第八節維生素類藥物

的分析

維生素是維持人體正常代謝功能所必需的活性物質，多數不能在人體內合成。三個階段：經驗、化學、分子水平脂溶性VitA、D、

E、K等水溶性

VitC、VitB族（B1、B2、B6、B12）、煙酰胺、泛酸鈣、葉酸、煙酸等分類：一、維生素A的分析

包括：A1（視黃醇）為有效成分

A2（去氫VA）

A3（去水VA）等（—）結構與性質結構

1.具有共軛多烯醇側鏈的環己烯五個共軛雙鍵R=H維生素A醇（不穩定）R=COCH3

維生素A醋酸酯(臨床應用)2.維生素A為全反式結構（二）鑒別三氯化銻反應維生素A+三氯化銻→不穩定的藍色→紫紅色反應條件：無水、無醇藍色→紫紅色維生素ACh.P（2015）【鑒別】僅此一項

取本品1滴，加三氯甲烷10ml振搖使溶解；取出2滴，加三氯甲烷2ml與25%三氯化銻的三氯甲烷溶液0.5ml，即顯藍色，漸變成紫紅色。含量測定

生物效價、換算因數維生素A的含量是用生物效價[國際單位（IU/g）]表示。含量測定

Ch.P兩種方法第一法（UV）第二法（HPLC）含量測定

維生素A：UV維生素A軟膠囊：UV維生素AD軟膠囊：HPLC維生素AD滴劑：HPLC精密稱定樣品W（g）環己烷溶于V（mL）配成9-15IU/ml溶液直接法稀釋D倍max測A328max在326-329nm皂化法max不在326-329nmUVA是否需要校正的判斷原則：①測定A300、A316、A328、A340、A360②計算A300/A328、A316/A328、------A360/A328③與P227表比較：不大于±0.02（不需校正）計算用A328測大于±0.02（需校正）計算用A328校不需校正時生物效價、換算因數維生素A的含量是用生物效價[國際單位（IU/g）]表示。維生素A的國際單位規定：1IU=0.344g維生素A醋酸酯1g維生素A醋酸酯相當的國際單位數為：測定不需校正時因：A:實測或校正標示量%Dm需要校正：“三波長校正”、“三點校正”(1)波長選擇:①等波長差法：316328340A316A328A340A328（校正）=3.52（2A328-A316-A340）mD紫外分光光度法（三點校正法）主要基于以下兩點：

1）雜質在310～340nm波長范圍內吸收度呈直線，且隨波長增大吸光度下降。2）雜質與VitA的吸收具有加和性。設：A1=A328;A2=A340;A3=A316;Y1、Y2、Y3為藥物吸收

X1、X2、X3為雜質吸收則：A1=Y1+X1;A2=Y2+X2;A3=Y3+X3（2A328-A316-A340）=（Y1+X1-Y2-X2+Y1+X1-Y3-X3）X1-X2=+△X；X1-X3=-△X（抵消）紫外分光光度法（三點校正法）主要基于以下兩點：

1）雜質在310～340nm波長范圍內吸收度呈直線，且隨波長增大吸光度下降。2）雜質與VitA的吸收具有加和性。設：A1=A328;A2=A340;A3=A316;Y1、Y2、Y3為藥物吸收

X1、X2、X3為雜質吸收則：A1=Y1+X1;A2=Y2+X2;A3=Y3+X3（2A328-A316-A340）=（Y1+X1-Y2-X2+Y1+X1-Y3-X3）X1-X2=+△X；X1-X3=-△X（抵消）精密稱取本品裝量差異項下的內容物0.1027g，加環己烷溶解并定量轉移至50ml量瓶中，稀釋到刻度，搖勻，精密量取5ml，置另一50ml量瓶中，稀釋到刻度，搖勻。測得各波長處的A為：0.380（300nm），0.594（316nm），0.668（328nm），0.562（340nm），0.232（360nm）。已知膠丸內容物平均裝量W0.08246g，標示量5000IU/g,藥典規定應為標示量的90-110%，問本品是否符合限度。二、維生素B1

的分析（一）結構與性質氨基嘧啶環噻唑環兩個堿性中心1.維生素B1（鹽酸硫胺）是由氨基嘧啶環和噻唑環通過亞甲基連接而成的季銨化合物2.噻唑環上季銨及嘧啶環上的氨基為兩個堿性基團，可與酸成鹽

季銨氨基性質

1.溶解性

2.具有紫外吸收（鹽酸：246nm含測）

3.硫色素反應

4.分子中含兩個氮雜環，可與生物堿沉淀試劑反應生成組成恒定的沉淀

5.氯化物的反應（二）鑒別試驗

維生素B1在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，溶于正丁醇中，顯藍色熒光。

1.硫色素反應（二）鑒別試驗

維生素B1在堿性溶液中，可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，溶于正丁醇中，顯藍色熒光。

1.硫色素反應維生素B1Ch.P（2015）【鑒別】（1）取本品約5mg，加氫氧化鈉試液2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀試液0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2分鐘，放置使分層，上面的醇層顯強烈的藍色熒光；加酸使成酸性，熒光即消失；再加堿使成堿性，熒光又顯出.維生素B1Ch.P（2015）【鑒別】（2）取本品適量，加水溶解，水浴蒸干，在105°C干燥2小時測定。本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集1205圖）一致。（3）

氯化物的反應

Ch.P（2015）

硝酸鉛反應

沉淀反應：生物堿沉淀試劑

（三）檢查1.硝酸鹽：合成過程中使用靛胭脂法2.總氯量測定銀量法溴酚藍指示劑為吸附指示劑原料藥：非水溶液滴定法片劑、注射劑：UV（四）含量測定

1.非水堿量法（2015版）

電位滴定法溶劑：冰醋酸-醋酐(20:30)滴定液：高氯酸反應mol比：1:2【含量測定】取本品約0.15g，精密稱定，加醋酐-冰醋酸(5:1)的混合液25ml，微溫使溶解，放冷，加結晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.lmol/L)滴定至溶液顯黃色，并將滴定的結果用空白試驗校正。每lml高氯酸滴定液(0.lmol/L)相當于19.42mg的C8H10N4O2。（二）紫外分光光度法（2015版）吸收系數法定量

246nm測定A

激發波長365nm，發射波長435nm，對照法定量補充：硫色素熒光法（肌肉、米糠、尿中Vb1測定常用）

藥物在不同的化學環境中發生特征性的紫外吸收光譜變化，而雜質卻不受化學環境的影響，光譜行為不變。在適當的波長測定最大的差示吸收值（ΔA）。故不經事先分離，即可消除雜質的干擾差示分光光度法（ΔA法）pH=7pH=2差示光譜247nm三、維生素C

（一）結構與性質

維生素C是一種不飽和的多羥基內酯化合物。內酯1.糖的性質2.還原性烯二醇3.酸性較強，C3—OH（pKa=4.17）酸性4．旋光性，L（+）—抗壞血酸，其活性最強手性碳5．具紫外吸收

6.水解（內酯環）Na2CO3NaOH開環酮酸鹽（二）鑒別

1.與硝酸銀反應Ch.P（2015）2.與二氯靛酚鈉試液的反應

Ch.P（2015）二氯靛酚的氧化型在酸性介質中為玫瑰紅色，堿性介質中為藍色。

3.IRCh.P（2015）H+（三）雜質檢查溶液的澄清度與顏色2.鐵、銅離子的檢查原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法原理：通過測定藥物中所含待檢元素的原子蒸氣，吸收發自待檢元素燈的該元素特定波長光的程度，以求出供試藥物中待檢元素含量的方法。光強度的變化符合朗伯-比耳定律I0ItL原子吸收分光光度計空心陰極燈原子化器單色器檢測器處理與控制數據處理和儀器控制火焰原子化器單色器光電倍增管霧化器和霧化室空心陰極燈方法：A：供試品溶液；B：等量的供試品+限度量的待檢元素溶液，按相同方法制備，得對照溶液。先將B噴入火焰，調節儀器使具有合適的讀數a；在相同條件下噴入A，記錄其讀數b。b=供試品溶液中待檢元素的含量；(a-b)=按限量加入的待檢元素的量。規定：b<(a-b)，合格；b>(a-b)，不合格。待檢雜質溶液中加入等量供試品，是為了消除背景對測定的影響。（四）含量測定（1）原理：1.碘量法：原料、片劑和注射劑（2）討論1）在酸性介質中維生素C受空氣中氧的氧化作用減慢，因此操作中加入稀醋酸10ml，但仍需立即滴定。

2）加新沸過的冷水也是為了減少水中溶解氧對測定的影響。

測定時加丙酮2ml作掩蔽劑，以消除抗氧劑亞硫酸氫鈉的干擾。亞硫酸氫鈉可和丙酮發生加成反應而被消除。

3）維生素C注射液的含量測定維生素C

Ch.P（2015）

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍色并在30秒種內不褪。每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當于8.806mg的C6H8O6。維生素C片

Ch.P（2015）四、維生素E

（α-生育酚）苯環+二氫吡喃環+飽和烴鏈酚羥基與醋酸成酯（一）性質1.黃色粘稠狀液體，遇光氧化

2.具有紫外吸收

3.水解：生成α-生育酚+醋酸（雜質檢查）

4.易被氧化：對熱穩定；被氧化劑氧化為醌型（生育紅）（鑒別）堿性更易被氧化

（二）鑒別

1.硝酸反應

Ch.P（2015版）2.三氯化鐵反應——水解后的氧化反應

3.IR（2015版）4.UV：無水乙醇中0.1mg/ml5.HPLC（2015版）6.GC(三)檢查1.酸度檢查制備過程中引入的游離羧酸，

酸堿滴定法2.

生育酚（天然型）

硫酸鈰滴定法3.有關物質（合成型）

GC—主成分自身對照法4.正己烷殘留溶劑GC法（四）含量測定1.氣相色譜法Ch.P（原料、制劑）2015內標法加校正因子固定相硅酮（OV—17）或HP-1

毛細管柱內標物正三十二烷系統適用性試驗理論塔板數按維生素E峰計算不低于500（填充柱）或5000（毛細管柱），維生素E峰與內標物質峰的分離度應符合要求。

（二）HPLCJP（14）五、維生素K1計算A328（校正），計算

f

值

最大吸收波長是否在326~329之間是否是計算吸光度比值及差值，是否超過±0.02否皂化

-15%