免疫分析基于抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段；免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。免疫分析基于抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段；1免疫學檢測歷史演進放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；以化學發光為代表的光生物學標記及免疫檢測技術（20世紀90年代開始推廣使用，產品步入成長期）三個階段。免疫學檢測歷史演進放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍2免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法3發光現象發光現象4螢火蟲發光螢火蟲發光5深海魚發光深海魚發光6發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。生物發光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產能，生成激發態的氧化熒光素，后者在回復到基態時多余的能量以光子形式放出。化學發光發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回7化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學發光免疫分析（CLIA）分類酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；以化學發光為代表的光生物學標記及免疫檢測技術（20世紀90年代開始推廣使用，產品步入成長期）三個階段。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點ECLIA檢測流程圖二（生物素與親和素結合）ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）電致化學發光（ECL)光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。化學發光

Chemiluminescence(CL)化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸8

化學發光反應包括兩個關鍵步驟，即化學激發和發光。化學發光反應能級圖化學發光反應包括兩個關鍵步驟，即化學激發和發光。化學發9[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發前景提供了廣闊空間。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；電致化學發光（ECL)化學發光免疫分析（CLIA）分類這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。測定范圍寬，可達7個數量級。[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；發光酶免疫測定（chemiluminescenceenzymeimmunoasssay，CLEIA）CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實現了精確的全自動化；電致化學發光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產物之間或與體系中共存組分反應產生化學發光的現象。

化學發光分析根據化學發光反應在某一時刻的發光強度或反應的發光總量來確定反應中相應組分含量的分析方法，稱為化學發光分析。[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的10化學發光分析優點化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，并且不象放射分析那樣存在強烈的環境污染和健康危害，是一種非常優秀的定量分析方法。化學發光分析優點化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，11化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但12免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法13化學發光免疫分析

chemiluminescenceimmunoassay（CLIA）CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。化學發光免疫分析

chemiluminescenceimm14化學發光免疫分析（CLIA）分類按分離方法不同分微粒子化學發光免疫測定磁顆粒化學發光免疫測定化學發光免疫分析（CLIA）分類按分離方法不同分15化學發光免疫分析（CLIA）分類按發光劑不同分為發光酶免疫測定（chemiluminescenceenzymeimmunoasssay，CLEIA）化學發光免疫測定技術（chemiluminescenceimmunoassay，CLIA）電化學發光免疫測定技術（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）化學發光免疫分析（CLIA）分類按發光劑不同分為16免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法17電致化學發光（ECL)電致化學發光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產物之間或與體系中共存組分反應產生化學發光的現象。電致化學發光（ECL)電致化學發光(ECL)是通過在電極18電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發19電化學發光劑定義：指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物質。特點反應在電極進行化學發光劑：三聯毗啶釕電子供體為：三丙胺（TPA）電化學發光劑定義：指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物20三聯毗啶釕分子結構圖三聯毗啶釕分子結構圖21電致化學發光（ECL)在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記Ab，通過Ag-Ab反應和磁珠分離技術，根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；測定范圍寬，可達7個數量級。磁顆粒化學發光免疫測定因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。化學發光反應包括兩個關鍵步驟，即化學激發和發光。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）操作簡單，耗時短，易于自動化。電致化學發光（ECL)雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+

）特點ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。電致化學發光（ECL)三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]222三聯吡啶釕（[Ru(bpy)3]2+

）特點[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發前景提供了廣闊空間。三聯吡啶釕（[Ru(bpy)3]2+）特點[Ru(bpy23電化學發光原理圖基態激發態不穩定電化學發光原理圖基態激發態不穩定24免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法25電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）之后的新一代標記免疫測定技術；ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。電化學發光免疫分析

(Electro-Chemilumine26ECLI原理在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記Ab，通過Ag-Ab反應和磁珠分離技術，根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。ECLI原理在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電27ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）28“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。電致化學發光（ECL)電致化學發光（ECL)微粒子化學發光免疫測定免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定。ECLIA檢測流程圖五ECLIA檢測流程圖五ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記Ab，通過Ag-Ab反應和磁珠分離技術，根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。磁顆粒化學發光免疫測定光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。測定范圍寬，可達7個數量級。ECLIA檢測流程圖二（生物素與親和素結合）“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合29化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。8μm的聚苯乙烯微粒。電致化學發光（ECL)ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。測定范圍寬，可達7個數量級。[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；化學發光劑：三聯毗啶釕電子供體為：三丙胺（TPA）電致化學發光（ECL)電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLIA體系結構圖化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸30ECLIA檢測流程圖三（磁珠吸引吸附于電極表面）ECLIA檢測流程圖三（31ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電32ECLIA檢測流程圖五（撤消磁場沖洗磁珠）ECLIA檢測流程圖五33方法評價采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8μm的聚苯乙烯微粒。其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；在液體中形成均勻的懸液，參與反應時類似液相，反應速度大大加快；方法評價采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8μm的聚苯乙34測定范圍寬，可達7個數量級。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定。化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，電致化學發光（ECL)化學發光免疫分析（CLIA）分類化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，化學發光免疫分析（CLIA）分類酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點方法評價“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；測定范圍寬，可達7個數量級。方法評價“鏈霉親和素-生物素”是35方法評價利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實現了精確的全自動化；標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定。方法評價利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便36ELIA優越性高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；特異性強，重復性好，CV＜5％。測定范圍寬，可達7個數量級。試劑穩定，無毒害，無污染，有效期長，達數月甚至數年。操作簡單，耗時短，易于自動化。在對環保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的首選方法。ELIA優越性高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；37臨床應用激素腫瘤標記物內分泌功能傳染性疾病其它如VB12、葉酸、鐵蛋白、肌鈣蛋白、肌紅蛋白、酶、脂肪酸、維生素和藥物等多種檢測項目。

臨床應用激素38電化學發光免疫分析法培訓課件39謝謝！謝謝！40深海魚發光深海魚發光41發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。生物發光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產能，生成激發態的氧化熒光素，后者在回復到基態時多余的能量以光子形式放出。化學發光發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回42化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但43電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發44放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；并且不象放射分析那樣存在強烈的環境污染和健康危害，是一種非常優秀的定量分析方法。生物發光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產能，生成激發態的氧化熒光素，后者在回復到基態時多余的能量以光子形式放出。雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。8μm的聚苯乙烯微粒。酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；化學發光免疫分析（CLIA）分類電化學發光免疫測定技術（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）電致化學發光（ECL)電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)電致化學發光（ECL)利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實現了精確的全自動化；酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學發光免疫分析（CLIA）分類電致化學發光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產物之間或與體系中共存組分反應產生化學發光的現象。ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）在對環保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的首選方法。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+

）特點ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上45電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）之后的新一代標記免疫測定技術；ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。電化學發光免疫分析

(Electro-Chemilumine46ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電47利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實現了精確的全自動化；ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。操作簡單，耗時短，易于自動化。ECLIA檢測流程圖五化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；特異性強，重復性好，CV＜5％。以化學發光為代表的光生物學標記及免疫檢測技術（20世紀90年代開始推廣使用，產品步入成長期）三個階段。電致化學發光（ECL)[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發前景提供了廣闊空間。化學發光免疫分析（CLIA）分類酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）之后的新一代標記免疫測定技術；發光酶免疫測定（chemiluminescenceenzymeimmunoasssay，CLEIA）化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。電化學發光免疫測定技術（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）電致化學發光（ECL)ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。生物發光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產能，生成激發態的氧化熒光素，后者在回復到基態時多余的能量以光子形式放出。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）電致化學發光（ECL)電致化學發光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產物之間或與體系中共存組分反應產生化學發光的現象。ECLIA檢測流程圖五化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。并且不象放射分析那樣存在強烈的環境污染和健康危害，是一種非常優秀的定量分析方法。微粒子化學發光免疫測定光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；ECLIA檢測流程圖五根據化學發光反應在某一時刻的發光強度或反應的發光總量來確定反應中相應組分含量的分析方法，稱為化學發光分析。操作簡單，耗時短，易于自動化。ECLIA檢測流程圖五（撤消磁場沖洗磁珠）利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實48免疫分析基于抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段；免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。免疫分析基于抗原和抗體的特異性反應進行檢測的一種手段；49免疫學檢測歷史演進放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；以化學發光為代表的光生物學標記及免疫檢測技術（20世紀90年代開始推廣使用，產品步入成長期）三個階段。免疫學檢測歷史演進放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍50免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法51發光現象發光現象52螢火蟲發光螢火蟲發光53深海魚發光深海魚發光54發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。生物發光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產能，生成激發態的氧化熒光素，后者在回復到基態時多余的能量以光子形式放出。化學發光發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回55化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學發光免疫分析（CLIA）分類酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；以化學發光為代表的光生物學標記及免疫檢測技術（20世紀90年代開始推廣使用，產品步入成長期）三個階段。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點ECLIA檢測流程圖二（生物素與親和素結合）ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）電致化學發光（ECL)光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。化學發光

Chemiluminescence(CL)化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸56

化學發光反應包括兩個關鍵步驟，即化學激發和發光。化學發光反應能級圖化學發光反應包括兩個關鍵步驟，即化學激發和發光。化學發57[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發前景提供了廣闊空間。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；電致化學發光（ECL)化學發光免疫分析（CLIA）分類這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。測定范圍寬，可達7個數量級。[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；發光酶免疫測定（chemiluminescenceenzymeimmunoasssay，CLEIA）CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實現了精確的全自動化；電致化學發光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產物之間或與體系中共存組分反應產生化學發光的現象。

化學發光分析根據化學發光反應在某一時刻的發光強度或反應的發光總量來確定反應中相應組分含量的分析方法，稱為化學發光分析。[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的58化學發光分析優點化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，并且不象放射分析那樣存在強烈的環境污染和健康危害，是一種非常優秀的定量分析方法。化學發光分析優點化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，59化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但60免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法61化學發光免疫分析

chemiluminescenceimmunoassay（CLIA）CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。化學發光免疫分析

chemiluminescenceimm62化學發光免疫分析（CLIA）分類按分離方法不同分微粒子化學發光免疫測定磁顆粒化學發光免疫測定化學發光免疫分析（CLIA）分類按分離方法不同分63化學發光免疫分析（CLIA）分類按發光劑不同分為發光酶免疫測定（chemiluminescenceenzymeimmunoasssay，CLEIA）化學發光免疫測定技術（chemiluminescenceimmunoassay，CLIA）電化學發光免疫測定技術（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）化學發光免疫分析（CLIA）分類按發光劑不同分為64免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法65電致化學發光（ECL)電致化學發光(ECL)是通過在電極上施加一定波形的電壓或電流信號進行電解反應的產物之間或與體系中共存組分反應產生化學發光的現象。電致化學發光（ECL)電致化學發光(ECL)是通過在電極66電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發67電化學發光劑定義：指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物質。特點反應在電極進行化學發光劑：三聯毗啶釕電子供體為：三丙胺（TPA）電化學發光劑定義：指通過在電極表面進行電化學反應而發出光的物68三聯毗啶釕分子結構圖三聯毗啶釕分子結構圖69電致化學發光（ECL)在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記Ab，通過Ag-Ab反應和磁珠分離技術，根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；測定范圍寬，可達7個數量級。磁顆粒化學發光免疫測定因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。化學發光反應包括兩個關鍵步驟，即化學激發和發光。化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點這種方法兼有發光分析的高靈敏度和抗原抗體反應的高度特異性。“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）操作簡單，耗時短，易于自動化。電致化學發光（ECL)雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+

）特點ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。電致化學發光（ECL)三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]270三聯吡啶釕（[Ru(bpy)3]2+

）特點[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；[Ru(bpy)3]2+分子量小，空間位阻小，即便小分子的核酸也能標記，使檢測的菜單大大豐富，更重要的是為其檢測菜單的開發前景提供了廣闊空間。三聯吡啶釕（[Ru(bpy)3]2+）特點[Ru(bpy71電化學發光原理圖基態激發態不穩定電化學發光原理圖基態激發態不穩定72免疫分析法發光和化學發光化學發光免疫分析法電化學發光電化學發光免疫分析法免疫分析法73電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLI是繼EIA、RIA、FIA、時間分辨熒光免疫技術（TRFIA）之后的新一代標記免疫測定技術；ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。電化學發光免疫分析

(Electro-Chemilumine74ECLI原理在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記Ab，通過Ag-Ab反應和磁珠分離技術，根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。ECLI原理在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電75ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）76“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。ECLI是目前最先進的標記免疫測定技術之一。電致化學發光（ECL)電致化學發光（ECL)微粒子化學發光免疫測定免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定。ECLIA檢測流程圖五ECLIA檢測流程圖五ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）ECL分析中采用[Ru(bpy)3]2+作為標記物，其活化衍生物是[Ru(bpy)3]2+＋N羥基琥珀酸胺酯（NHS），該衍生物具有水溶性，且高度穩定，保證電化學發光反應的高效和穩定，而且避免了本底噪聲的干擾。在電極表面由電化學引發的特異性化學發光反應，用電化學發光劑三聯吡啶釕[Ru(bpy)3]2+標記Ab，通過Ag-Ab反應和磁珠分離技術，根據三聯吡啶釕在電極上發出的光強度對待測的Ag或Ab進行定量/定性。磁顆粒化學發光免疫測定光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。測定范圍寬，可達7個數量級。ECLIA檢測流程圖二（生物素與親和素結合）“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合77化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸收了反應釋放的化學能而處于電子激發態，當其回到基態時伴隨產生的光輻射現象。三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。8μm的聚苯乙烯微粒。電致化學發光（ECL)ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；ECLIA檢測流程圖一（雙抗體夾心的形成）電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。測定范圍寬，可達7個數量級。[Ru(bpy)3]2+衍生物與免疫球蛋白結合的分子比超過20仍不會影響抗體的可溶性和免疫活性；化學發光劑：三聯毗啶釕電子供體為：三丙胺（TPA）電致化學發光（ECL)電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECLIA體系結構圖化學發光是指在某些特殊的化學反應中，反應的中間體或產物由于吸78ECLIA檢測流程圖三（磁珠吸引吸附于電極表面）ECLIA檢測流程圖三（79ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電80ECLIA檢測流程圖五（撤消磁場沖洗磁珠）ECLIA檢測流程圖五81方法評價采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8μm的聚苯乙烯微粒。其特點是反應面積比板式擴大20－30倍，吸附效率高；在液體中形成均勻的懸液，參與反應時類似液相，反應速度大大加快；方法評價采用的固相載體是帶有磁性的直徑約2.8μm的聚苯乙82測定范圍寬，可達7個數量級。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定。化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，電致化學發光（ECL)化學發光免疫分析（CLIA）分類化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，就避免了熒光分析中激發光雜散光的影響有很高的靈敏度，化學發光免疫分析（CLIA）分類酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；CLIA是將化學發光分析和免疫反應相結合而建立的一種新的免疫分析技術。ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；ECLI是電化學發光(ECL)和免疫測定相結合的產物；免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統中抗原或抗體的性質與含量。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。ECLIA檢測流程圖四（電極充電啟動電化學反應）三聯吡啶釕

（[Ru(bpy)3]2+）特點方法評價“鏈霉親和素-生物素”是是具有很強的非共價相互作用的一對化合物，具有牢固而特異的結合，應用此放大系統，使檢測的靈敏度大大提高；測定范圍寬，可達7個數量級。方法評價“鏈霉親和素-生物素”是83方法評價利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便迅速，實現了精確的全自動化；標記物的再循環利用，使發光時間更長、強度更高、易于測定。方法評價利用氧化鐵的磁性，使用電磁場分離結合態和游離態，方便84ELIA優越性高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；特異性強，重復性好，CV＜5％。測定范圍寬，可達7個數量級。試劑穩定，無毒害，無污染，有效期長，達數月甚至數年。操作簡單，耗時短，易于自動化。在對環保很重視的國家，CLIA成了取代RIA的首選方法。ELIA優越性高度敏感，可達pg／ml或pmol水平；85臨床應用激素腫瘤標記物內分泌功能傳染性疾病其它如VB12、葉酸、鐵蛋白、肌鈣蛋白、肌紅蛋白、酶、脂肪酸、維生素和藥物等多種檢測項目。

臨床應用激素86電化學發光免疫分析法培訓課件87謝謝！謝謝！88深海魚發光深海魚發光89發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。生物發光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產能，生成激發態的氧化熒光素，后者在回復到基態時多余的能量以光子形式放出。化學發光發光分類光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回90化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。化學發光分析缺點雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但91電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發光反應，而CL是通過化合物混合啟動發光反應。因此ECL反應易精確控制，具有靈活性。電致化學發光（ECL)ECL與CL的差異在于ECL是電啟動發92放射免疫檢測（興起于20世紀70年代，現仍普遍使用于縣級以上醫院）；并且不象放射分析那樣存在強烈的環境污染和健康危害，是一種非常優秀的定量分析方法。生物發光：反應底物在熒光素酶的催化下利用ATP產能，生成激發態的氧化熒光素，后者在回復到基態時多余的能量以光子形式放出。雖然化學發光具備很高的特異性和很小的干擾，但化學分析本身的不特異性，制約了整個方法的使用。光照發光:發光劑經短波長入射光照射后進入激發態，當回復至基態時發出較長波長的可見光。8μm的聚苯乙烯微粒。酶聯免疫檢測（興起于20世紀80年代，各臨床機構普遍使用）；化學發光免疫分析（CLIA）分類電化學發光免疫測定技術（electro－chemiluminescenceimmunoassay，ECLI）電致化學發光（ECL)電化學發光免疫分析

(Electro-ChemiluminescenceImmunoassay,ECLI)電致化學發光（ECL)利用氧化鐵的磁性，使用電磁場