2酶聯免疫吸附法（ELISA）

1間接免疫熒光法（IFAIndirectFluorescentAssay

）3免疫印跡法（IB）WesternblotLIA4其它：IDA、RIA等第一頁，共四十二頁。全自動自身抗體分析儀自動化檢測檢測定量化單個項目隨時檢測多個項目同時檢測45-90分鐘報告結果原廠質控和校正血清精確溫度調控系統五點定標、三重檢測第二頁，共四十二頁。第三頁，共四十二頁。風濕病的實驗室診斷血清學檢查

自身抗體——特異性非特異的免疫相關指標滑液分析一般的實驗室檢查項目第四頁，共四十二頁。項目檢驗方法SLE四項

ANA間接免疫熒光抗DS－DNA抗體間接免疫熒光抗組蛋白抗體ELISA抗核小體抗體ELISAENA系列

抗RNP免疫印跡、ELISA抗SM免疫印跡、ELISA抗SSA免疫印跡、ELISA抗SSB免疫印跡、ELISA抗JO-1免疫印跡、ELISA抗SCL-70免疫印跡、ELISA抗核糖體P蛋白免疫印跡、ELISARA三項

AKA（抗角質蛋白抗體）間接免疫熒光抗RA33ELISA抗CCP（抗環瓜氨酸肽抗體）ELISAANCA四項

P-ANCA（熒光模型為核周模型）間接免疫熒光C-ANCA（熒光模型為細胞質模型）間接免疫熒光MPO-ANCA（髓過氧化酶抗體）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗體）ELISA常見的自身抗體及其檢測方法(1)第五頁，共四十二頁。(2)自身免疫肝炎七項

ANA間接免疫熒光抗LMA抗（肝細胞膜抗體）間接免疫熒光ASMA（抗平滑肌抗體）間接免疫熒光抗LKM（抗肝腎微粒體抗體）間接免疫熒光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗體）間接免疫熒光AMA（線粒體抗體）間接免疫熒光抗LSP（抗肝臟特異性蛋白抗體）間接免疫熒光RF三項

RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂綜合征三項（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗體）ELISAPT-IgMELISA抗β2-糖蛋白1抗體ELISA常見的自身抗體及其檢測方法第六頁，共四十二頁。抗Ku抗體（Ku)抗Mi抗體（Mi-2）抗PM-Scl抗體抗JO-1抗體（JO-1）多發性肌炎、皮肌炎抗線粒體抗體M2型（AMA-M2）原發性膽汁性肝硬化抗nRNP抗體（U1-snRNP）混合性結締組織?。∕CTD）抗Scl-70抗體（Scl-70）抗著絲點B抗體（CENP-B）系統性硬化抗SSB/La抗體抗SSA/R052抗體抗SS-A/R060抗體干燥綜合征/系統性紅斑狼瘡抗核糖體P蛋白（PO）抗增殖細胞核抗原抗體（PCNA)抗Sm抗體抗組蛋白抗體抗核小體抗體抗雙鏈DNA抗體IgG抗體系統性紅斑狼瘡項目名稱疾病

ANA譜17項（免疫印跡法）(3)常見的自身抗體及其檢測方法第七頁，共四十二頁。(一)類風濕關節炎（RA）

類風濕因子（RF）早期診斷的系列指標抗RA33/36抗體 抗核周因子（APF）抗角蛋白抗體（AKA）抗Sa抗體抗環瓜氨酸抗體（抗CCP）

第八頁，共四十二頁?？菇堑鞍卓贵w（AKA）抗角蛋白抗體(AKA)，1979年Young等發現類風濕性關節炎(RA)血清中有一種能與鼠食管角質層反應的抗體，并對類風濕性關節炎(RA)具有特異性，命名為AKA。1989年Vincent等提出應將AKA更名為抗角質層抗體更為恰當。AKA可以在RA發病以前若干年出現，所以有早期診斷價值。AKA檢測方法：取6周齡雄性Wistar大鼠食管中下1/3段作為抗原，做冰凍切片，厚4μm～5μm-70℃保存備用。加1∶20稀釋血清，濕盒內37℃孵育30分鐘，PBS漂洗，吹干，加1∶20稀釋的熒光素標記羊抗人IgG，37℃孵育30分鐘，漂洗，吹干，緩沖甘油封片熒光顯微鏡下觀察。判定標準：以角質層出現典型的規則的線狀或板層狀熒光為陽性。第九頁，共四十二頁。geneFilaggrin第十頁，共四十二頁。第十一頁，共四十二頁。類風濕因子（RF）抗人IgG分子Fc片段上抗原決定簇的特異性抗體,分為IgM、G、A、E型RF在RA中的陽性率為70%~８０％，是診斷RA的重要標準之一RF含量與病情的活動性和嚴重性成正比，持續高滴度的RF常提示RA病情活動，骨侵蝕發生率高，常可伴有皮下結節或血管炎等關節外表現，提示預后不良。第十二頁，共四十二頁。類風濕因子（RF）RF并非RA獨有的特異性抗體，對RA的診斷不具特異性

SLE30%SS70%~90%SSc20%~30%MCTD50%~60%

非風濕性疾病

5%以下的正常人RF陽性不等于一定就是RARF陰性也不等于一定就不是RA第十三頁，共四十二頁。第十四頁，共四十二頁。RF常用檢測方法RF 1：40陽性乳膠凝集法（測IgM-RF）RF256Iu/ml雙抗夾心ElISA法(測總RF）RF-IgG 110IU/ml -IgA 18IU/ml ELISA法

-IgM200IU/ml第十五頁，共四十二頁。RA早期診斷的系列指標

敏感性特異性抗RA33/36抗體35.8%99.6%APF40%-80%70%-90%AKA40%-55%85%-95%抗Sa抗體40%-60%98.6%抗CCP46%-70%96%第十六頁，共四十二頁?？弓h瓜氨酸肽抗體（抗CCP）瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關抗體的主要抗原決定簇對RA診斷具有高度特異性（98%）可在RA早期出現預測早期關節炎發展為RARA關節侵蝕破壞的早期識別及預測第十七頁，共四十二頁。(二)系統性紅斑狼瘡（SLE）是一種臨床表現有多系統損害癥狀的慢性系統性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗體為主的大量不同的自身抗體自身抗體（1）抗核抗體譜——ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗體（2）抗磷脂抗體（3）抗組織細胞抗體——抗RBC抗體抗血小板相關抗體抗神經元抗體（4）其它——RF、p-ANCA第十八頁，共四十二頁?？购丝贵w（ANA）定義——以細胞核內物質為抗原的抗體臨床意義①SLE的篩查抗體:

95%陽性，但滴度與SLE活動性無相關陰性基本可排除SLE②陽性并非SLE特異陽性并非風濕病特異:——風濕病（SLE、SSc、SS、RA)

非風濕性疾?。ǜ腥?、慢肝、肺纖維化、腫瘤）服用某些藥物（INH、苯妥英鈉、肼苯達嗪、普魯卡因酰胺）

第十九頁，共四十二頁?？购丝贵w（ANA）方法——間接免疫熒光法結果判斷:①滴度〉1：100為陽性②常見核型——5種不同核型的臨床意義不同

第二十頁，共四十二頁。

核膜型與抗ds-DNA有關，多見于SLE，特別是有腎炎者

均質型與AHA（抗組蛋白抗體）、抗DNA有關，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡第二十一頁，共四十二頁。

斑點型與抗ENA有關，應進一步查特異性抗體核仁型多見于硬皮病第二十二頁，共四十二頁。

著絲點型多見于CREST綜合征第二十三頁，共四十二頁。ANA常見五種核型及臨床意義核膜型——與抗ds-DNA有關，多見于SLE，特別是有腎炎者均質型——與AHA、抗DNA有關，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡斑點型——與抗ENA有關，應進一步查特異性抗體核仁型——多見于硬皮病著絲點型——多見于CREST綜合征第二十四頁，共四十二頁。ANA檢測方法間接免疫熒光法印跡法ELISA法第二十五頁，共四十二頁。

抗核抗體譜（ANAs）定義：以細胞核內物質為抗原的抗體

抗DNA抗體——抗ss-DNA

抗ds-DNA

抗組蛋白抗體——H1，H2A，H2B，H3，H4

抗非組蛋白抗體——抗ENA抗體抗著絲點抗體抗核仁抗體其它——線粒體、溶酶體、高爾基體等

第二十六頁，共四十二頁。抗ds-DNA抗體臨床意義①對SLE的診斷有較高特異性②滴度與SLE活動相關，可作為病情監測及療效觀察指標③與SLE腎損害有關檢測方法①放免法（Farr)——敏感，有利于早期預測檢測高親合力的抗ds-DNA②間接免疫熒光法(IF)——特異③ELISA——可檢測低親合力的抗ds-DNA

有助于中樞狼瘡的病情監測④金標免疫斑點法第二十七頁，共四十二頁?？笶NA抗體抗RNPMCTD100%陽性，且滴度高 雙手腫脹，雷諾現象，肌炎，指（趾）端硬化 腎臟保護性抗體？抗SmSLE的標記性抗體，陽性率30%

有助于早期、不典型及治療緩解后SLE的回顧性診斷 抗Sm陽性一定伴抗RNP陽性，但抗RNP陽性可單獨存在抗SSA①原發性SS：60-75%SLE:40-50% ②與皮損、光過敏、白細胞減少、淋巴結腫大、血管炎、紫癜相關③可造成新生兒狼瘡、嬰兒心臟傳導阻滯抗SSB ①原發性SS：40%，較抗SSA更特異 ②其它CTD伴抗SSB者常伴繼發性SS第二十八頁，共四十二頁?？笶NA抗體抗Scl-70硬皮病標記性抗體抗Jo-1多肌炎/皮肌炎標記性抗體抗Rib 胞漿抗原——核糖體位于胞漿內

臨床意義①是SLE的又一特異性抗體，陽性率10-20%②多見于SLE活動期與抗ds-DNA抗體的消長相平行但不會隨病情緩解立即消失可持續1-2年后才轉陰第二十九頁，共四十二頁。抗核小體抗體（AnuA）核小體是細胞染色質中的一種成分，它是由DNA和組蛋白以特殊的方式相連而組成，在SLE的誘導和致病中起重要作用對SLE的早期診斷有重要意義比抗ds-DNA、抗組蛋白抗體更早出現陽性率：50%~90%特異性﹥98%第三十頁，共四十二頁。(三)皮肌炎/多發性肌炎（PM/DM）免疫學檢查ANAENA——抗Jo-1陽性其它檢查——肌酶譜肌酸磷酸激酶（CPK）:MM-心肌和骨骼肌

MB-心肌

BB-平滑肌和腦內乳酸脫氫酶（LDH）谷草轉氨酶（AST）谷丙轉氨酶（ALT）堿性磷酸酶（ALP）第三十一頁，共四十二頁。(四)干燥綜合征（SS）ANA——陽性率40%~70%ENA——抗SSA抗體陽性率70%~96%

抗SSB抗體陽性率50%~87%抗α-Fordrin——對于pSS或sSS的診斷有一定意義，但特異性和敏感性并不理想。RF——陽性率75%~100%高球蛋白血癥WBC下降第三十二頁，共四十二頁。(五)系統性硬化?。╬SS）ANA——陽性率50%~55%ENA——抗Scl-70陽性率15%~40%抗著絲點抗體(ACA)陽性第三十三頁，共四十二頁。(六)混合性結締組織病（MCTD）ANA陽性ENA——抗RNP高滴度陽性第三十四頁，共四十二頁。（七）血管炎

抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）熒光圖譜分型主要抗原成分胞漿型cANCA核周型pANCA蛋白酶3（PR3）髓過氧化物酶（MPO）非典型型（cANCA）不清第三十五頁，共四十二頁。ANCA的臨床意義c-ANCA和PR3-ANCA

對韋格納肉芽腫有高度特異性（95%），敏感性80%

與病情活動性相關常作為判斷藥物療效和病情復發的指標p-ANCA和MPO-ANCA

不如c-ANCA具有診斷特異性陽性者血管炎程度較高，其滴度也與病情活動相關主要與顯微鏡下多血管炎

壞死性新月體腎小球腎炎

變應性肉芽腫性血管炎相關第三十六頁，共四十二頁。（八）抗磷脂抗體綜合征（APS）是一種非炎癥性自身免疫病，臨床上以動/靜脈血栓形成、習慣性流產和血小板減少等癥狀為表現，血清中存在抗磷脂抗體血清學檢查抗心磷脂抗體（ACA）——IgG、IgM、IgA（ELISA）抗β2糖蛋白1抗體（抗β2-GP1)狼瘡抗凝物（LA）——凝血酶原時間（PT）激活的部分凝血活酶時間（APTT）