PAGEPAGE3乙酰膽堿酯酶活性抑制劑篩選比色法檢測試劑盒產品說明書（中文版）主要用途Ellman試劑反應后，產生黃色5-巰基-2-值的變化，即采用比色法來評價樣品酶活抑制能力的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種抑制劑篩選檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。技術背景乙酰膽堿酯酶AcetylcholinesterasAchEC3.1.1.7，又稱為紅細胞膽堿酯酶RBCcholinesteras，廣泛存在于真核生物，包括某些植物，尤其在腦組織、神經肌肉連接處（neuromuscularjunction、中樞神經系統的膽堿能突觸（cholinergicsynapses）和紅細胞膜上高度表達，催化主要的神經傳導介質乙酰膽堿的水nasphyxiation（acetylthiocholineiodide膽堿thiocholine），與Ellma試劑5,5-二硫基-雙2-硝基苯甲酸[5,5-dithiobis（2-nitrobenzoicacid；DTNB反應后，產生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicaci；TN，通過其吸收峰值的變化（412nm波長），來定量分析乙酰膽堿酯酶抑制劑的效應。乙酰膽堿酯酶反應系統為：Acetylcholinesteraseacetylthiocholineiodide → acetate + inhibitorDTNB + thiocholine → TNB+ choline-S-S-TNB產品內容緩沖液（ReagentA）反應液（ReagentB）底物液（ReagentC）陰性液（ReagentD）產品說明書

20毫升2毫升2毫升1毫升1份保存方式保存在－20℃冰箱里；反應液（ReagentB）和底物液（ReagentC）避免光照；有效保證6月用戶自備乙酰膽堿酯酶：用于抑制劑篩選1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器比色皿或96孔板：用于比色的容器分光光度儀或酶標儀：用于比色分析實驗步驟一、測定準備準備好待測樣品，置于冰槽里備用開啟并設定好分光光度儀（37℃412n53次（15分鐘零從－20℃冰箱里取出試劑，反應液（ReagentB）底物液（ReagentC）照緩沖液（Reagent96孔板上做好相應標記：背景、完全活性和待測抑制劑樣品輕輕搖動96輕輕搖動96孔板，混勻，放進37℃培養箱里孵育30分鐘。然后進行下列操作內容物緩沖液（Reagent空背景對照10微升樣本背景10微升完全酶活性10微升待測抑制劑酶活性10微升A）陰性液（ReagentD）10微升5微升5微升——待測抑制劑——5微升――5微升用戶自備的純化酶————5微升5微升（1至5毫單位）（1至5毫單位）96孔板每孔總量空背景對照孔（20微升）樣本背景孔（20微升）完全活性孔（20微升）待測抑制劑樣品孔（20微升）130緩沖液（Reagent96孔板的所有孔里25反應液（ReagentB）25底物液（Reagent96孔板373分鐘20微升上述預處理的待測樣品3715分鐘10．（選擇步驟）完全酶活計算：[（樣品讀數－背景讀數）XX0.20（體系容量；毫升）]÷[0.005（樣品容量；毫升）X13.6（毫摩爾吸光系數0.6（光徑距離；厘米15（反應時間；分鐘單位/毫升樣品蛋白濃度）毫克毫升＝單位毫克單位＝微摩爾硫代膽堿11．抑制活性計算：（完全活性讀數－空背景對照讀數）－（抑制劑樣品活性讀數－樣本背景讀數）（讀數－空背景對照讀數）＝實際抑制百分率X（所需抑制劑樣品濃度）＝（）X50％3）（Y）為吸光單位（OD；橫座標（X）為已知抑制劑濃度注意事項20操作時，須戴手套樣品須澄清，至關重要315用戶根據實際需求，可以調整純酶的濃度如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度可以使用乙酰膽堿酯酶抑制劑