積到一處或多處組織器官的細胞間，壓迫組織，影響其功能的一組疾病可分為系統性（主要是淋巴細胞和漿細胞相關的淀粉樣變性）和非系統性（即器官或系統的局限性淀粉樣變性）淀粉樣物質主要是多糖蛋白復合體，在光鏡下呈無定形的均勻的嗜伊紅性物質，用剛果紅染色偏光觀察可見特異的綠光雙折射或紅綠雙折射約80%原發性系統性淀粉樣變性患者血清和尿中有單克隆免疫球蛋白成分，最常見為游離單克隆輕鏈。AL型淀粉樣變性患者的鏈與鏈的比率為3:1三、常見免疫球蛋白增多病第二十四頁，共四十四頁，2022年，8月28日第二節

免疫增殖性疾病常用檢驗項目及其臨床意義第二十五頁，共四十四頁，2022年，8月28日重點提示異常免疫球蛋白分子的特點M蛋白檢測及其臨床意義尿液輕鏈蛋白檢測及其臨床意義第二十六頁，共四十四頁，2022年，8月28日一、異常免疫球蛋白分子的特點正常情況下：免疫球蛋白是機體的正常生理成分。具有高度特異性和多樣性，由漿細胞合成和分泌。免疫球蛋白由4條肽鏈組成，輕鏈2條，重鏈2條，電泳時主要處于區，少數在區，又稱為球蛋白。H鏈和L鏈的氨基酸數量差別很大，正常合成的速度也不同。合成一條重鏈需要18分鐘，合成一條輕鏈只需10分鐘，組成一條完整的免疫球蛋白則有一條以上輕鏈過剩。正常人尿中有微量輕鏈排出。第二十七頁，共四十四頁，2022年，8月28日一、異常免疫球蛋白分子的特點免疫增殖性疾病中，免疫球蛋白的合成可出現以下三種異常：1.合成量高：突變的B細胞轉化為前B細胞或漿細胞活性極高，可快速合成免疫球蛋白。2.合成時間短：合成一條H鏈約需2.5分鐘，合成一條L鏈則只需1分鐘。3.多余輕鏈：每合成1分子免疫球蛋白則會剩余3條輕鏈，多余的輕鏈由尿中排出，可達1mg/ml以上。第二十八頁，共四十四頁，2022年，8月28日一、異常免疫球蛋白分子的特點繼而導致出現以下三種結果：1.免疫球蛋白大量合成，血中含量大大增加，高于正常人數倍到數十倍。2.大量異常免疫球蛋白成分是同一型別，理化性質十分均一，但無與抗原結合的活性，也無其他免疫活性。3.正常成分減少，即多樣性免疫球蛋白減少，正常免疫功能下降。第二十九頁，共四十四頁，2022年，8月28日二、M蛋白檢測及其臨床意義M蛋白（Mprotein）是漿細胞或B淋巴細胞單克隆大量增殖時所產生的一種異常免疫球蛋白。其氨基酸組成及排列順序十分均一，空間構象、電泳特征也完全相同。本質為免疫球蛋白或其片段（輕鏈、重鏈等）。產生于單一克隆（monoclone），又常出現于多發性骨髓瘤（multiplemyeloma）、巨球蛋白血癥（macroglobulinemia）、惡性淋巴瘤（malignantlymphoma）病人的血或尿中，故稱M蛋白。這些M蛋白大多無抗體活性，所以又稱為副蛋白（paraprotein）。第三十頁，共四十四頁，2022年，8月28日血清免疫球蛋白定量測定初篩檢測M蛋白。血清區帶電泳時可檢出M蛋白。免疫電泳和免疫固定電泳可鑒定M蛋白的類型。對M蛋白含量的動態監測，可為丙種球蛋白血癥的病情和療效判斷提供一定的價值。二、M蛋白檢測及其臨床意義第三十一頁，共四十四頁，2022年，8月28日當機體發生免疫增殖性疾病時，血液中可出現大量的M蛋白，M蛋白可以是IgG、IgM、IgA、IgE或IgD，也可以是或輕鏈中的任何一型。若或輕鏈的合成超過重鏈時，則血清中游離輕鏈增加，易從尿中排出，稱本-周蛋白（BenceJonesprotein,BJP）。三、尿液輕鏈蛋白檢測及其臨床意義第三十二頁，共四十四頁，2022年，8月28日經典的檢測方法是將尿液標本（一般是尿蛋白陽性的尿液）置56℃水浴15分鐘，如有渾濁或沉淀，再將試管放入沸水中煮沸3分鐘，如果混濁變清則提示本-周蛋白陽性。檢測本-周蛋白對輕鏈病的診斷是必不可少的項目，并對多發性骨髓瘤、原發性巨球蛋白血癥、重鏈病等疾病的診斷、鑒別和預后判斷均有一定幫助。三、尿液輕鏈蛋白檢測及其臨床意義第三十三頁，共四十四頁，2022年，8月28日第三節異常免疫球蛋白的檢測方法及應用原則第三十四頁，共四十四頁，2022年，8月28日重點提示血清區帶電泳免疫電泳免疫固定電泳血清免疫球蛋白定量異常免疫球蛋白檢測的應用原則第三十五頁，共四十四頁，2022年，8月28日常采用醋酸纖維素膜和瓊脂糖凝膠電泳兩種方法：一、血清區帶電泳正常血清區帶電泳腎病綜合征血清區帶電泳肝硬化血清區帶電泳多克隆增殖血清區帶電泳單克隆增殖血清區帶電泳第三十六頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫電泳是將瓊脂糖凝膠電泳和免疫雙向擴散相結合的一項技術。血清標本先行區帶電泳分成區帶，繼而用特定的抗血清進行免疫擴散，陽性樣本的M蛋白將在適當的部位形成異常沉淀弧，根據抗血清的種類、電泳位置及沉淀弧的形狀可以對M蛋白作出判定。二、免疫電泳第三十七頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫固定電泳原理類似于免疫電泳，不同之處是將抗血清直接加于電泳后蛋白質區帶表面，或將浸有抗血清的濾紙貼于其上，抗原與對應抗體直接發生沉淀反應，形成的復合物嵌于固相支持物中，將未結合的游離抗原或抗體洗去。免疫固定電泳包括瓊脂糖凝膠電泳和免疫沉淀兩個過程，此法實質上是常規免疫電泳的一種衍生方法。三、免疫固定電泳第三十八頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫固定電泳后的區帶為單一免疫復合物沉淀帶，與僅電泳而未經免疫固定的標本比較，其可判明蛋白為何種成分，以對樣本成分及其性質進行分析、鑒定。與免疫電泳比較，免疫固定電泳具有更高的靈敏度，M蛋白在免疫固定電泳中顯示狹窄而界限明確的區帶，而多克隆增生或正常血清-球蛋白區帶則比較彌散。三、免疫固定電泳第三十九頁，共四十四頁，2022年，8月28日IgG/型和IgG/型MM的免疫固定電泳圖譜IgA/型和IgA/型MM的免疫固定電泳圖譜三、免疫固定電泳根據免疫固定電泳不同泳道出現的異常條帶，可對多發性骨髓瘤進一步鑒定和分型：第四十頁，共四十四頁，2022年，8月28日免疫球蛋白的定量分析對診斷免疫球蛋白異常增多性疾病具有重要價值，目前免疫球蛋白的定量檢測以免疫比濁法為主。某一類型免疫球蛋白明顯高出正常值，應考慮血清中有M蛋白的存在，宜進一步做亞型分析及輕鏈檢測。正常血清中/比例約為2:1，當/比例>4:1或<1:1時應考慮型或