第2章臨床微生物檢驗標本

的采集第2章臨床微生物檢驗標本

的采集第一節標本的采集和處理原則第一節標本的采集和處理原則一、標本采集的一般原則1.早期采集2.無菌采集3.根據目的菌的特性用不同的方法采集4.采集適量標本5.安全采集一、標本采集的一般原則1.早期采集二、標本的處理一些對環境敏感的細菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應保溫并立即送檢厭氧性標本應放在專門的運送瓶或試管內運送，有時可直接用抽取標本的注射器運送。其他所有的標本采集后最好在2h之內送到實驗室。若不能及時送檢，標本應置于一定環境中保存，如支氣管洗液、心包液、痰、尿等標本應保存在4℃環境中，腦脊液等則要在25℃保存。二、標本的處理一些對環境敏感的細菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌2臨床微生物檢驗標本的采集課件第二節血液第二節血液一、標本采集1.皮膚消毒程序嚴格執行以下三步法:(1)70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒以上。

(2)1%～2%碘酊作用60秒或10%碘氟60～90秒，從穿刺點向外畫圈消毒,至消毒區域直徑達3cm以上。

(3)70%酒精脫碘：對碘過敏的患者，用70%酒精消毒60秒，待酒精揮發干燥后采血。一、標本采集1.皮膚消毒程序嚴格執行以下三步法:2.采血部位通常采血部位為肘靜脈。疑似細菌性心內膜炎時，以肘動脈或股動脈采血為宜。對疑為細菌性骨髓炎或傷寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘處嚴格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培養。2.采血部位3.靜脈穿刺和培養瓶接種程序在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點。(2)用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭直接注入血培養瓶，或嚴格按廠商推薦的方法采血。(3)血標本接種到培養瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。4.采血量

自動化儀器要求成人采血量是8～10ml/瓶，兒童1～5ml/瓶。3.靜脈穿刺和培養瓶接種程序5.血培養次數和采血時間只要懷疑血液細菌感染，應即刻采集。采血培養應該盡量在使用抗菌藥物之前進行，在1h內采集2～3次做血培養。對間歇性寒戰或發熱應在寒戰或體溫高峰到來之前0.5～1h采集血液，或于寒戰或發燒后1h進行。入院前兩周內接受抗菌藥物治療的患者，連續3d，每天采2份。6.標本運送采血后應該立即送檢,如不能立即送檢，可室溫保存，切勿冷藏。

5.血培養次數和采血時間二、血液中常見的病原體

種類病原菌革蘭陽性球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌革蘭陽性桿菌結核分枝桿菌、產單核李斯特菌、陰道加特納菌革蘭陰性球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌革蘭陰性桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、克雷伯桿菌、腸桿菌、變形桿菌、沙雷菌、沙門菌、不動桿菌、嗜肺軍團菌、嗜血桿菌真菌念球菌、曲霉菌、隱球菌、球孢子菌厭氧菌擬桿菌、產氣莢膜梭菌重點二、血液中常見的病原體種類病原菌革蘭陽性三、臨床意義血液感染是一種危重的全身感染，對其進行病原菌的檢驗，提供病原學的診斷極為重要。當少量細菌侵入血液循環，為一過性，不繁殖或很少繁殖，不引起或僅引起輕微的炎癥反應者稱為菌血癥,若有全身性炎癥反應的表現稱為膿毒癥。血液標本的細菌培養是診斷菌血癥的基本而重要的方法，若從患者血液中檢出細菌，一般視為病原菌感染，提示有菌血癥。三、臨床意義血液感染是一種危重的全身感染，對其進行病原菌的檢常見的菌血癥或膿毒癥有：葡萄球菌菌血癥由耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）及凝固酶陰性葡萄球菌引起的菌血癥和膿毒癥逐年增多，占菌血癥的10%~15%，臨床表現明顯，發病急，中毒癥狀重。常見的菌血癥或膿毒癥有：腸球菌菌血癥

近年來明顯增多，約占菌血癥的10%。常見泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的患者，易并發心內膜炎。此菌可對多種抗生素耐藥，病情較重。腸球菌菌血癥革蘭陰性桿菌菌血癥主要侵犯危及機體免疫功能低下的患者。常可引起泌尿生殖道、胃腸道、膽道及呼吸道感染。革蘭陰性桿菌菌血癥厭氧菌菌血癥厭氧菌常寄居于口腔、腸道和泌尿生殖道，并引起相應部位的感染。真菌血癥常由條件致病性真菌引起，有假絲酵母菌、曲霉菌和毛霉菌等，以白假絲酵母菌最多見，多數伴有細菌感染。厭氧菌菌血癥第三節腦脊液第三節腦脊液一、標本采集采集腦脊液一般用腰椎穿剌術獲得，特殊情況可采用小腦延髓池或腦室穿刺術。標本采集后要立即送檢、化驗，一般不能超過1小時。腰穿法無菌取腦脊液3～5ml，置無菌管內立即送檢。培養腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等苛養菌時，應將標本置于35℃條件下保溫送檢，不可置冰箱保存。但做病毒檢查的腦脊液標本應放置冰塊，可在4℃保存72h。一、標本采集采集腦脊液一般用腰椎穿剌術獲得，特殊情況可采用小二、腦脊液中常見病原體

`革蘭陽性菌革蘭陰性菌病毒真菌及其他肺炎鏈球菌腦膜炎奈瑟菌乙型腦炎病毒新生隱球菌B群鏈球菌大腸埃希菌柯薩奇病毒A白假絲酵母菌A群鏈球菌銅綠假單胞菌柯薩奇病毒B鉤端螺旋體消化鏈球菌卡他布蘭漢菌脊髓灰質炎病毒結核分枝桿菌擬桿菌新腸道病毒68～71產單核細胞李斯特菌不動桿菌狂犬病毒炭疽芽胞桿菌葡萄球菌肺炎克雷白桿菌流感嗜血桿菌重點二、腦脊液中常見病原體`革蘭陽性菌革蘭陰性菌病毒真菌及其他三、臨床意義細菌性腦膜炎：是中樞神經系統感染的常見類型，其中以流行性腦脊髓膜炎為常見，有的呈暴發型，病情嚴重，病死率較高；多發年齡在5～29歲，冬春季多發，可用青霉素類、磺胺類、頭孢霉素類抗生素治療。結核性腦膜炎最常見，近幾年呈回升趨勢，為防治重點。三、臨床意義細菌性腦膜炎：是中樞神經系統感染的常見類型，其中真菌性腦膜炎：最常見于隱球菌腦膜炎，其他的真菌性腦膜炎如白假絲酵母菌、球孢子性腦膜炎日漸增多，特別是免疫功能低下和惡性疾病患者易并發，如AIDS、惡性腫瘤，嚴重糖尿病、SLE等患者易發生。真菌性腦膜炎：最常見于隱球菌腦膜炎，其他的真菌性腦膜炎如白假流行性乙型腦炎：是一種人獸共患的自然疫源性疾病。傳染源為患者和家禽、家畜及野生動物，蚊蟲為傳播媒介，經蚊蟲叮咬、吸血而傳播，人群對本病普遍易感，感染后多數人無癥狀而成為隱性感染。但可獲得持久免疫力，再次發病者極少見。少數患者病情嚴重，病死率高，可留有后遺癥。流行性乙型腦炎：是一種人獸共患的自然疫源性疾病。傳染源為患者腸道病毒對中樞神經系統的危害性已逐漸引起人們的關注和重視。除原有脊髓灰質炎常見外，還可見多種病毒引起腦膜炎或腦炎，還不斷發現新的腸道病毒（新腸道病毒68～71型）引起的腦膜炎及腦炎。腸道病毒對中樞神經系統的危害性已逐漸引起人們的關注和重視。第四節膿液第四節膿液一、標本采集無菌N.S先清洗，再采集。膿性標本是用針和注射器抽吸采集，如果沒有得到抽吸物，也可以用拭子在傷口深部采集滲出物。膿腫標本以無菌注射器抽取為好，也可由排液法取得。厭氧菌感染的膿液常有腐臭應予注意。特別要注意避免正常菌群所污染以及由采集至接種前盡量避免接觸空氣。一、標本采集無菌N.S先清洗，再采集。二、膿液中常見病原體細菌種類革蘭陽性菌革蘭陰性菌球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、消化鏈球菌、四聯球菌肺炎克雷白桿菌、變形桿菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌桿菌結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌、破傷風桿菌、產氣莢膜梭菌、炭疽芽胞桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、擬桿菌、梭桿菌其他放線菌（衣氏放線菌、諾卡菌）重點二、膿液中常見病原體細菌種類革蘭陽性菌革蘭陰性菌球三、臨床意義由創傷、手術、侵入性器械操作等外科治療引起的感染最為常見。細菌造成傷口感染一般認為需每克組織內細菌數量在105～106個以上。外傷性創傷感染以葡萄球菌和鏈球菌多見，且易發生混合感染。燒傷創面最常見革蘭陰性桿菌感染，如銅綠假單胞菌等，次為革蘭陽性球菌感染，可單獨也可混合細菌感染。三、臨床意義由創傷、手術、侵入性器械操作等外科治療引起的感染急性化膿性骨關節炎常由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、淋病奈瑟菌、肺炎鏈球菌感染所致。慢性骨髓炎常由結核分枝桿菌感染所致，葡萄球菌、鏈球菌也常見。放線菌感染可發生在免疫功能下降時或由于拔牙、口腔黏膜損傷時。急性化膿性骨關節炎常由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、淋病奈瑟第五節痰液第五節痰液一、標本采集自然咳痰法以晨痰為佳，盡可能在用抗菌藥物之前采集標本。用力咳出呼吸道深部的痰，將痰液直接吐入無菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標本量應≥1ml。要求：Squamouscell＜10個/低倍視野，WBC＞25/低倍視野一、標本采集自然咳痰法支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環甲膜穿刺經氣管吸引法、經胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法均由臨床醫生按相應操作規程采集，但必須注意采集標本時盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環甲膜穿刺經氣管吸引法、經小兒取痰法用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經壓舌刺激咳痰時，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發咳痰。

注意：對可疑烈性呼吸道傳染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗標本時必須注意生物安全防護。小兒取痰法二、痰標本中常見病原體細菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、腸球菌卡他莫拉菌、腦膜炎奈瑟菌、白喉棒狀桿菌、類白喉棒狀桿菌、結核分枝桿菌、炭疽芽胞桿菌、流感嗜血桿菌、克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、百日咳桿菌、軍團菌、支原體和衣原體等

真菌白假絲酵母菌、隱球菌、曲霉菌和毛霉菌等病毒腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒、冠狀病毒和麻疹病毒等。二、痰標本中常見病原體細菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌三、臨床意義下呼吸道感染是最常見的呼吸道感染癥，主要指肺實質性炎癥的肺炎和支氣管黏膜炎癥的支氣管炎，是我國常見病和病死率高的感染性疾病。痰標本的細菌學檢查對呼吸道感染的診斷有重要意義。

三、臨床意義下呼吸道感染是最常見的呼吸道感染癥，主要指肺實質病毒性肺炎真菌性肺炎支原體肺炎細菌性肺炎病毒性肺炎真菌性肺炎支原體肺炎細菌性肺炎第六節糞便第六節糞便一、標本采集用藥前自然排便，采集膿血、黏液部分2～3g。外觀無異常的糞便應從糞便的表面不同部位取材。液體便取絮狀物1～2ml,置無菌容器內送檢。如排便困難或嬰幼兒患者，可用直腸拭子法采集標本。一、標本采集用藥前自然排便，采集膿血、黏液部分2～3g。糞便標本送檢對住院的腹瀉成人患者，應采集住院3日內糞便標本送檢，標本采集后應盡快送檢，有條件的提倡使用運送培養基。糞便標本送檢消化道潰瘍、幽門螺桿菌標本可取胃竇和胃體等部位各一塊胃黏膜活檢標本，置入無菌生理鹽水中立即送檢，或將標本放于運送培養基，于4℃保存，24h內送檢。消化道潰瘍、幽門螺桿菌標本可取胃竇和胃體等部位各一塊胃黏膜活二、糞便中常見的病原體腸毒素為主的病原菌侵襲性為主的病原菌病毒霍亂弧菌、志賀菌（福氏、宋內）、大腸埃希菌（ETEC、EHEC、EAEC）、金黃色葡萄球菌、難辨梭菌、產氣莢膜梭菌沙門菌、大腸埃希菌（EPEC、EIEC）、志賀菌（鮑氏、志賀）、彎曲菌、副溶血弧菌、小腸結腸炎耶爾森菌、結核分枝桿菌、白假絲酵母菌輪狀病毒、埃可病毒、Norwolk病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、腺病毒二、糞便中常見的病原體腸毒素為主的病原菌侵襲性為主的病原菌病三、臨床意義細菌性痢疾

（bacillarydysentery）

簡稱菌痢，主要是指由志賀菌引起的腸道傳染病，是腸道感染性腹瀉最常見的病種。細菌、真菌、病毒引起的胃腸炎

此癥最為常見，由多種病原體感染所致，臨床常表現為腹瀉、嘔吐、高熱等癥狀。胃腸炎的病毒感染常見于輪狀病毒等，常引起幼兒腹瀉。三、臨床意義細菌性痢疾細菌、真菌、病毒引起的胃腸炎細菌性食物中毒常可危及生命，常見于沙門菌、副溶血弧菌、致病性大腸埃希菌、葡萄球菌、肉毒梭菌、臘樣芽胞桿菌食物中毒。多發生在夏秋季，以暴發和集體發病為特征，是一種嚴重的病癥。細菌性食物中毒致病性大腸埃希菌的腸道感染可分為5類，詳見第八章。消化性潰瘍幽門螺桿菌感染主要部位是胃及十二指腸球部，大量研究及臨床證明胃炎、消化性潰瘍主要是HP所引起，因此消化性潰瘍經抗感染治療取得很好的療效。致病性大腸埃希菌的腸道感染可分為5類，詳見第八章。第七節尿液第七節尿液一、標本采集采集方法采集清潔中段尿。必要時導尿或膀胱穿刺留尿標本，但要注意導尿容易引起逆行性感染。一、標本采集采集方法采集清潔中段尿。采集容器的要求：潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏、廣口、容積應>50ml、盒蓋易于開啟，不含防腐劑和抑菌劑。標本采集后應及時送檢、及時接種，室溫下保存時間不得超過2小時（夏季保存時間應適當縮短或冷藏保存），4℃冷藏保存時間不得超過8小時。但應注意淋病奈瑟菌培養時標本不能冷藏保存。采集容器的要求：潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏、廣口、容積應二、常見病原體

尿液中常見病原體：80%為革蘭陰性桿菌，其中以大腸埃希菌最為常見。

20%為革蘭陽性菌，其中以腸球菌為多見。二、常見病原體尿液中常見病原體：三、臨床意義尿路感染urinarytractinfection是指大量微生物在尿路中生長繁殖而引起的尿路炎癥。可分為上尿路感染（主要有腎盂腎炎）和下尿路感染（主要有膀胱炎和尿道炎）。為最常見的感染性疾病，發病率約占人口的2%。多見于成年女性。三、臨床意義尿路感染urinarytractinfe尿路感染主要經尿道口上行感染所致，極少數為血行感染。尿路感染常見腎盂腎炎（急性和慢性）、膀胱炎（急性為主）、尿道炎（細菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎）、前列腺炎（慢性常見）等。尿路感染需要明確部位和急性與慢性，主要依病原菌檢測，還要緊密結合臨床綜合考慮做出診斷。尿路感染主要經尿道口上行感染所致，極少數為血行感染。第八節生殖道標本第八節生殖道標本

一、標本采集

采集前清潔、消毒尿道口及外陰，尿道分泌物可將無菌棉拭子伸入尿道3～4cm捻轉拭子采集。陰道分泌物采集時可用無菌棉拭子自陰道深部或陰道穹隆后部，宮頸2～3cm處，轉動并停留10～30s取分泌物。淋球菌培養需保溫及時送檢，衣原體、支原體等培養無法及時送檢時應4℃保存。一、標本采集采集前清潔、消毒尿道口及外陰，尿道分泌物可將二、常見的病原體生殖道標本主要用以檢查引起性傳播疾病（sexuallytransmitteddisease,STD）的病原體。性傳播疾病是指以性行為為主要傳播途徑的一組傳染病。STD有二十幾種，1991年8月我國衛生部確認8種STD為重要防治與監測的病種二、常見的病原體生殖道標本主要用以檢查引起性傳播疾病（sex8種STD分別是：艾滋病、淋病、梅毒、軟下疳、性病淋巴肉芽腫、非淋菌性尿道炎、尖銳濕疣、生殖器皰疹。其病原體分別為：人類免疫缺陷病毒、淋病奈瑟菌、梅毒螺旋體、杜克雷嗜血桿菌、沙眼衣原體L1、L2、L3血清型、支原體和衣原體、人類乳頭狀病毒、人類單純皰疹病毒2。8種STD分別是：艾滋病、淋病、梅毒、軟下疳、性病淋巴肉芽腫第九節厭氧培養標本的采集第九節厭氧培養標本的采集一、標本采集與運送標本的采集與運送是否適當，對厭氧菌培養能否成功至關重要。

注意：標本不能被正常菌群所污染。應盡量避免接觸空氣。一、標本采集與運送標本的采集與運送是否適當，對厭氧菌培養標本的采集方法一般情況下，應從無正常菌群寄居的部位采取標本。標本的采集方法不宜做厭氧菌培養①鼻咽拭子；②齒齦拭子；③痰和氣管抽取物；④胃和腸道內容物、肛拭；⑤接近皮膚和黏膜的分泌物；⑥褥瘡潰瘍及黏膜層表面；⑦排出的尿或導尿；⑧陰道或子宮拭子；⑨前列腺分泌物。不宜做厭氧菌培養經皮膚黏膜組織采集標本時，皮膚表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。采取標本時應盡量避免接觸空氣，多使用針筒抽取，減少標本與空氣接觸的機會。經皮膚黏膜組織采集標本時，皮膚表面需要2%碘酒消毒，以防正常二、臨床常見的厭氧菌厭氧菌（anaerobicbacteria）是指一大群在有氧條件下不能生長，必須在無氧條件下才能生長的細菌。二、臨床常見的厭氧菌厭氧菌（anaerobicbacter厭氧菌分為兩大類：一類是有芽胞的革蘭陽性梭菌，另一類是無芽胞的革蘭陽性及革蘭陰性的桿菌與球菌。根據革蘭染色性、形態、鞭毛、芽胞、莢膜和代謝產物等可將無芽胞厭氧菌分成40多個菌屬，300多個菌種和亞種；有芽胞厭氧菌只有一個菌屬，即梭菌屬，共130個種。厭氧菌分為兩大類：一類是有芽胞的革蘭陽性梭菌，另一類是無芽胞

重要的厭氧菌種類及其在正常人體內的分布

菌名皮膚上呼吸道口腔腸道尿道陰道芽胞菌革蘭陽性桿菌梭狀芽胞桿菌屬00±++±±無芽胞菌革蘭陽性桿菌丙酸桿菌屬雙歧桿菌屬乳桿菌屬優桿菌屬放線菌屬革蘭陰性桿菌類桿菌屬普雷沃菌屬紫單胞菌屬梭桿菌屬革蘭陽性球菌消化球菌屬消化鏈球菌屬革蘭陰性球菌韋榮菌屬++00±0OO00++0+00±±+++++++±+++++++++++++++++±++++++++++++++++++±0±00++++±±±±±++±0+++±+++++注.0：無或很少；+：常有；++：

大量；±：不規則；重要的厭氧菌種類及其在正常人體內的分布菌名皮膚上呼厭氧菌廣泛分布于自然界和人體中。除梭狀芽胞桿菌能以芽胞的形式在自然界中長期存活外，其他絕大多數無芽胞厭氧菌均存在于人和動物體內。在人體正常菌群中，厭氧菌占有絕對優勢。厭氧菌廣泛分布于自然界和人體中。除梭狀芽胞桿菌能以芽胞的形式三、臨床意義正常情況下，厭氧菌同需氧菌及兼性厭氧菌之間保持著微生態的動態平衡。厭氧菌代謝產生的乙酸、乳酸等能抑制病原菌生長，需氧菌及兼性厭氧菌的存在為厭氧菌的生長創造了條件。如長期使用廣譜抗生素、激素、免疫抑制劑等，在發生菌群失調、機體免疫力下降或細菌進入非正常寄居部位時，這些厭氧菌即可作為條件致病菌導致內源性感染。三、臨床意義正常情況下，厭氧菌同需氧菌及兼性厭氧菌之間保持著厭氧菌分布十分廣泛，是體內正常菌群的組成成員，多為條件致病菌；厭氧菌的感染遍及臨床各科，且多為混合感染；厭氧菌對常用的氨基糖甙類抗生素耐藥，而對甲硝唑普遍敏感。厭氧菌分布十分廣泛，是體內正常菌群的組成成員，多為條件致病菌（一）厭氧菌感染的條件在正常情況下，人體組織的氧化還原電勢（Eh）可阻止厭氧菌的繁殖。組織缺氧或氧化還原電勢降低均可造成厭氧菌生長繁殖的適宜環境，易于遭受厭氧菌感染。（一）厭氧菌感染的條件機體免疫功能下降，易并發厭氧菌感染。如接受免疫抑制劑、抗代謝藥物、放射治療、化學藥物治療的患者，其全身免疫功能受損，厭氧菌感染率相當高。機體免疫功能下降，易并發厭氧菌感染。如接受免疫抑制劑、抗代謝一旦厭氧菌進入適合其生長繁殖的感染部位，即可進行繁殖和損傷組織，由壞死組織吸收余氧，進而降低Eh，更有利其大量繁殖，產生內毒素、外毒素、侵襲性酶、酸類、氣體及其他毒性產物，造成組織進一步損傷、壞死和全身中毒。一旦厭氧菌進入適合其生長繁殖的感染部位，即可進行繁殖和損傷組（二）厭氧菌感染的臨床特征

凡有下列情況者應懷疑厭氧菌感染：感染組織局部產生大量氣體某些厭氧菌可產生大量氣體，造成組織腫脹和壞死，皮下有捻發音，通常是產氣莢膜梭菌感染的特征。感染部位多發生在黏膜附近、口腔、腸道、鼻咽腔、陰道等黏膜，均有大量厭氧菌寄生，這些部位及其附近有破損，極易發生厭氧菌感染。（二）厭氧菌感染的臨床特征

凡有下列深部外傷如槍傷后，人或動物咬傷后的繼發感染，均可能是厭氧菌感染。分泌物有惡臭，或為暗血紅色，并在紫外光下發出紅色熒光，均可能是厭氧菌感染。發紅色熒光的分泌物，可能有產黑色素普魯沃菌和不解糖紫單胞菌；分泌物或膿汁中有硫磺顆粒，為放線菌感染。深部外傷如槍傷后，人或動物咬傷后的繼發感染，均可能是厭氧菌感長期應用氨基糖甙類抗生素治療無效的病例、新近有流產史者，以及胃腸手術后發生的感染，均有可能是厭氧菌感染。分泌物涂片經革蘭染色，鏡檢發現有細菌，而常規培養陰性者；或在液體及半固體培養基深部長的細菌，均可能為厭氧菌感染。長期應用氨基糖甙類抗生素治療無效的病例、新近有流產史者，以及小結血液、腦脊液為無菌性體液，采集標本時要注意無菌采集，血液標本還要注意采集的時間和采血量，若排除污染只要有細菌生長即視為致病菌；有菌部位的標本如痰液、糞便等應了解該部位常見的正常菌群，采集標本時盡量避免污染，對于分離的細菌應結合臨床進行分析；尿液標本因采集時常常會受到尿道口正常菌群的污染，因此尿液細菌培養應進行活菌計數。小結血液、腦脊液為無菌性體液，采集標本時要注意無菌采集，血液第2章臨床微生物檢驗標本

的采集第2章臨床微生物檢驗標本

的采集第一節標本的采集和處理原則第一節標本的采集和處理原則一、標本采集的一般原則1.早期采集2.無菌采集3.根據目的菌的特性用不同的方法采集4.采集適量標本5.安全采集一、標本采集的一般原則1.早期采集二、標本的處理一些對環境敏感的細菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血桿菌等應保溫并立即送檢厭氧性標本應放在專門的運送瓶或試管內運送，有時可直接用抽取標本的注射器運送。其他所有的標本采集后最好在2h之內送到實驗室。若不能及時送檢，標本應置于一定環境中保存，如支氣管洗液、心包液、痰、尿等標本應保存在4℃環境中，腦脊液等則要在25℃保存。二、標本的處理一些對環境敏感的細菌如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌2臨床微生物檢驗標本的采集課件第二節血液第二節血液一、標本采集1.皮膚消毒程序嚴格執行以下三步法:(1)70%酒精擦拭靜脈穿刺部位待30秒以上。

(2)1%～2%碘酊作用60秒或10%碘氟60～90秒，從穿刺點向外畫圈消毒,至消毒區域直徑達3cm以上。

(3)70%酒精脫碘：對碘過敏的患者，用70%酒精消毒60秒，待酒精揮發干燥后采血。一、標本采集1.皮膚消毒程序嚴格執行以下三步法:2.采血部位通常采血部位為肘靜脈。疑似細菌性心內膜炎時，以肘動脈或股動脈采血為宜。對疑為細菌性骨髓炎或傷寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘處嚴格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培養。2.采血部位3.靜脈穿刺和培養瓶接種程序在穿刺前或穿刺期間，為防止靜脈滑動，可戴乳膠手套固定靜脈，不可接觸穿刺點。(2)用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭直接注入血培養瓶，或嚴格按廠商推薦的方法采血。(3)血標本接種到培養瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。4.采血量

自動化儀器要求成人采血量是8～10ml/瓶，兒童1～5ml/瓶。3.靜脈穿刺和培養瓶接種程序5.血培養次數和采血時間只要懷疑血液細菌感染，應即刻采集。采血培養應該盡量在使用抗菌藥物之前進行，在1h內采集2～3次做血培養。對間歇性寒戰或發熱應在寒戰或體溫高峰到來之前0.5～1h采集血液，或于寒戰或發燒后1h進行。入院前兩周內接受抗菌藥物治療的患者，連續3d，每天采2份。6.標本運送采血后應該立即送檢,如不能立即送檢，可室溫保存，切勿冷藏。

5.血培養次數和采血時間二、血液中常見的病原體

種類病原菌革蘭陽性球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌革蘭陽性桿菌結核分枝桿菌、產單核李斯特菌、陰道加特納菌革蘭陰性球菌腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌革蘭陰性桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、克雷伯桿菌、腸桿菌、變形桿菌、沙雷菌、沙門菌、不動桿菌、嗜肺軍團菌、嗜血桿菌真菌念球菌、曲霉菌、隱球菌、球孢子菌厭氧菌擬桿菌、產氣莢膜梭菌重點二、血液中常見的病原體種類病原菌革蘭陽性三、臨床意義血液感染是一種危重的全身感染，對其進行病原菌的檢驗，提供病原學的診斷極為重要。當少量細菌侵入血液循環，為一過性，不繁殖或很少繁殖，不引起或僅引起輕微的炎癥反應者稱為菌血癥,若有全身性炎癥反應的表現稱為膿毒癥。血液標本的細菌培養是診斷菌血癥的基本而重要的方法，若從患者血液中檢出細菌，一般視為病原菌感染，提示有菌血癥。三、臨床意義血液感染是一種危重的全身感染，對其進行病原菌的檢常見的菌血癥或膿毒癥有：葡萄球菌菌血癥由耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）及凝固酶陰性葡萄球菌引起的菌血癥和膿毒癥逐年增多，占菌血癥的10%~15%，臨床表現明顯，發病急，中毒癥狀重。常見的菌血癥或膿毒癥有：腸球菌菌血癥

近年來明顯增多，約占菌血癥的10%。常見泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的患者，易并發心內膜炎。此菌可對多種抗生素耐藥，病情較重。腸球菌菌血癥革蘭陰性桿菌菌血癥主要侵犯危及機體免疫功能低下的患者。常可引起泌尿生殖道、胃腸道、膽道及呼吸道感染。革蘭陰性桿菌菌血癥厭氧菌菌血癥厭氧菌常寄居于口腔、腸道和泌尿生殖道，并引起相應部位的感染。真菌血癥常由條件致病性真菌引起，有假絲酵母菌、曲霉菌和毛霉菌等，以白假絲酵母菌最多見，多數伴有細菌感染。厭氧菌菌血癥第三節腦脊液第三節腦脊液一、標本采集采集腦脊液一般用腰椎穿剌術獲得，特殊情況可采用小腦延髓池或腦室穿刺術。標本采集后要立即送檢、化驗，一般不能超過1小時。腰穿法無菌取腦脊液3～5ml，置無菌管內立即送檢。培養腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等苛養菌時，應將標本置于35℃條件下保溫送檢，不可置冰箱保存。但做病毒檢查的腦脊液標本應放置冰塊，可在4℃保存72h。一、標本采集采集腦脊液一般用腰椎穿剌術獲得，特殊情況可采用小二、腦脊液中常見病原體

`革蘭陽性菌革蘭陰性菌病毒真菌及其他肺炎鏈球菌腦膜炎奈瑟菌乙型腦炎病毒新生隱球菌B群鏈球菌大腸埃希菌柯薩奇病毒A白假絲酵母菌A群鏈球菌銅綠假單胞菌柯薩奇病毒B鉤端螺旋體消化鏈球菌卡他布蘭漢菌脊髓灰質炎病毒結核分枝桿菌擬桿菌新腸道病毒68～71產單核細胞李斯特菌不動桿菌狂犬病毒炭疽芽胞桿菌葡萄球菌肺炎克雷白桿菌流感嗜血桿菌重點二、腦脊液中常見病原體`革蘭陽性菌革蘭陰性菌病毒真菌及其他三、臨床意義細菌性腦膜炎：是中樞神經系統感染的常見類型，其中以流行性腦脊髓膜炎為常見，有的呈暴發型，病情嚴重，病死率較高；多發年齡在5～29歲，冬春季多發，可用青霉素類、磺胺類、頭孢霉素類抗生素治療。結核性腦膜炎最常見，近幾年呈回升趨勢，為防治重點。三、臨床意義細菌性腦膜炎：是中樞神經系統感染的常見類型，其中真菌性腦膜炎：最常見于隱球菌腦膜炎，其他的真菌性腦膜炎如白假絲酵母菌、球孢子性腦膜炎日漸增多，特別是免疫功能低下和惡性疾病患者易并發，如AIDS、惡性腫瘤，嚴重糖尿病、SLE等患者易發生。真菌性腦膜炎：最常見于隱球菌腦膜炎，其他的真菌性腦膜炎如白假流行性乙型腦炎：是一種人獸共患的自然疫源性疾病。傳染源為患者和家禽、家畜及野生動物，蚊蟲為傳播媒介，經蚊蟲叮咬、吸血而傳播，人群對本病普遍易感，感染后多數人無癥狀而成為隱性感染。但可獲得持久免疫力，再次發病者極少見。少數患者病情嚴重，病死率高，可留有后遺癥。流行性乙型腦炎：是一種人獸共患的自然疫源性疾病。傳染源為患者腸道病毒對中樞神經系統的危害性已逐漸引起人們的關注和重視。除原有脊髓灰質炎常見外，還可見多種病毒引起腦膜炎或腦炎，還不斷發現新的腸道病毒（新腸道病毒68～71型）引起的腦膜炎及腦炎。腸道病毒對中樞神經系統的危害性已逐漸引起人們的關注和重視。第四節膿液第四節膿液一、標本采集無菌N.S先清洗，再采集。膿性標本是用針和注射器抽吸采集，如果沒有得到抽吸物，也可以用拭子在傷口深部采集滲出物。膿腫標本以無菌注射器抽取為好，也可由排液法取得。厭氧菌感染的膿液常有腐臭應予注意。特別要注意避免正常菌群所污染以及由采集至接種前盡量避免接觸空氣。一、標本采集無菌N.S先清洗，再采集。二、膿液中常見病原體細菌種類革蘭陽性菌革蘭陰性菌球菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、化膿鏈球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌、消化鏈球菌、四聯球菌肺炎克雷白桿菌、變形桿菌、腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌桿菌結核分枝桿菌、非結核分枝桿菌、破傷風桿菌、產氣莢膜梭菌、炭疽芽胞桿菌大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、流感嗜血桿菌、擬桿菌、梭桿菌其他放線菌（衣氏放線菌、諾卡菌）重點二、膿液中常見病原體細菌種類革蘭陽性菌革蘭陰性菌球三、臨床意義由創傷、手術、侵入性器械操作等外科治療引起的感染最為常見。細菌造成傷口感染一般認為需每克組織內細菌數量在105～106個以上。外傷性創傷感染以葡萄球菌和鏈球菌多見，且易發生混合感染。燒傷創面最常見革蘭陰性桿菌感染，如銅綠假單胞菌等，次為革蘭陽性球菌感染，可單獨也可混合細菌感染。三、臨床意義由創傷、手術、侵入性器械操作等外科治療引起的感染急性化膿性骨關節炎常由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、淋病奈瑟菌、肺炎鏈球菌感染所致。慢性骨髓炎常由結核分枝桿菌感染所致，葡萄球菌、鏈球菌也常見。放線菌感染可發生在免疫功能下降時或由于拔牙、口腔黏膜損傷時。急性化膿性骨關節炎常由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、淋病奈瑟第五節痰液第五節痰液一、標本采集自然咳痰法以晨痰為佳，盡可能在用抗菌藥物之前采集標本。用力咳出呼吸道深部的痰，將痰液直接吐入無菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標本量應≥1ml。要求：Squamouscell＜10個/低倍視野，WBC＞25/低倍視野一、標本采集自然咳痰法支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環甲膜穿刺經氣管吸引法、經胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法均由臨床醫生按相應操作規程采集，但必須注意采集標本時盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環甲膜穿刺經氣管吸引法、經小兒取痰法用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經壓舌刺激咳痰時，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發咳痰。

注意：對可疑烈性呼吸道傳染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗標本時必須注意生物安全防護。小兒取痰法二、痰標本中常見病原體細菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、腸球菌卡他莫拉菌、腦膜炎奈瑟菌、白喉棒狀桿菌、類白喉棒狀桿菌、結核分枝桿菌、炭疽芽胞桿菌、流感嗜血桿菌、克雷伯桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、百日咳桿菌、軍團菌、支原體和衣原體等

真菌白假絲酵母菌、隱球菌、曲霉菌和毛霉菌等病毒腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒、冠狀病毒和麻疹病毒等。二、痰標本中常見病原體細菌金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌三、臨床意義下呼吸道感染是最常見的呼吸道感染癥，主要指肺實質性炎癥的肺炎和支氣管黏膜炎癥的支氣管炎，是我國常見病和病死率高的感染性疾病。痰標本的細菌學檢查對呼吸道感染的診斷有重要意義。

三、臨床意義下呼吸道感染是最常見的呼吸道感染癥，主要指肺實質病毒性肺炎真菌性肺炎支原體肺炎細菌性肺炎病毒性肺炎真菌性肺炎支原體肺炎細菌性肺炎第六節糞便第六節糞便一、標本采集用藥前自然排便，采集膿血、黏液部分2～3g。外觀無異常的糞便應從糞便的表面不同部位取材。液體便取絮狀物1～2ml,置無菌容器內送檢。如排便困難或嬰幼兒患者，可用直腸拭子法采集標本。一、標本采集用藥前自然排便，采集膿血、黏液部分2～3g。糞便標本送檢對住院的腹瀉成人患者，應采集住院3日內糞便標本送檢，標本采集后應盡快送檢，有條件的提倡使用運送培養基。糞便標本送檢消化道潰瘍、幽門螺桿菌標本可取胃竇和胃體等部位各一塊胃黏膜活檢標本，置入無菌生理鹽水中立即送檢，或將標本放于運送培養基，于4℃保存，24h內送檢。消化道潰瘍、幽門螺桿菌標本可取胃竇和胃體等部位各一塊胃黏膜活二、糞便中常見的病原體腸毒素為主的病原菌侵襲性為主的病原菌病毒霍亂弧菌、志賀菌（福氏、宋內）、大腸埃希菌（ETEC、EHEC、EAEC）、金黃色葡萄球菌、難辨梭菌、產氣莢膜梭菌沙門菌、大腸埃希菌（EPEC、EIEC）、志賀菌（鮑氏、志賀）、彎曲菌、副溶血弧菌、小腸結腸炎耶爾森菌、結核分枝桿菌、白假絲酵母菌輪狀病毒、埃可病毒、Norwolk病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、腺病毒二、糞便中常見的病原體腸毒素為主的病原菌侵襲性為主的病原菌病三、臨床意義細菌性痢疾

（bacillarydysentery）

簡稱菌痢，主要是指由志賀菌引起的腸道傳染病，是腸道感染性腹瀉最常見的病種。細菌、真菌、病毒引起的胃腸炎

此癥最為常見，由多種病原體感染所致，臨床常表現為腹瀉、嘔吐、高熱等癥狀。胃腸炎的病毒感染常見于輪狀病毒等，常引起幼兒腹瀉。三、臨床意義細菌性痢疾細菌、真菌、病毒引起的胃腸炎細菌性食物中毒常可危及生命，常見于沙門菌、副溶血弧菌、致病性大腸埃希菌、葡萄球菌、肉毒梭菌、臘樣芽胞桿菌食物中毒。多發生在夏秋季，以暴發和集體發病為特征，是一種嚴重的病癥。細菌性食物中毒致病性大腸埃希菌的腸道感染可分為5類，詳見第八章。消化性潰瘍幽門螺桿菌感染主要部位是胃及十二指腸球部，大量研究及臨床證明胃炎、消化性潰瘍主要是HP所引起，因此消化性潰瘍經抗感染治療取得很好的療效。致病性大腸埃希菌的腸道感染可分為5類，詳見第八章。第七節尿液第七節尿液一、標本采集采集方法采集清潔中段尿。必要時導尿或膀胱穿刺留尿標本，但要注意導尿容易引起逆行性感染。一、標本采集采集方法采集清潔中段尿。采集容器的要求：潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏、廣口、容積應>50ml、盒蓋易于開啟，不含防腐劑和抑菌劑。標本采集后應及時送檢、及時接種，室溫下保存時間不得超過2小時（夏季保存時間應適當縮短或冷藏保存），4℃冷藏保存時間不得超過8小時。但應注意淋病奈瑟菌培養時標本不能冷藏保存。采集容器的要求：潔凈、無菌、加蓋、封閉、防滲漏、廣口、容積應二、常見病原體

尿液中常見病原體：80%為革蘭陰性桿菌，其中以大腸埃希菌最為常見。

20%為革蘭陽性菌，其中以腸球菌為多見。二、常見病原體尿液中常見病原體：三、臨床意義尿路感染urinarytractinfection是指大量微生物在尿路中生長繁殖而引起的尿路炎癥。可分為上尿路感染（主要有腎盂腎炎）和下尿路感染（主要有膀胱炎和尿道炎）。為最常見的感染性疾病，發病率約占人口的2%。多見于成年女性。三、臨床意義尿路感染urinarytractinfe尿路感染主要經尿道口上行感染所致，極少數為血行感染。尿路感染常見腎盂腎炎（急性和慢性）、膀胱炎（急性為主）、尿道炎（細菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎）、前列腺炎（慢性常見）等。尿路感染需要明確部位和急性與慢性，主要依病原菌檢測，還要緊密結合臨床綜合考慮做出診斷。尿路感染主要經尿道口上行感染所致，極少數為血行感染。第八節生殖道標本第八節生殖道標本

一、標本采集

采集前清潔、消毒尿道口及外陰，尿道分泌物可將無菌棉拭子伸入尿道3～4cm捻轉拭子采集。陰道分泌物采集時可用無菌棉拭子自陰道深部或陰道穹隆后部，宮頸2～3cm處，轉動并停留10～30s取分泌物。淋球菌培養需保溫及時送檢，衣原體、支原體等培養無法及時送檢時應4℃保存。一、標本采集采集前清潔、消毒尿道口及外陰，尿道分泌物可將二、常見的病原體生殖道標本主要用以檢查引起性傳播疾病（sexuallytransmitteddisease,STD）的病原體。性傳播疾病是指以性行為為主要傳播途徑的一組傳染病。STD有二十幾種，1991年8月我國衛生部確認8種STD為重要防治與監測的病種二、常見的病原體生殖道標本主要用以檢查引起性傳播疾病（sex8種STD分別是：艾滋病、淋病、梅毒、軟下疳、性病淋巴肉芽腫、非淋菌性尿道炎、尖銳濕疣、生殖器皰疹。其病原體分別為：人類免疫缺陷病毒、淋病奈瑟菌、梅毒螺旋體、杜克雷嗜血桿菌、沙眼衣原體L1、L2、L3血清型、支原體和衣原體、人類乳頭狀病毒、人類單純皰疹病毒2。8種STD分別是：艾滋病、淋病、梅毒、軟下疳、性病淋巴肉芽腫第九節厭氧培養標本的采集第九節厭氧培養標本的采集一、標本采集與運送標本的采集與運送是否適當，對厭氧菌培養能否成功至關重要。

注意：標本不能被正常菌群所污染。應盡量避免接觸空氣。一、標本采集與運送標本的采集與運送是否適當，對厭氧菌培養標本的采集方法一般情況下，應從無正常菌群寄居的部位采取標本。標本的采集方法不宜做厭氧菌培養①鼻咽拭子；②齒齦拭子；③痰和氣管抽取物；④胃和腸道內容物、肛拭；⑤接近皮膚和黏膜的分泌物；⑥褥瘡潰瘍及黏膜層表面；⑦排出的尿或導尿；⑧陰道或子宮拭子；⑨前列腺分泌物。不宜做厭氧菌培養經皮膚黏膜組織采集標本時，皮膚表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。采取標本時應盡量避免接觸空氣，多使用針筒抽取，減少標本與空氣接觸的機會。經皮膚黏膜組織采集標本時，皮膚表面需要2%碘酒消毒，以防正常二、臨床常見的厭氧菌厭氧菌（anaerobicbacteria）是指一大群在有氧條件下不能生長，必須在無氧條件下才能生長的細菌。二、臨床常見的厭氧菌厭氧菌（anaerobicbacter厭氧菌分為兩大類：一類是有芽胞的革蘭陽性梭菌，另一類是無芽胞的革蘭陽性及革蘭陰性的桿菌與球菌。根據革蘭染色性、形態、鞭毛、芽胞、莢膜和代謝產物等可將無芽胞厭氧菌分成40多個菌屬，300多個菌種和亞種；有芽胞厭氧菌只有一個菌屬，即梭菌屬，共130個種。厭氧菌分為兩大類：一類是有芽胞的革蘭陽性梭菌，另一類是無芽胞