生殖輔助技術人體解剖學與組織胚胎學系生殖輔助技術1生育是人類的基本生理功能，是人類的一種本能。生育是人類的基本生理功能，是人類的一種本能。2高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）3一、男性生育能力明顯下降

國家計劃生育委員會科學技術研究所張樹成等人在論文中指出，男性精液質量隨不同年代呈明顯降低，而中國男性精液質量也呈明顯下降趨勢。一、男性生育能力明顯下降

國家計劃生育委員4

張樹成等人得出了觸目驚心的結論：男性精液質量明顯下降。其中以精子數目的降低最為明顯，降低40%以上，精子活動率降低8.4%；精子正常形態降低了7.3%；精液量降低了4.9%。張樹成等人得出了觸目驚心的結論：男性精液質5為什么男性的生育力竟下降得這么厲害？為什么男性的生育力竟下降得這么厲害？6張樹成等人認為主要是環境因素所致，即環境對生育力的影響，男性比女性更敏感。

張樹成等人認為主要是環境因素所致，即環境對生育力的影響，男性7生殖輔助技術：人工授精體外授精與胚胎移植顯微授精技術配子輸卵管移植供卵供胚胎種植前遺傳學診斷生殖輔助技術：人工授精8人工授精定義：由醫師將精子注入到女性生殖道內，包括陰道內、宮頸內、宮腔內、輸卵管內甚至卵泡內的精子注射。分類：1、按精子來源：

夫精人工授精（AIH）：artificialinseminationwithhusband’ssperm供精人工授精（AID）：2、按精子的注射部位：人工授精定義：由醫師將精子注入到女性生殖道內，包括陰道內、宮9人工授精的適應癥一、男方因素存在阻礙正常性交時精子進入陰道的解剖異常因素：精神、神經因素：中度精液異常：人工授精的適應癥一、男方因素10二、女方因素：存在阻礙精子在女性生殖道運行的因素：陰道與宮頸狹窄等宮頸因素：如宮頸粘液二、女方因素：11人工授精實施要素：足夠數量和活力的正常形態精子正常的排卵至少有一條輸卵管通暢并且功能正常人工授精實施要素：足夠數量和活力的正常形態精子12人工授精的方法：一、女性的準備自然周期人工授精：將精子在最接近排卵的時間段注入女性生殖道內（基礎體溫測量、B超檢測、尿LH測試和宮頸粘液評分）控制性誘導排卵：FSH、hCG和黃體酮其他準備：陰道清潔度、盆腔檢查和B超、輸卵管通水、輸卵管造影等人工授精的方法：一、女性的準備13二、男性精子的準備新鮮精液：凍存精子的準備：精子的洗滌二、男性精子的準備14高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）15方法：早期的不清洗后穹隆注射法宮頸周圍或宮頸管內人工授精：0.5-1ml宮頸管，其余在陰道前穹隆加用宮帽人工授精宮腔內人工授精：常用、成功率較高方法：早期的不清洗后穹隆注射法16供精人工授精AID的適應癥不可逆的無精子癥，嚴重的少精癥、弱精癥和畸精癥；男方因輸精管結扎后復通失敗；射精障礙男方和（或）家族有不宜生育的嚴重遺傳性疾病。對1-4,要解釋同意后，行AID；供精人工授精AID的適應癥17（一）女方條件年齡在生育期身體健康，完全能承受妊娠卵巢功能正常和盆腔檢查正常輸卵管通暢（一）女方條件年齡在生育期18（二）供精者條件年齡、身高、五官等無全身急慢性病內外生殖器正常無性傳播性疾病無各型肝炎本人和直系血親無遺傳病ABO及RH血型檢查精液檢查（二）供精者條件年齡、身高、五官等19（三）供精者的篩選程序

1、最初評估：

供精者的年齡必須是在22－45歲之間，能真實提供本人及家族成員的一般病史和遺傳病史，回答醫師提出的其它相關問題，按要求提供精液標本以供檢查。精子庫人員將與供精者面談。供精者不應屬于AIDS的高危人群，沒有性傳播性疾病史，沒有全身性疾病和嚴重器質性疾病，無長期接觸放射線和有毒物質，無吸毒、酗酒、同性戀等行為。2、精液分析：

每次精液標本都必須用世界衛生組織規范方法進行分析，包括精子密度、活動率、形態學等指標，這些標本在冷凍前后均要進行分析比較，解凍后的精子活動率要達到40%以上。

（三）供精者的篩選程序1、最初評估：

供精者的年齡203、感染性疾病檢測：

所有的供精者都要進行血清HIV抗體、乙肝兩對半、丙肝抗體、梅毒、巨細胞病毒抗體等檢測。對精液進行淋病、支原體、衣原體檢查和細菌培養。4、醫學和遺傳評價：

每個供精者都將進行一次體檢，進行血型以及RH檢測，還要進行血細胞染色體檢查。他們的醫療和遺傳史將被遺傳醫生進行評價，廣東省計劃生育專科醫院人類精子庫還根據廣東省遺傳病的發病特點，增加對供精者進行地中海貧血和葡萄糖－6－磷酸脫氫酶缺乏癥的篩查。必要時還進行供精者的心理學評估。5、精液凍融復蘇檢查：

成為供精者后，每次精液標本在冷凍前后均要進行評價，所有沒有達到供精最低標準的標本都將被棄去。所有的標本都要存放足夠的時間（180天的檢疫期），供精者要重復作感染性疾病的檢測。

3、感染性疾病檢測：

所有的供精者都要進行血清HIV21（四）實驗室檢查1、染色體檢查：供精者必須染色體常規核型分析正常。2、傳染性疾病的檢查

①供精者乙肝抗原抗體及丙肝抗體檢查正常。

②供精者梅毒、淋病、艾滋病檢查陰性。

③供精者衣原體、支原體、巨細胞病毒檢查陰性。3、精液常規分析及供精的質量要求

對供精者精液要做常規檢查。取精前要禁欲一周。精液質量要求高于世界衛生組織的標準：精液液化時間10-60分鐘，容積為2-6毫升，密度大于60x106/毫升，成活率大于60%，畸形率不大于30%。

精液進行常規細菌培養，以排除致病菌感染。4、ABO血型及Rh血型（四）實驗室檢查1、染色體檢查：供精者必須染色體常規核型分析22（五）供精者知情同意書

1、提供精液的目的是為了治療不育癥，如同獻血一樣，是一種人道主義行為；2、提供精液應完全出于自愿，是無償的，只能獲得誤工、誤餐及交通補貼等，不能以經濟利益而為之；3、精液只能提供給國家衛生部批準的人類精子庫，而不能提供給其他單位或個人；4、在提供精液前要經過嚴格的健康檢查，供精者要如實提供病史配合體格檢查，提供血液、精液等標本進行檢測。健康檢查不合格的不能作為供精者，健康檢查體格者與人類精子庫簽訂《供精協議書》后，才能作為供精者；（五）供精者知情同意書1、提供精液的目的是為了治療不育癥，235、供精者的所有資料都由人類精子庫專人保密保存，不會向受精者泄露，更不會向其他人泄露；6、供精者至少提供30份精液標本；7、供精者的精液，如果已有5位受精者受孕，該供精者的精液標本全部廢除，今后亦不再作為供精者；8、供精者不能追問受精者及出生后代的任何情況，對出生后代沒有任何權利，也不承擔任何義務。5、供精者的所有資料都由人類精子庫專人保密保存，不會向受精者24（六）捐精流程

1.首先進行捐精咨詢。2.引導排精，作精液檢查。3.合格后抽血化驗，約7～10天出報告。

4.精液與化驗正常者開始捐精，捐精前簽訂知情同意書。5.每3－5天前來捐精一次，每次均給予相應的交通、營養等補貼。6.六個月后再次復查，給予交通、營養等補貼。

（六）捐精流程1.首先進行捐精咨詢。25（七）AID方法女方準備：檢查正常有關文件的簽署精液準備授精方法：1ml（陰道部宮頸處或宮頸管內）隨訪（七）AID方法女方準備：檢查正常26體外授精和胚胎移植

（invitrofertilizationandembryotransfer）原理：將女方卵巢內的成熟卵母細胞取出，在體外與來自配偶的精子共同培養，發生授精過程。受精卵發育到胚胎階段后，再將其種植到子宮腔中繼續發育生長成胎兒。體外授精和胚胎移植

（invitrofertilizat27（一）適應癥女方各種因素導致的配子運輸障礙子宮內膜異位癥男方因素：少、弱、畸精癥等原因不明性不孕癥頑固性多囊卵巢綜合征（一）適應癥女方各種因素導致的配子運輸障礙281、控制性超排卵在實施IVF-ET手術中，利用促排卵藥物來增強與改善現存卵巢功能，企圖達到不受自然周期所限制，獲取多個健康卵子提供受精后胚胎移植并盡可能使黃體與內膜功能同時能對妊娠發生與妊娠維持想適應。（二）基本步驟1、控制性超排卵（二）基本步驟29高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）30高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）31高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）322、取卵在陰道B超引導下用穿刺針抽取卵泡。3、找卵在顯微鏡下將抽取的卵泡液置于器皿中迅速尋找卵冠丘復合體（OCCCS）。2、取卵33高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）34高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）354、受精（精液處理同人工授精）卵冠丘復合體經孵育4~6h后加入適當數量的獲能精子進行授精。5、觀察

16h后剝除顆粒細胞，鏡下觀察見兩原核者為受精。繼續培養36~42小時觀察胚胎分裂到4~8細胞可考慮行胚胎移植。需要者也可培養到第5~6天，做囊胚移植。4、受精（精液處理同人工授精）365、種植將胚胎吸入移植管中，經宮頸管將胚胎送入宮腔臥床1~3h。6、黃體支持移植后注射黃體酮，14天后行血β-hCG測定確定是否妊娠。5、種植37IVFIVF38高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）39高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）40胚胎的宮內移植移植時間：體外受精后的42-45h。現多在體外受精后3天，有時培養到5天至囊胚。移植方法：檢查是否移植進去。胚胎的宮內移植41高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）42代孕母親（衛生部暫禁）先天性子宮缺如；因病行子宮切除術；女方有妊娠或分娩禁忌癥；代孕母親（衛生部暫禁）先天性子宮缺如；43胚胎冷凍1983年人類第一次冷凍胚胎成功適應癥IVF或ICSI治療中的多余胚胎；胚胎移植發生困難；胚胎種植前診斷等待結果；人工贈卵等待受者子宮內膜同步；建立胚胎庫；胚胎冷凍1983年人類第一次冷凍胚胎成功44顯微操作技術顯微受精技術：透明帶部分切割、透明帶下受精法及單精子卵胞漿顯微注射極體與卵裂球活檢卵漿置換、細胞核移植輔助孵出嵌合體技術顯微操作技術顯微受精技術：透明帶部分切割、透明帶下受精法及單45高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）46機械法PZD機械法PZD47顯微操作輔助受精顯微操作輔助受精48ICSI受精的生物學特點：正常受精：產生頂體反應的精子與卵膜的融合，卵子激活以及女性、男性原核形成。ICSI：注射時精子的頂體狀態不明，而卵與精子質膜的融合也不存在。單精子卵漿內注射ICSI受精的生物學特點：正常受精：產生頂體反應的精子與卵膜49適應癥嚴重少精癥弱畸精癥少弱畸精癥無精癥（阻塞性及非阻塞性）以往IVF時卵母細胞均不受精或受精率低下其他：適應癥50ICSI的禁忌癥染色體異常嚴重先天畸形ICSI的禁忌癥染色體異常51ICSI的技術操作精子來源及處理手淫法取精。附睪取精:適用于阻塞性無精癥。近期有人用經皮精子抽吸法。ICSI的技術操作精子來源及處理52PESA法附睪取精PESA法附睪取精53MESA及附睪精子MESA及附睪精子54

睪丸取精：主要適用于非阻塞性無精癥，切取一小塊睪丸組織的方法獲取精子或精子細胞（開放式活檢）。也可用細針組織抽吸睪丸活檢法。睪丸取精：主要適用于非阻塞性無精癥，切取一小塊睪丸組織的55活檢槍及抽吸法睪丸取精活檢槍及抽吸法睪丸取精56卵子的來源與處理卵子一般在促超排卵后,經陰道B超介導,用16G或17G穿刺針經陰道獲取。取卵后4小時，進行去卵丘結構處理。卵子的來源與處理57設備；顯微操作皿的準備；顯微注射；精子制動與獲取；固定卵子與注射；顯微注射顯微注射58設備設備59高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）60ICSI示意圖ICSI示意圖61ICSI操作過程ICSI操作過程62ICSI過程(A)ICSI過程(A)63ICSI過程(B)ICSI過程(B)64注射15-18小時后，檢查是否受精（ICSI后精卵結合過程一般較正常為快，6小時內33%可出現原核，8-20小時89%-91%出現原核）。受精卵繼續培養24小時，觀察有無卵裂,然后經陰道移植3-4個質量優良的胚胎。剩余胚胎冷凍保存。注射15-18小時后，檢查是否受精（ICSI后精卵結合過程65高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）66高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）67ICSI妊娠的后代隨訪對ICSI安全性的憂慮：ICSI操作對卵子是具創傷性的；ICSI在全面的動物實驗之前就廣泛應用于人類；選用的精子原是屬于被自然淘汰的；睪丸采集的精子可能未發育成熟，基因印跡尚未發育完成；少弱及無精子的缺陷是否會殃及后代。ICSI妊娠的后代隨訪對ICSI安全性的憂慮：68輔助“破殼”輔助“破殼”69輔助孵出(AH)8細胞期AH晚期囊胚AH輔助孵出(AH)8細胞期AH晚期囊胚AH70高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）71種植前遺傳學診斷種植前遺傳學診斷721.PGD的指征:不孕夫婦中女方年齡較大(如>35歲,也有人認為年齡更大者)；不孕夫婦患X-伴性遺傳病或為X-伴性遺傳病的攜帶者，有X-伴性遺傳病家族史;胚胎質量差，反復IVF失敗；胚胎分裂過快；嚴重男性因素不育；1.PGD的指征:不孕夫婦中女方年齡較大(如>35歲,73夫婦中任何一方或雙方有染色體核型異常(數目及結構異常)；習慣性流產患者；不孕夫婦中一方或雙方患有已明確為基因突變所致疾病(單基因遺傳病)，或為攜帶者，或有家族史者，如染色體顯性遺傳病；染色體微缺失綜合征；與精子發生相關的染色體微缺失。

夫婦中任何一方或雙方有染色體核型異常(數目及結構異常)；742.PGD的方法取材:內徑為5~40m的活檢針。極體、2-10細胞(或更多)胚胎的卵裂球細胞、胚囊的壁滋養外胚層細胞。2.PGD的方法取材:內徑為5~40m的活檢針。75取卵裂球過程取卵裂球過程76卵裂球活檢卵裂球活檢77高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）78聚合酶鏈反應(PCR)：單細胞PCR、巢式PCR、半巢式PCR，結合(linkage)PCR，熒光PCR等。PCR的擴增成功率在90%以上，個別71%，極體66.1%左右。PCR的優點：需要樣本量少，快速。聚合酶鏈反應(PCR)：79高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）80熒光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，FISH)固定，特異探針(已標上熒光素)去雜交標記物，熒光顯微鏡下觀察有無發出不同顏色熒光的亮點及數目以了解該極體/細胞是否正常。人類22種常染色體及X，Y染色體的探針均已商品化針對許多致病基因，基因突變位點的探針也已商品化。自行制備針對某一患者的特異探針。一次最多可雜交5-7種探針(不同顏色)。重復FISH的方法，常檢測X,Y,1,5,7,8,11,13,16,18,21,22號等較常發生異常的染色體。熒光原位雜交(Fluorescenceinsituh81高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）824.PGD發展評估及展望PGD產生之前的遺傳性疾病的診斷、問題；PGD優勢：可以避免終止妊娠的痛苦和道德上的問題。提高了在高危夫婦中篩選出正常胚胎的效率。累積妊娠率優于自然周期。目前結果：不影響種植前胚胎的發育；提高種植率，降低流產率；PGD后的產科結果與常規IVF無明顯區別。4.PGD發展評估及展望PGD產生之前的遺傳性疾病的診斷83PGD發展相對緩慢的原因，與ICSI比較PCR、FISH等方法的局限，嵌合體診斷困難，早期胚胎細胞數量減少，極體PGD的局限。大眾對PGD的看法與接受程度。相應的法律、法規。PGD發展形勢喜人。PGD與圍產診斷的互補和相輔相成。PGD發展相對緩慢的原因，與ICSI比較84卵漿置換卵漿置換85高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）86輔助生育技術的發展方向提高妊娠率和活產率，幫助不孕夫婦獲得孩子；實現真正的生育調控和計劃生育；研究配子和胚胎發生發育的調控機制，發現人類生殖的奧秘；研究輔助生育技術中的倫理問題，制定相應的法規和法律；研究人類克隆問題。輔助生育技術的發展方向提高妊娠率和活產率，幫助不孕夫婦獲得孩87生殖輔助技術人體解剖學與組織胚胎學系生殖輔助技術88生育是人類的基本生理功能，是人類的一種本能。生育是人類的基本生理功能，是人類的一種本能。89高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）90一、男性生育能力明顯下降

國家計劃生育委員會科學技術研究所張樹成等人在論文中指出，男性精液質量隨不同年代呈明顯降低，而中國男性精液質量也呈明顯下降趨勢。一、男性生育能力明顯下降

國家計劃生育委員91

張樹成等人得出了觸目驚心的結論：男性精液質量明顯下降。其中以精子數目的降低最為明顯，降低40%以上，精子活動率降低8.4%；精子正常形態降低了7.3%；精液量降低了4.9%。張樹成等人得出了觸目驚心的結論：男性精液質92為什么男性的生育力竟下降得這么厲害？為什么男性的生育力竟下降得這么厲害？93張樹成等人認為主要是環境因素所致，即環境對生育力的影響，男性比女性更敏感。

張樹成等人認為主要是環境因素所致，即環境對生育力的影響，男性94生殖輔助技術：人工授精體外授精與胚胎移植顯微授精技術配子輸卵管移植供卵供胚胎種植前遺傳學診斷生殖輔助技術：人工授精95人工授精定義：由醫師將精子注入到女性生殖道內，包括陰道內、宮頸內、宮腔內、輸卵管內甚至卵泡內的精子注射。分類：1、按精子來源：

夫精人工授精（AIH）：artificialinseminationwithhusband’ssperm供精人工授精（AID）：2、按精子的注射部位：人工授精定義：由醫師將精子注入到女性生殖道內，包括陰道內、宮96人工授精的適應癥一、男方因素存在阻礙正常性交時精子進入陰道的解剖異常因素：精神、神經因素：中度精液異常：人工授精的適應癥一、男方因素97二、女方因素：存在阻礙精子在女性生殖道運行的因素：陰道與宮頸狹窄等宮頸因素：如宮頸粘液二、女方因素：98人工授精實施要素：足夠數量和活力的正常形態精子正常的排卵至少有一條輸卵管通暢并且功能正常人工授精實施要素：足夠數量和活力的正常形態精子99人工授精的方法：一、女性的準備自然周期人工授精：將精子在最接近排卵的時間段注入女性生殖道內（基礎體溫測量、B超檢測、尿LH測試和宮頸粘液評分）控制性誘導排卵：FSH、hCG和黃體酮其他準備：陰道清潔度、盆腔檢查和B超、輸卵管通水、輸卵管造影等人工授精的方法：一、女性的準備100二、男性精子的準備新鮮精液：凍存精子的準備：精子的洗滌二、男性精子的準備101高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）102方法：早期的不清洗后穹隆注射法宮頸周圍或宮頸管內人工授精：0.5-1ml宮頸管，其余在陰道前穹隆加用宮帽人工授精宮腔內人工授精：常用、成功率較高方法：早期的不清洗后穹隆注射法103供精人工授精AID的適應癥不可逆的無精子癥，嚴重的少精癥、弱精癥和畸精癥；男方因輸精管結扎后復通失敗；射精障礙男方和（或）家族有不宜生育的嚴重遺傳性疾病。對1-4,要解釋同意后，行AID；供精人工授精AID的適應癥104（一）女方條件年齡在生育期身體健康，完全能承受妊娠卵巢功能正常和盆腔檢查正常輸卵管通暢（一）女方條件年齡在生育期105（二）供精者條件年齡、身高、五官等無全身急慢性病內外生殖器正常無性傳播性疾病無各型肝炎本人和直系血親無遺傳病ABO及RH血型檢查精液檢查（二）供精者條件年齡、身高、五官等106（三）供精者的篩選程序

1、最初評估：

供精者的年齡必須是在22－45歲之間，能真實提供本人及家族成員的一般病史和遺傳病史，回答醫師提出的其它相關問題，按要求提供精液標本以供檢查。精子庫人員將與供精者面談。供精者不應屬于AIDS的高危人群，沒有性傳播性疾病史，沒有全身性疾病和嚴重器質性疾病，無長期接觸放射線和有毒物質，無吸毒、酗酒、同性戀等行為。2、精液分析：

每次精液標本都必須用世界衛生組織規范方法進行分析，包括精子密度、活動率、形態學等指標，這些標本在冷凍前后均要進行分析比較，解凍后的精子活動率要達到40%以上。

（三）供精者的篩選程序1、最初評估：

供精者的年齡1073、感染性疾病檢測：

所有的供精者都要進行血清HIV抗體、乙肝兩對半、丙肝抗體、梅毒、巨細胞病毒抗體等檢測。對精液進行淋病、支原體、衣原體檢查和細菌培養。4、醫學和遺傳評價：

每個供精者都將進行一次體檢，進行血型以及RH檢測，還要進行血細胞染色體檢查。他們的醫療和遺傳史將被遺傳醫生進行評價，廣東省計劃生育專科醫院人類精子庫還根據廣東省遺傳病的發病特點，增加對供精者進行地中海貧血和葡萄糖－6－磷酸脫氫酶缺乏癥的篩查。必要時還進行供精者的心理學評估。5、精液凍融復蘇檢查：

成為供精者后，每次精液標本在冷凍前后均要進行評價，所有沒有達到供精最低標準的標本都將被棄去。所有的標本都要存放足夠的時間（180天的檢疫期），供精者要重復作感染性疾病的檢測。

3、感染性疾病檢測：

所有的供精者都要進行血清HIV108（四）實驗室檢查1、染色體檢查：供精者必須染色體常規核型分析正常。2、傳染性疾病的檢查

①供精者乙肝抗原抗體及丙肝抗體檢查正常。

②供精者梅毒、淋病、艾滋病檢查陰性。

③供精者衣原體、支原體、巨細胞病毒檢查陰性。3、精液常規分析及供精的質量要求

對供精者精液要做常規檢查。取精前要禁欲一周。精液質量要求高于世界衛生組織的標準：精液液化時間10-60分鐘，容積為2-6毫升，密度大于60x106/毫升，成活率大于60%，畸形率不大于30%。

精液進行常規細菌培養，以排除致病菌感染。4、ABO血型及Rh血型（四）實驗室檢查1、染色體檢查：供精者必須染色體常規核型分析109（五）供精者知情同意書

1、提供精液的目的是為了治療不育癥，如同獻血一樣，是一種人道主義行為；2、提供精液應完全出于自愿，是無償的，只能獲得誤工、誤餐及交通補貼等，不能以經濟利益而為之；3、精液只能提供給國家衛生部批準的人類精子庫，而不能提供給其他單位或個人；4、在提供精液前要經過嚴格的健康檢查，供精者要如實提供病史配合體格檢查，提供血液、精液等標本進行檢測。健康檢查不合格的不能作為供精者，健康檢查體格者與人類精子庫簽訂《供精協議書》后，才能作為供精者；（五）供精者知情同意書1、提供精液的目的是為了治療不育癥，1105、供精者的所有資料都由人類精子庫專人保密保存，不會向受精者泄露，更不會向其他人泄露；6、供精者至少提供30份精液標本；7、供精者的精液，如果已有5位受精者受孕，該供精者的精液標本全部廢除，今后亦不再作為供精者；8、供精者不能追問受精者及出生后代的任何情況，對出生后代沒有任何權利，也不承擔任何義務。5、供精者的所有資料都由人類精子庫專人保密保存，不會向受精者111（六）捐精流程

1.首先進行捐精咨詢。2.引導排精，作精液檢查。3.合格后抽血化驗，約7～10天出報告。

4.精液與化驗正常者開始捐精，捐精前簽訂知情同意書。5.每3－5天前來捐精一次，每次均給予相應的交通、營養等補貼。6.六個月后再次復查，給予交通、營養等補貼。

（六）捐精流程1.首先進行捐精咨詢。112（七）AID方法女方準備：檢查正常有關文件的簽署精液準備授精方法：1ml（陰道部宮頸處或宮頸管內）隨訪（七）AID方法女方準備：檢查正常113體外授精和胚胎移植

（invitrofertilizationandembryotransfer）原理：將女方卵巢內的成熟卵母細胞取出，在體外與來自配偶的精子共同培養，發生授精過程。受精卵發育到胚胎階段后，再將其種植到子宮腔中繼續發育生長成胎兒。體外授精和胚胎移植

（invitrofertilizat114（一）適應癥女方各種因素導致的配子運輸障礙子宮內膜異位癥男方因素：少、弱、畸精癥等原因不明性不孕癥頑固性多囊卵巢綜合征（一）適應癥女方各種因素導致的配子運輸障礙1151、控制性超排卵在實施IVF-ET手術中，利用促排卵藥物來增強與改善現存卵巢功能，企圖達到不受自然周期所限制，獲取多個健康卵子提供受精后胚胎移植并盡可能使黃體與內膜功能同時能對妊娠發生與妊娠維持想適應。（二）基本步驟1、控制性超排卵（二）基本步驟116高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）117高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）118高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）1192、取卵在陰道B超引導下用穿刺針抽取卵泡。3、找卵在顯微鏡下將抽取的卵泡液置于器皿中迅速尋找卵冠丘復合體（OCCCS）。2、取卵120高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）121高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）1224、受精（精液處理同人工授精）卵冠丘復合體經孵育4~6h后加入適當數量的獲能精子進行授精。5、觀察

16h后剝除顆粒細胞，鏡下觀察見兩原核者為受精。繼續培養36~42小時觀察胚胎分裂到4~8細胞可考慮行胚胎移植。需要者也可培養到第5~6天，做囊胚移植。4、受精（精液處理同人工授精）1235、種植將胚胎吸入移植管中，經宮頸管將胚胎送入宮腔臥床1~3h。6、黃體支持移植后注射黃體酮，14天后行血β-hCG測定確定是否妊娠。5、種植124IVFIVF125高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）126高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）127胚胎的宮內移植移植時間：體外受精后的42-45h。現多在體外受精后3天，有時培養到5天至囊胚。移植方法：檢查是否移植進去。胚胎的宮內移植128高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）129代孕母親（衛生部暫禁）先天性子宮缺如；因病行子宮切除術；女方有妊娠或分娩禁忌癥；代孕母親（衛生部暫禁）先天性子宮缺如；130胚胎冷凍1983年人類第一次冷凍胚胎成功適應癥IVF或ICSI治療中的多余胚胎；胚胎移植發生困難；胚胎種植前診斷等待結果；人工贈卵等待受者子宮內膜同步；建立胚胎庫；胚胎冷凍1983年人類第一次冷凍胚胎成功131顯微操作技術顯微受精技術：透明帶部分切割、透明帶下受精法及單精子卵胞漿顯微注射極體與卵裂球活檢卵漿置換、細胞核移植輔助孵出嵌合體技術顯微操作技術顯微受精技術：透明帶部分切割、透明帶下受精法及單132高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）133機械法PZD機械法PZD134顯微操作輔助受精顯微操作輔助受精135ICSI受精的生物學特點：正常受精：產生頂體反應的精子與卵膜的融合，卵子激活以及女性、男性原核形成。ICSI：注射時精子的頂體狀態不明，而卵與精子質膜的融合也不存在。單精子卵漿內注射ICSI受精的生物學特點：正常受精：產生頂體反應的精子與卵膜136適應癥嚴重少精癥弱畸精癥少弱畸精癥無精癥（阻塞性及非阻塞性）以往IVF時卵母細胞均不受精或受精率低下其他：適應癥137ICSI的禁忌癥染色體異常嚴重先天畸形ICSI的禁忌癥染色體異常138ICSI的技術操作精子來源及處理手淫法取精。附睪取精:適用于阻塞性無精癥。近期有人用經皮精子抽吸法。ICSI的技術操作精子來源及處理139PESA法附睪取精PESA法附睪取精140MESA及附睪精子MESA及附睪精子141

睪丸取精：主要適用于非阻塞性無精癥，切取一小塊睪丸組織的方法獲取精子或精子細胞（開放式活檢）。也可用細針組織抽吸睪丸活檢法。睪丸取精：主要適用于非阻塞性無精癥，切取一小塊睪丸組織的142活檢槍及抽吸法睪丸取精活檢槍及抽吸法睪丸取精143卵子的來源與處理卵子一般在促超排卵后,經陰道B超介導,用16G或17G穿刺針經陰道獲取。取卵后4小時，進行去卵丘結構處理。卵子的來源與處理144設備；顯微操作皿的準備；顯微注射；精子制動與獲取；固定卵子與注射；顯微注射顯微注射145設備設備146高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）147ICSI示意圖ICSI示意圖148ICSI操作過程ICSI操作過程149ICSI過程(A)ICSI過程(A)150ICSI過程(B)ICSI過程(B)151注射15-18小時后，檢查是否受精（ICSI后精卵結合過程一般較正常為快，6小時內33%可出現原核，8-20小時89%-91%出現原核）。受精卵繼續培養24小時，觀察有無卵裂,然后經陰道移植3-4個質量優良的胚胎。剩余胚胎冷凍保存。注射15-18小時后，檢查是否受精（ICSI后精卵結合過程152高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）153高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）154ICSI妊娠的后代隨訪對ICSI安全性的憂慮：ICSI操作對卵子是具創傷性的；ICSI在全面的動物實驗之前就廣泛應用于人類；選用的精子原是屬于被自然淘汰的；睪丸采集的精子可能未發育成熟，基因印跡尚未發育完成；少弱及無精子的缺陷是否會殃及后代。ICSI妊娠的后代隨訪對ICSI安全性的憂慮：155輔助“破殼”輔助“破殼”156輔助孵出(AH)8細胞期AH晚期囊胚AH輔助孵出(AH)8細胞期AH晚期囊胚AH157高級組織學課件生殖輔助技術（XXXX級碩士研究生）158種植前遺傳學診斷種植前遺傳學診斷