菊花的組織培養新人教選修菊花的組織培養新人教選修1

通過必修課的學習，我們已經了解到大多綠色開花植物都是靠種子來繁殖的。那么，有沒有不用種子來培育植物的方法呢？組織培養營養繁殖扦插嫁接壓條

第1頁/共32頁通過必修課的學習，我們已經了解到大多綠色開花植2扦插嫁接壓條

第2頁/共32頁扦插嫁接壓條第2頁/共32頁3是指在人工培養基上，離體培養植物的器官、組織、細胞和原生質體，并使其生長、增殖、分化以及再生植株的技術。組織培養（一）植物組織培養的基本過程第3頁/共32頁是指在人工培養基上，離體培養植物的器官、組織、細胞和4（1）基礎知識細胞離體必要條件：一定的營養物質、激素和其他外界條件原理:細胞的全能性植物細胞具有全能性，即已分化的細胞，具有使后代細胞形成完整個體的潛能。②原理：①定義：生物體的每一個細胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質，都有發育成為完整個體所必需的全部基因第4頁/共32頁（1）基礎知識細胞離體必要條件：一定的營養物質、激素和其他外5細胞的分化概念：在個體發育中，相同細胞的后代在形態、結構、生理功能上發生穩定性差異的過程結果：形成不同的細胞和組織原因：基因在特定的時間和空間條件下的選擇性表達的結果第5頁/共32頁細胞的分化概念：在個體發育中，相同細胞的后代在形態、結構、生6離體的植物器官、組織、細胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體植物組織培養的基本過程第6頁/共32頁離體的植物器官、組織、細胞脫分化愈傷組織再分化根植物體植物組7愈傷組織第7頁/共32頁愈傷組織第7頁/共32頁8（二）影響植物組織培養的因素1.不同的植物組織，培養的難易程度差別很大。例如，煙草和胡蘿卜的組織培養較為容易，而枸杞愈傷組織的芽誘導就比較難。因此，植物材料的選擇直接關系到實驗的成敗。對于同一種植物材料，材料的年齡、保存時間的長短等也會影響實驗結果。菊花的組織培養，一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側枝。第8頁/共32頁（二）影響植物組織培養的因素1.不同的植物組織，培養的難易程92.離體的植物組織和細胞，對營養、環境等條件的要求相對特殊，需要配制適宜的培養基。常用的一種培養基是MS培養基。其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S;微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有機物，如甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素，以及蔗糖等。在配制好的MS培養基中，常常需要添加植物激素。第9頁/共32頁2.離體的植物組織和細胞，對營養、環境等條件的要求相對特殊，10MS固體培養基成分及比例第10頁/共32頁MS固體培養基成分及比例第10頁/共32頁11微生物培養基以有機營養為主。與微生物的培養不同，MS培養基則需提供大量無機營養，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。閱讀課文，思考以下問題1.同微生物培養基相比，MS培養基的配方有哪些明顯的不同？2、你認為組織培養過程中，成功的關鍵有哪些？這些步驟的適宜條件是什么？組織的脫分化及愈傷組織的再分化。植物組織培養過程中，影響植物細胞脫分化、再分化的最重要因素是植物激素，細胞分裂素與生長素之間的濃度比可以調控植株組培過程中芽和根的形成。第11頁/共32頁微生物培養基以有機營養為主。與微生物的培養不同，MS培養123.植物激素濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，會影響實驗結果。植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。按照不同的順序使用這兩類激素，會得到不同的實驗結果。第12頁/共32頁3.植物激素濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，會影響實驗13當同時使用這兩類激素時，兩者用量的比例決定著發育的方向，是愈傷組織、長根還是長芽。如為了促進芽器官的分化，應除去或降低生長素的濃度，或者調整培養基中生長素與細胞分裂素的比例。

高利于根的分化，抑制芽的形成生長素/細胞分裂素適中利于促進愈傷組織的形成低利于芽的分化，抑制根的形成4.除了上述因素外，PH、溫度、光照等條件也很重要。不同的植物對各種條件的要求往往不同。進行菊花的組織培養，一般將PH值控制在5.8左右，溫度控制在18-22℃，并且每日用日光燈照射12h。第13頁/共32頁當同時使用這兩類激素時，兩者用量的比例決定著發育的方向，是愈14生長素/細胞分裂素高有利于根的分化、抑制芽的形成低有利于芽的分化、抑制根的形成第14頁/共32頁生長素/細胞分裂素高有利于根的分化、抑制芽的形成第115同常規的無性繁殖方法相比，組織培養快速繁殖法主要具有以下優點：（1）快速。采用常規的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生產幾株或幾十株，但用組織培養的方法則每年可以繁殖出幾萬甚至數百萬的小植株。（2）周年生產。花卉組織培養快速繁殖是在實驗室中進行，因條件可控，所以不受季節限制，可以全年進行連續生產。而常規的無性繁殖則受季節限制，只能在花卉生長季節進行繁殖。（3）經濟效益高。花卉組織培養快速繁殖所需要的空間小，在一個200平方米的培養室內一年可生產試管苗上百萬株。如按每株1元計算，每年產值上百萬元。（4）以組織培養繁殖的種苗與母株有著相同的遺傳基因。所以使用這項技術可讓優良的品種不斷地延續。組織培養與常規繁殖相比優點眾多第15頁/共32頁同常規的無性繁殖方法相比，組織培養快速繁殖法主要具有以下16（一）制備MS固體培養基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養（五）移栽（六）栽培二、實驗操作第16頁/共32頁（一）制備MS固體培養基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養17二、實驗操作（一）制備MS固體培養基MS培養基包括20多種營養成分，實驗室一般使用4。C保存配制好的培養基母液來制備1、配置各種母液為了避免每次配制培養基都要稱量幾十種成分，減少工作量，可以將各種成分按比例配置成濃縮液，即培養基母液，一般將常用藥品配成比所需濃度高10－100倍的母液。使用時，根據濃縮比例計算用量，加水稀釋第17頁/共32頁二、實驗操作（一）制備MS固體培養基MS培養基包括20多種營18①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機物一般可按1mg/ml的質量濃度單獨配制成母液③用母液配制培養基時，需要根據各種母液的濃縮倍數，計算用量第18頁/共32頁①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存1950第19頁/共32頁50第19頁/共32頁202、配置培養基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①配制培養液配制1LMS培養基，先將稱好的瓊脂加800ml蒸餾水，加熱使瓊脂溶化，然后加入蔗糖30g，取配制好的大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，依次加入，加蒸餾水定容至1000ml②調PH③培養基的分裝由于菊花的莖段的組織培養比較容易，因此不必添加植物激素第20頁/共32頁2、配置培養基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①213、滅菌分裝好的培養基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右第21頁/共32頁3、滅菌分裝好的培養基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌1、選22②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數為70％的酒精中搖動2－3次，持續6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質量分數為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液第22頁/共32頁②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數為23（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至關重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。第23頁/共32頁（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至243、材料的切取和接種將裝有培養基的錐形瓶整齊地排列在酒精燈左側。將消過毒的菊花莖段在無菌培養皿中切成小段（長約0.5-1cm）。左手持錐形瓶。右手拉開捆扎錐形瓶的繩子，并將封口膜攥在右手手心，以避免封口膜接觸瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋轉通過火焰，右手用鑷子夾取菊花莖段，放入培養基中。插入時應注意不要倒插。每瓶接種6－8塊外植體。接種后，將封口膜重新扎好第24頁/共32頁3、材料的切取和接種將裝有培養基的錐形瓶整齊地排列在酒精燈左25第25頁/共32頁第25頁/共32頁264、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分數為75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精燈火焰上燒一遍，冷卻后再接種②外植體在培養基中要分布均勻，放置外植體數量根據錐形瓶的大小確定，一般胡蘿卜3－4塊，菊的莖或葉6－8塊，也不要太少，以充分利用培養基中的營養成分和光照條件③插入時應注意方向，不要倒插。莖段、莖尖基部插入培養基利于吸收水分和養分第26頁/共32頁4、接種注意事項①每接種一塊外植體前，鑷子需放入體積分數為727（四）培養接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養，培養期間應定期消毒。培養溫度控制在18-22，并且每日用日光燈光照12h。第27頁/共32頁（四）培養接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養，培養期間應定期28（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應先打開培養瓶的封口膜，讓試管苗在培養間生長幾日1、打開封口膜2、清洗轉移用流水清洗根部的培養基，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環境下生活一段時間第28頁/共32頁（五）移栽移栽生根的菊花試管苗之前，應先打開培養瓶的封口膜，29（六）栽培3、移栽珍珠巖：固體基質型，含水量高、蓄水性強、透性好，適合栽培幼苗長壯后，移栽到土壤中幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時澆水、施肥，直至開花第29頁/共32頁（六）栽培3、移栽珍珠巖：固體基質型，含水量高、蓄水性強、透30第30頁/共32頁第30頁/共32頁31第31頁/共32頁第31頁/共32頁32感謝您的觀看。第32頁/共32頁感謝您的觀看。第32頁/共32頁33菊花的組織培養新人教選修菊花的組織培養新人教選修34

通過必修課的學習，我們已經了解到大多綠色開花植物都是靠種子來繁殖的。那么，有沒有不用種子來培育植物的方法呢？組織培養營養繁殖扦插嫁接壓條

第1頁/共32頁通過必修課的學習，我們已經了解到大多綠色開花植35扦插嫁接壓條

第2頁/共32頁扦插嫁接壓條第2頁/共32頁36是指在人工培養基上，離體培養植物的器官、組織、細胞和原生質體，并使其生長、增殖、分化以及再生植株的技術。組織培養（一）植物組織培養的基本過程第3頁/共32頁是指在人工培養基上，離體培養植物的器官、組織、細胞和37（1）基礎知識細胞離體必要條件：一定的營養物質、激素和其他外界條件原理:細胞的全能性植物細胞具有全能性，即已分化的細胞，具有使后代細胞形成完整個體的潛能。②原理：①定義：生物體的每一個細胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質，都有發育成為完整個體所必需的全部基因第4頁/共32頁（1）基礎知識細胞離體必要條件：一定的營養物質、激素和其他外38細胞的分化概念：在個體發育中，相同細胞的后代在形態、結構、生理功能上發生穩定性差異的過程結果：形成不同的細胞和組織原因：基因在特定的時間和空間條件下的選擇性表達的結果第5頁/共32頁細胞的分化概念：在個體發育中，相同細胞的后代在形態、結構、生39離體的植物器官、組織、細胞脫分化愈傷組織再分化根芽植物體植物組織培養的基本過程第6頁/共32頁離體的植物器官、組織、細胞脫分化愈傷組織再分化根植物體植物組40愈傷組織第7頁/共32頁愈傷組織第7頁/共32頁41（二）影響植物組織培養的因素1.不同的植物組織，培養的難易程度差別很大。例如，煙草和胡蘿卜的組織培養較為容易，而枸杞愈傷組織的芽誘導就比較難。因此，植物材料的選擇直接關系到實驗的成敗。對于同一種植物材料，材料的年齡、保存時間的長短等也會影響實驗結果。菊花的組織培養，一般選擇未開花植株的莖上部新萌生的側枝。第8頁/共32頁（二）影響植物組織培養的因素1.不同的植物組織，培養的難易程422.離體的植物組織和細胞，對營養、環境等條件的要求相對特殊，需要配制適宜的培養基。常用的一種培養基是MS培養基。其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S;微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有機物，如甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素，以及蔗糖等。在配制好的MS培養基中，常常需要添加植物激素。第9頁/共32頁2.離體的植物組織和細胞，對營養、環境等條件的要求相對特殊，43MS固體培養基成分及比例第10頁/共32頁MS固體培養基成分及比例第10頁/共32頁44微生物培養基以有機營養為主。與微生物的培養不同，MS培養基則需提供大量無機營養，無機鹽混合物包括植物生長必須的大量元素和微量元素兩大類。閱讀課文，思考以下問題1.同微生物培養基相比，MS培養基的配方有哪些明顯的不同？2、你認為組織培養過程中，成功的關鍵有哪些？這些步驟的適宜條件是什么？組織的脫分化及愈傷組織的再分化。植物組織培養過程中，影響植物細胞脫分化、再分化的最重要因素是植物激素，細胞分裂素與生長素之間的濃度比可以調控植株組培過程中芽和根的形成。第11頁/共32頁微生物培養基以有機營養為主。與微生物的培養不同，MS培養453.植物激素濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，會影響實驗結果。植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。按照不同的順序使用這兩類激素，會得到不同的實驗結果。第12頁/共32頁3.植物激素濃度、使用的先后順序以及用量的比例等，會影響實驗46當同時使用這兩類激素時，兩者用量的比例決定著發育的方向，是愈傷組織、長根還是長芽。如為了促進芽器官的分化，應除去或降低生長素的濃度，或者調整培養基中生長素與細胞分裂素的比例。

高利于根的分化，抑制芽的形成生長素/細胞分裂素適中利于促進愈傷組織的形成低利于芽的分化，抑制根的形成4.除了上述因素外，PH、溫度、光照等條件也很重要。不同的植物對各種條件的要求往往不同。進行菊花的組織培養，一般將PH值控制在5.8左右，溫度控制在18-22℃，并且每日用日光燈照射12h。第13頁/共32頁當同時使用這兩類激素時，兩者用量的比例決定著發育的方向，是愈47生長素/細胞分裂素高有利于根的分化、抑制芽的形成低有利于芽的分化、抑制根的形成第14頁/共32頁生長素/細胞分裂素高有利于根的分化、抑制芽的形成第148同常規的無性繁殖方法相比，組織培養快速繁殖法主要具有以下優點：（1）快速。采用常規的方法如分株法，一棵花卉一年一般只能生產幾株或幾十株，但用組織培養的方法則每年可以繁殖出幾萬甚至數百萬的小植株。（2）周年生產。花卉組織培養快速繁殖是在實驗室中進行，因條件可控，所以不受季節限制，可以全年進行連續生產。而常規的無性繁殖則受季節限制，只能在花卉生長季節進行繁殖。（3）經濟效益高。花卉組織培養快速繁殖所需要的空間小，在一個200平方米的培養室內一年可生產試管苗上百萬株。如按每株1元計算，每年產值上百萬元。（4）以組織培養繁殖的種苗與母株有著相同的遺傳基因。所以使用這項技術可讓優良的品種不斷地延續。組織培養與常規繁殖相比優點眾多第15頁/共32頁同常規的無性繁殖方法相比，組織培養快速繁殖法主要具有以下49（一）制備MS固體培養基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養（五）移栽（六）栽培二、實驗操作第16頁/共32頁（一）制備MS固體培養基（二）外植體消毒（三）接種（四）培養50二、實驗操作（一）制備MS固體培養基MS培養基包括20多種營養成分，實驗室一般使用4。C保存配制好的培養基母液來制備1、配置各種母液為了避免每次配制培養基都要稱量幾十種成分，減少工作量，可以將各種成分按比例配置成濃縮液，即培養基母液，一般將常用藥品配成比所需濃度高10－100倍的母液。使用時，根據濃縮比例計算用量，加水稀釋第17頁/共32頁二、實驗操作（一）制備MS固體培養基MS培養基包括20多種營51①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存②激素類、維生素類以及用量較小的有機物一般可按1mg/ml的質量濃度單獨配制成母液③用母液配制培養基時，需要根據各種母液的濃縮倍數，計算用量第18頁/共32頁①無機物中大量元素濃縮10倍，微量元素濃縮100倍，常溫保存5250第19頁/共32頁50第19頁/共32頁532、配置培養基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①配制培養液配制1LMS培養基，先將稱好的瓊脂加800ml蒸餾水，加熱使瓊脂溶化，然后加入蔗糖30g，取配制好的大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，依次加入，加蒸餾水定容至1000ml②調PH③培養基的分裝由于菊花的莖段的組織培養比較容易，因此不必添加植物激素第20頁/共32頁2、配置培養基分裝到錐形瓶中，每瓶分裝50ml或100ml①543、滅菌分裝好的培養基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌1、選材：菊花莖段，取生長旺盛的嫩枝（二）外植體消毒2、消毒①流水沖洗菊花莖段用流水沖洗后可少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右第21頁/共32頁3、滅菌分裝好的培養基連同其他器械一起進行高壓蒸汽滅菌1、選55②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數為70％的酒精中搖動2－3次，持續6－7s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗③消毒液處理取出后用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入質量分數為0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在無菌水中至少清洗3次，漂凈消毒液第22頁/共32頁②酒精處理用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數為56（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至關重要的。用70％的酒精噴霧使空氣消毒，酒精或新潔爾滅搽洗工作臺并用紫外線照射20分鐘1、接種室消毒2、無菌操作要求操作要在酒精燈火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼燒滅菌，接種后立即蓋好瓶蓋。第23頁/共32頁（三）接種污染的主要來源是空氣中的細菌和孢子，接種室消毒是至