上海睿智化學(xué)研究有限公司上海睿智化學(xué)研究有限公司保密，不許復(fù)制上海睿智化學(xué)研究有限公司標(biāo)準(zhǔn)管理程序（SMP）SMP序號：CP-GUIDE-VET-04生效期：2008年4月31日版本：01頁碼：1of10SMP:實驗動物的疼痛與痛苦的識別和緩解制度制定人：賈敏、張圣香制定日期：2008年4月1日審核人：查若鵬審核日期：2008年4月12日批準(zhǔn)人：聞丹憶,）批準(zhǔn)日期：2008年4月31日存檔人：狄怡樂存檔日期：2008年4月31日分發(fā)名單：<質(zhì)量保證部門（原始檔案）所有SMP手冊SMP:實驗動物的疼痛與痛苦的識別和緩解制度SMP:實驗動物的疼痛與痛苦的識別和緩解制度頁碼：of10上海睿智化學(xué)研究有限公司上海睿智化學(xué)研究有限公司保密，不許復(fù)制1.0目的為了遵循動物福利法、人道的對待實驗動物，對實驗操作做出指導(dǎo)。2.0范圍此適用于所有試驗人員、獸醫(yī)和麻醉劑管理人員。3.0參考文獻《實驗動物管理條例》《麻醉劑管理條例》《Thedevelopmentofscience-basedguidelinesforlaboratoryanimalcare》AmericanCollegeofLaboratoryAnimalMedicine.1997.AnesthesiaandAnalgesiainLaboratoryAnimals.D.F.Kohn,S.K.Wixson,W.J.WhiteandG.J.Benson,eds.AcademicPress.NationalResearchCouncil.2000.DefinitionofPainandDistressandReportingRequirementsforLaboratoryAnimals.Wolfensohn,S.andM.Lloyd,1998.HandbookofLaboratoryAnimalManagementandWelfare,SecondEdition.BlackwellScience,Oxford.334pp.RecognitionandAlleviationofPainandDistressinLaboratoryAnimals.NRC.1992.4.0內(nèi)容4.1疼痛與止痛?外科手術(shù)或具侵略性的實驗對動物會產(chǎn)生疼痛而導(dǎo)致一系列的生理反應(yīng)，嚴(yán)重時會影響實驗結(jié)果。站在人道的立場，可以在不影響實驗結(jié)果的條件下，于手術(shù)后內(nèi)給予止痛劑注射。一般可以給予下列藥物作止痛、消炎的處理：令抗休克的類固醇

令麻醉性鎮(zhèn)痛劑令非類固醇類抗炎癥藥物?小鼠在實驗過程中的疼痛評價與止痛措施:洪痛程度評估項目j、輕微中等嚴(yán)重體重體重體重減少原體重的%以下體重減少原體重的0%體重減少原體重的％以上外觀身體姿勢短暫弓背，特別是投藥后間歇性弓背持續(xù)性弓背毛發(fā)豎起情形部分毛發(fā)豎起明顯皮毛粗糙明顯皮毛粗糙，并伴隨其他癥狀如弓背、遲鈍反應(yīng)及行為臨床癥狀呼吸正常間歇性呼吸異常持續(xù)性呼吸困難流延短暫的間歇性弄濕下額皮毛持續(xù)性弄濕下額附近的皮毛震顫短暫的間歇性持續(xù)性痙攣無間歇性（每次以下）持續(xù)性（若每次超過以上，則建議安樂死）沉睡、臥倒無短暫的（以下）持續(xù)以上（若每次超過以上，則建議安樂死）無刺激時一般行為社會化行為與群體有對等的互動與群體互動較少沒有任何的互動行為對刺激的反應(yīng)受刺激時行為反應(yīng)變化不大受刺激時也壓抑行為反應(yīng)（如被人捉抓時）對刺激或外部行為無任何反應(yīng)止痛措施繼續(xù)觀察，至逐漸恢復(fù)正常給予止痛劑無法解除疼痛，采取安樂死

?大鼠在實驗過程中的疼痛評價與止痛措施:f一飛痛程度評估項目輕微中等嚴(yán)重體重（不包含暫時性體重減輕）體重體重減少少于原體重0體重減少少于原體重?5體重減少少于原體重％以上食物飲水消耗內(nèi)僅攝食正常量的％內(nèi)攝食低于正常量的0以下天內(nèi)攝食低于正常量的%，或食欲不振超過外觀身體姿勢短暫弓背，特別是投藥后間歇性弓背持續(xù)性弓背毛發(fā)豎起情形部分毛發(fā)豎起明顯皮毛粗糙明顯皮毛粗糙，并伴其他癥狀如弓背、遲鈍反應(yīng)及行為臨床癥狀呼吸正常間歇性的呼吸異常持續(xù)性的呼吸困難流延短暫的間歇性弄濕下額皮毛持續(xù)性弄濕下額附近的皮毛震顫短暫的間歇性的持續(xù)性的痙攣無間歇性的（每次以下）持續(xù)性的（若每次超過以上，則建議安樂死）沉睡、臥倒無短暫的（以下）持續(xù)超過以上（若每次超過以上，則建議安樂死）無刺激時一般行為社會化行為與群體有對等的互動與群體互動較少沒有任何的互動對刺激的反應(yīng)受刺激時行為反應(yīng)變化不大受刺激時會有較少的反應(yīng)（如：被人捉抓）對刺激或外部行為無任何的反應(yīng)止痛措施繼續(xù)觀察，至逐漸恢復(fù)正常給予止痛劑無法解除疼痛，采取安樂死?疼痛是一種精神緊張因子，如果不能緩解，就會導(dǎo)致動物無法承受的精神緊張和痛苦。對研究用的動物適當(dāng)使用麻醉劑和鎮(zhèn)痛劑，在倫理學(xué)和科學(xué)方面都是必不可少的。2麻醉淺（不完全）麻醉：應(yīng)用麻醉藥物使動物入睡，反射活動降低或部分消失，肌肉微松弛；深（完全）麻醉：應(yīng)用麻醉藥物使動物呈深睡狀態(tài)，反射消失及肌肉松馳。后者多用于身體狀況良好，手術(shù)實驗復(fù)雜的情況。全身麻醉前準(zhǔn)備在實施全身麻醉時，以下幾個問題不容忽視：令動物禁食?小時。不能少于小時。令麻醉前不能使用瀉劑。因為瀉劑可導(dǎo)致降低血液的堿儲，從而增加血流和組織的酸度，在麻醉和失血情況下，易發(fā)生酸中毒并能降低損傷組織的抗感染能力。令麻醉后的動物必須保持氣道的通暢和組織（眼球、舌、腸等器官）的營養(yǎng)。所以依具體情況準(zhǔn)備滴眼液、濕毛巾、溫的生理鹽水等。令若犬做長時間，實驗前小時應(yīng)灌腸排除積糞。令檢查麻醉劑質(zhì)量、數(shù)量是否滿足要求，麻醉保定器具是否有破損（漏氣或堵塞），有關(guān)麻醉中毒急救品和器材是否準(zhǔn)備齊妥，以應(yīng)急需。麻醉的分期第一期：無痛期動物開始失去知覺第二期：興奮期呼吸急促、狂亂或吼叫、對刺激非常敏感。第三期：手術(shù)麻醉期分四節(jié)，一、二節(jié)最適合手術(shù)。第四期：休克死亡期呼吸、心跳幾乎停止，?分鐘內(nèi)可能死亡。第三期的第三、四節(jié)是動物接近死亡的高危險期，此時必須暫停手術(shù)進行急救，否則動物一旦進入四期休克就可能死亡。麻醉各期的生理變化：麻醉期呼吸瞳孔眼球轉(zhuǎn)移反射肌肉張力脈搏血壓第一期規(guī)則正常隨意存在正常升高第二期不規(guī)則擴張不隨意存在激動緊張升高第三期第一節(jié)（輕度）深度、速度增加收縮不隨意或固定不動眼結(jié)膜、咽喉輕微松弛正常第二節(jié)（中度）正常正常固定不動咽喉中度松弛正常第三節(jié)（深度）深度、速度降低輕微擴張固定不動無輕微松弛脈搏不振、血壓下降第四節(jié)（過量）腹式呼吸中度擴張固定不動無固定不動脈搏、血壓下降休克死亡期腹式呼吸輕度擴張固定不動無固定不動脈搏、血壓為零?動物麻醉的方法有全身麻醉、局部麻醉、針刺麻醉、復(fù)合麻醉、低溫麻醉等。一般實驗室所采用的大部分是全身麻醉（吸入麻醉和非吸入麻醉）。吸入麻醉：常用的吸入麻醉劑有乙醚、氟脘、甲氧氟脘、氯仿等。乙氟烷的吸入麻醉：令乙氟脘無色透明，極易揮發(fā)，特殊氣味，易燃易爆，須保存于暗色容器中置陰涼處。令操作：連接蒸發(fā)器，氣體流量計和呼吸環(huán)形管，將連接好的該套裝置放在通風(fēng)良好處進行操作。灌注麻醉劑：確定蒸發(fā)器上的控制刻度盤保持在“OFF”位置，逆時針旋開填充蓋，并確保排出的栓子處于關(guān)閉狀態(tài)。緩慢倒入異氟烷麻醉劑，通過安裝在側(cè)面的玻璃視鏡觀察麻醉劑的量。順時針旋上填充蓋，確保旋緊已防泄漏。啟動蒸發(fā)器推下控制刻度盤旁邊的鎖定杠桿。逆時針方向旋動控制刻度盤，調(diào)至理想濃度。打開異氟烷麻醉劑的排出栓子，蒸氣流量開始在刻度盤上越過“0”刻度做輕微的移動。設(shè)置氣體流量計打開氧氣鋼瓶上的控制閥門，確保氧氣流入氣體環(huán)管內(nèi)。彈出流量計上的閥門，順時針旋動，調(diào)至理想壓力。將動物的頭部放在呼吸環(huán)管口進行麻醉，當(dāng)動物角膜反射遲鈍、肌緊張降低，將動物移走，進行相應(yīng)的實驗操作。若動物逐漸開始恢復(fù)肌緊張（重新掙扎）則重復(fù)麻醉一次，待平靜后即可進行驗。實驗完成后，關(guān)閉氧氣鋼瓶的控制閥門，將流量計上的閥門及蒸發(fā)器上的控制刻度盤歸零，并關(guān)閉異氟烷麻醉劑的排出栓子。混合氣體（）的吸入麻醉：令少量動物使用透明的小盒或透明小箱子進行麻醉，大量動物則使用大盒進行。如果需要麻醉的動物數(shù)量眾多，則需將動物分批進行麻醉，不可使動物堆疊于盒內(nèi)進行。令操作：將動物放入盒內(nèi)，打開壓力閥，以的壓力差灌注混合氣體，至動物自行倒下。當(dāng)動物角膜反射遲鈍、肌緊張降低，即可關(guān)閉閥門，取出動物。若動物逐漸開始恢復(fù)肌緊張（重新掙扎）則重復(fù)麻醉一次，待平靜后即可進行實驗。?非吸入麻醉非吸入麻醉的給藥常用注射方法，如靜脈注射、肌肉內(nèi)注射、皮下注射、腹腔內(nèi)注射等。常用的麻醉劑如下：令巴比妥類：巴比妥鈉是最常用的一種動物麻醉劑，麻醉潛伏期短，維持時間較長。既可腹腔內(nèi)注射，又可以靜脈注射，一般用生理鹽水配制。操作：用該藥麻醉時，中型動物多為靜脈給藥，也可腹腔給藥，小型動物多為腹腔給藥。先一次推入總量的2/3待,觀察動物的行為，若已達(dá)到所需的麻醉深度，則不一定全部給完所有藥量。動物的健康狀況、體質(zhì)、年齡、性別也影響給藥劑量和麻醉效果，因此實際麻醉動物時應(yīng)視具體情況對麻醉劑量進行調(diào)整。令氯胺酮：國家管制藥。該麻醉劑注射后很快使動物進入淺睡眠狀態(tài)，但不引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)深度抑制，所以一些保護性反射仍然存在，麻醉的安全性相對高，是一種鎮(zhèn)痛麻醉劑。一般多用于犬、貓等動物的基礎(chǔ)麻醉。本品能迅速通過胎盤屏障，影響胎兒，所以用于懷孕動物時需慎重。雖然高劑量注射時，也可使動物死亡，但由于死亡前動物常呈現(xiàn)疼痛及抽搐現(xiàn)象，因此只用于動物的一般性保定、鎮(zhèn)定、止痛及麻醉，不能作為動物安樂死用藥劑。?實驗麻醉并發(fā)癥的預(yù)防和急救實驗過程中因麻醉深度或其它因素影響，可導(dǎo)致一些可見的臨床表現(xiàn)，實驗人員應(yīng)及時加以處理。令呼吸停止呼吸停止常因舌回縮、呼吸被抑制、機體機能衰竭或用藥過量等因素造成呼吸困難，甚至呼吸停止。呼吸停止的表現(xiàn)是胸廓呼吸運動停止、粘膜發(fā)鉗、角膜反射消失或極低、瞳孔散大等。呼吸停止的初期，可見呼吸淺表、頻數(shù)不整而且間歇。此時必須停止供給麻醉劑，先張開動物口腔，拉出舌尖到口角外，輸氧同時，應(yīng)用心臟和呼吸興奮藥，如0.腎1上%腺素、可拉明、科第阿明等。令心跳停止心搏停止多因機體機能衰竭、藥物過敏或麻醉藥過量等因素引發(fā)。解救藥有安鈉咖、腎上腺素（興奮心搏）、地塞米松（抗過敏）和麻醉藥的拮抗劑。吸入氯仿、乙醚時，有時于麻醉初期出現(xiàn)反射性心跳停止，通常是由于劑量過大的原因。還有一種情況，就是手術(shù)后麻醉劑所致的心臟急性變性，心功能急劇衰竭而停跳。心跳停止的到來可能無預(yù)兆。呼吸和脈博突然消失，粘膜發(fā)鉗。心跳停止應(yīng)迅速采用心臟按摩，即用掌心（小動物可用指心）在心臟區(qū)有節(jié)奏地敲擊胸壁，其頻率相當(dāng)于該動物正常心臟收縮次數(shù)。同時，心室注射強心劑0.腎1上%腺