月季花藥培養課件花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉

花粉是由花粉母細胞（小孢子母細胞）經過減數分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞。

花粉的發育要經歷：四分體時期、單核期、雙核期等階段。一、基礎知識（一）被子植物的花粉發育雄蕊花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉花粉是由花花粉粒花粉粒被子植物花粉的發育過程被子植物花粉的發育過程注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成，如棉花、桃、李、茶、楊、）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養核和兩個精子。（如水稻、大麥、小麥、玉米、油菜等的花粉）③兩個精子和一個營養核的基因型相同。④4個小孢子減分有分4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有絲分裂8個精子1花粉母細胞注意：4個小孢子減分有分4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有絲分（二）產生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化

愈傷組織

花藥中的花粉脫分化

分化

叢芽

再分化

叢芽

誘導生根（二）產生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化體細胞胚（胚狀體）：

在組織培養過程中，某些體細胞在形態上轉變為與合子發育成的胚非常相似的結構，發育過程亦與合子胚類似，被稱為體細胞胚（胚狀體）。體細胞胚（胚狀體）：人工種子

又稱人造種子、合成種子或無性種子，就是將組織培養所產生的體細胞胚、不定芽、頂芽、腋芽或小鱗莖等繁殖體，包裹在能提供營養的膠囊（人造胚乳）里，再在外面包上一層具有保護功能和防止機械損傷的外膜（人造種皮），造成一種類似種子的結構，能在一定的條件下萌發生長，形成完整植株。人工種子又稱人造種子、合成種子或無性種(三)、影響花藥培養的因素1、材料的選擇不同植物同一植物的不同生理狀況（花期早期－初花期）合適的花粉發育期（單核居中期與靠邊期之間）此外，植株生長條件、材料低溫預處理、接種密度等2、培養基的組成(三)、影響花藥培養的因素1、材料的選擇

花期早期時的花藥比后期的更容易產生花粉植株。一般月季的花藥培養時間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。

選擇合適的花粉發育時期也是提高誘導成功率的重要因素。一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養成功率最高。

為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。1、材料的選擇花期早期時的花藥比后期的更容易2、培養基的組成

月季花的培養基配方

在1000mlMS培養基配方中添加2，4—D0.4mgKT0.2mgIAA4mg調節PH為5.82、培養基的組成月季花的培養基配方二、實驗操作（一）材料的選擇

選擇花藥時，一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發育期。

最常用的方法有醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。二、實驗操作（一）材料的選擇選擇花藥時（二）材料的消毒1、花蕾用70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質量分數為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質量分數為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）5、無菌水沖洗3~5次

用于培養花藥，實際上多數未熟，由于它的外面有花萼、花瓣保護，通常處于無菌狀態，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。（二）材料的消毒1、花蕾用70%的酒精浸泡30秒為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。

為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？討論：為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微（三

）接種和培養

滅菌后花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養基上。在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受傷部位產生二倍體的愈傷組織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。（三）接種和培養滅菌后花蕾，要在無菌條件

通常每瓶接種花藥7-10個，溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

一般經過20-30天培養后，會發現花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時轉移到分化培養基上，以便進一步分化出再生植株。通常每瓶接種花藥7-10個，溫度控制在25℃

如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內就會產生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養基上，否則這些植株將很難分開。

在花藥培養中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現染色體倍性的變化。（主要原因是營養核和生殖核融合造成的。）故需對培養出來的植株作進一步的鑒定和篩選。如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內就會產植物組織培養技術與花藥培養技術的比較項目相同點不同點植物組織培養技術離體的植物組織經脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導出根，然后進行移栽。外植體為體細胞，染色體數無需加倍。花藥培養技術取材為花藥，培養的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復正常植株的染色體數，而且為純種。植物組織培養技術與花藥培養技術的比較項目相同點不同點植物組織課題成果評價選材是否恰當

選材是否成功是花藥培養成功的關鍵。應學會通過顯微鏡觀察處于適宜發育期的花粉。課題成果評價選材是否恰當課題成果評價無菌技術是否過關

如果出現了污染現象，說明某些操作步驟，如培養基滅菌、花蕾消毒或花藥接種等有問題。課題成果評價無菌技術是否過關課題成果評價接種是否成功

如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體，花藥培養的第一步就成功了。要適時轉換培養基，以便愈傷組織或胚狀體進一步分化成再生植株。課題成果評價接種是否成功練習1F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運用常規育種方法，將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米（aasusu）進行測交，可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣，耗時也較長，需要至少三年的選種和育種時間。練習1F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aa

如果利用花藥培養的技術，在F1代產生的花粉中就可能有Asu的組合，再將花粉植株進行染色體加倍，就可以直接得到紫色甜玉米的純合子（AAsusu）。這種方法可以大大縮短育種周期。如果利用花藥培養的技術，在F1代產生的花粉中練習2

植物組織培養技術與花藥培養技術的

相同之處是：培養基配制方法、無菌技術及接種操作等基本相同。不同之處在于：花藥培養的選材非常重要，需事先摸索時期適宜的花蕾；花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養基；花藥培養對培養基配方的要求更為嚴格。這些都使花藥培養的難度大為增加。練習2植物組織培養技術與花藥培養技術的相同之處是THEENDTHEEND月季花藥培養課件花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉

花粉是由花粉母細胞（小孢子母細胞）經過減數分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞。

花粉的發育要經歷：四分體時期、單核期、雙核期等階段。一、基礎知識（一）被子植物的花粉發育雄蕊花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉花粉是由花花粉粒花粉粒被子植物花粉的發育過程被子植物花粉的發育過程注意：①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細胞核和生殖細胞核。（精子在花粉管中形成，如棉花、桃、李、茶、楊、）②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細胞進行一次有絲分裂，形成兩個精子，這樣的花粉在成熟時，含有一個營養核和兩個精子。（如水稻、大麥、小麥、玉米、油菜等的花粉）③兩個精子和一個營養核的基因型相同。④4個小孢子減分有分4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有絲分裂8個精子1花粉母細胞注意：4個小孢子減分有分4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有絲分（二）產生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化

愈傷組織

花藥中的花粉脫分化

分化

叢芽

再分化

叢芽

誘導生根（二）產生花粉植株的兩種途徑①②移栽花藥中的花粉胚狀體脫分化體細胞胚（胚狀體）：

在組織培養過程中，某些體細胞在形態上轉變為與合子發育成的胚非常相似的結構，發育過程亦與合子胚類似，被稱為體細胞胚（胚狀體）。體細胞胚（胚狀體）：人工種子

又稱人造種子、合成種子或無性種子，就是將組織培養所產生的體細胞胚、不定芽、頂芽、腋芽或小鱗莖等繁殖體，包裹在能提供營養的膠囊（人造胚乳）里，再在外面包上一層具有保護功能和防止機械損傷的外膜（人造種皮），造成一種類似種子的結構，能在一定的條件下萌發生長，形成完整植株。人工種子又稱人造種子、合成種子或無性種(三)、影響花藥培養的因素1、材料的選擇不同植物同一植物的不同生理狀況（花期早期－初花期）合適的花粉發育期（單核居中期與靠邊期之間）此外，植株生長條件、材料低溫預處理、接種密度等2、培養基的組成(三)、影響花藥培養的因素1、材料的選擇

花期早期時的花藥比后期的更容易產生花粉植株。一般月季的花藥培養時間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。

選擇合適的花粉發育時期也是提高誘導成功率的重要因素。一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養成功率最高。

為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。1、材料的選擇花期早期時的花藥比后期的更容易2、培養基的組成

月季花的培養基配方

在1000mlMS培養基配方中添加2，4—D0.4mgKT0.2mgIAA4mg調節PH為5.82、培養基的組成月季花的培養基配方二、實驗操作（一）材料的選擇

選擇花藥時，一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發育期。

最常用的方法有醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。二、實驗操作（一）材料的選擇選擇花藥時（二）材料的消毒1、花蕾用70%的酒精浸泡30秒2、無菌水清洗3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4、放入質量分數為0.1%的氯化汞溶液中2~4分鐘（也可質量分數為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）5、無菌水沖洗3~5次

用于培養花藥，實際上多數未熟，由于它的外面有花萼、花瓣保護，通常處于無菌狀態，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。（二）材料的消毒1、花蕾用70%的酒精浸泡30秒為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。

為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？討論：為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？答：花瓣松動后，微（三

）接種和培養

滅菌后花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養基上。在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥（否則接種后，容易從受傷部位產生二倍體的愈傷組織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。（三）接種和培養滅菌后花蕾，要在無菌條件

通常每瓶接種花藥7-10個，溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

一般經過20-30天培養后，會發現花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時轉移到分化培養基上，以便進一步分化出再生植株。通常每瓶接種花藥7-10個，溫度控制在25℃

如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內就會產生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養基上，否則這些植株將很難分開。

在花藥培養中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現染色體倍性的變化。（主要原因是營養核和生殖核融合造成的。）故需對培養出來的植株作進一步的鑒定和篩選。如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內就會產植物組織培養技術與花藥培養技術的比較項目相同點不同點植物組織培養技術離體的植物組織經脫分化形成愈傷組織，再分化成叢芽，誘導出根，然后進行移栽。外植體為體細胞，染色體數無需加倍。花藥培養技術取材為花藥，培養的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加倍，恢復正常植株的染色體數，而且為純種。植物組織培養技術與花藥培養技術的比較項目相同點不同點植物組織課題成果評價選材是否恰當

選材是否成功是花藥培養成功的關鍵。應學會通過顯微鏡觀察處于適宜發育期的花粉。課題成果評價選材是否恰當課題成果評價無菌技術是否過關