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文檔簡介

淀粉的國標測定方法測定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的測定方法(酶-直接法)一、酶水解法1.原理樣品經除去脂肪及可溶性糖類后,其中淀粉用淀粉酶水解成雙糖,再用鹽酸將雙糖水解成單糖,最后按還原糖測定,并折算成淀粉。2.適用范圍009.9,適用于所有含淀粉的食物。3.儀器回流冷凝器水浴鍋4.試劑除特殊說明外,實驗用水為蒸餾水,試劑為分析純。(1)乙醚()碘溶液:稱取.6碘化鉀溶于0m水中,加入1.碘,溶解后加水稀釋至100m。85乙%醇。其余試劑同《蔗糖測定方法》5.操作方法樣品處理稱取?樣品,置于放有折疊濾紙的漏斗內,先用0m乙醚分次洗除脂肪(注:如果脂肪含量少,此步驟可免),再用約100m乙醇洗去可溶性糖類(注:此步驟目的是去除可溶性糖),將殘留物移入ml燒杯內,并用0m水洗濾紙及漏斗,洗液并入燒杯內,將燒杯置沸水浴上加熱1mn使淀粉糊化,放冷至60℃以下,加0m淀粉酶溶液,再560℃保溫1,并時時攪拌(注:溫度過高,淀粉酶的活性破壞)。然后取1滴此液加1滴碘溶液,應不現蘭色,若顯蘭色,再加熱糊化并加0m淀粉酶溶液,繼續保溫,直至加碘不顯蘭色為止。加熱至沸,冷后移入0m容量瓶中,并加水至刻度,混勻,過濾。(注:此時淀粉已水解成雙糖,過濾可去除殘渣和纖維素)棄去初濾液,取0n濾液,置于0m錐形瓶中,加m6m鹽酸,裝上回流冷凝器,在沸水浴中回流1,冷后加滴甲基紅指示劑,用m氫氧化鈉溶液中和至中性,溶液轉入100m容量瓶中,洗滌錐形瓶,洗液并入100m容量瓶中,加水至刻度,混勻備用。(淀粉在沸水浴條件下糊化是淀粉水解的第一步反應,然后在淀粉酶的作用下,分解成短鏈淀粉、糊精、麥芽糖等低聚合的糖,所以在淀粉酶解后需用酸進一步水解得到葡萄糖。)5.2測定按《還原糖的測定方法》操作。同時量取0m水及與樣品處理時相同量的淀粉酶溶液,按同一方法做試劑空白試驗。算X0.91m1X(A1-)A2X0.91m1X100X100(1)XX1000

100式中:樣-品-中淀粉的含量,式中:樣-品-中淀粉的含量,測定用樣品中還原糖的含量。g試劑空白中還原糖的含量,;0.9還測原測糖(以葡萄糖計)換算成淀粉的換算系數;試測樣品質量,;水解用樣品溶液體積,;樣品定容總體積,l測定用樣品處理液的體積,。二、酸水解法1.原理樣品經除去脂肪及可溶性糖類后,其中淀粉用酸水解成具有還原性的單糖,然后按還原糖測定,折算成淀粉。2適.用范圍本法適用于含淀粉的食物3.儀器水浴鍋。高速組織搗碎機:1200。rpm()皂化裝置并附錐形瓶。4.試劑除特殊說明外,實驗用水為蒸餾水,試劑為分析純。乙醚。85乙%醇溶液。()鹽酸溶液。()氫氧化鈉溶液。

().氫氧化鈉溶液。甲基紅指示液:0.2乙%醇溶液。()精密試紙。20乙%酸鉛溶液,10硫%酸鈉溶液。其余試劑同還原糖的測定。5.操作方法5.1樣品處理洗液合并于容量瓶中,加水稀釋至刻度。過濾,棄去初濾液0,濾液供測定用。5.2測定按還原糖的測定步驟操作。6.計算X0.90XX0.90XX10000-1001001)式中:樣品中淀粉的含量,;測定用樣品中還原糖的含量。;試劑空白中還原糖的含量,;稱測樣品質量,;測定用樣品處理液的體積,。00樣品液總體積,;0.9測測還原糖(以葡萄糖計)換算成淀粉的換算系數;

(注:酸水解能分解部分半纖維素,形成具有還原力的單糖,如木糖、阿拉伯糖等,可影響分析結果。為了比較正確地測定食物中淀粉含量,建議采用淀粉酶糖化淀粉,除去不可溶性的殘渣后,再用酸水解使之成為葡萄糖,然后測定其含量,最后換算成淀粉。三、可消化淀粉和抗性淀粉的測定方法(酶-直接法)1.原理樣品先在37℃下經a淀粉酶水解,使可消化淀粉轉化成葡萄糖,用乙醇提取,未水解的抗性淀粉部分經沸水浴凝膠化后,在淀粉葡萄糖苷酶轉化成葡萄糖,用葡萄糖氧化酶法分別測定葡萄糖含量,再換算成可消化淀粉和抗性淀粉含量。2.適用范圍參考和Ca的方法。適用于所有含淀粉食物的測定。3.儀器恒溫水浴箱溫箱分光光度計.試劑除特殊說明外,實驗用水為蒸餾水,試劑為分析純。()乙酸緩沖液(()乙酸緩沖液(H):稱取冰乙酸,并調節H5用水定容至。2乙酸鈉(CH3COONa?3H2O)溶于水中,加入27用公司)、淀粉葡萄糖苷酶溶液用公司)、淀粉葡萄糖苷酶溶液ra公司)溶液于研缽中,用離心,取上清液。(2)酶溶液:分別稱取a淀粉酶溶液(aa(acd公司)和3轉換酶(乙酸緩沖液研磨制成勻漿,并調節體積為:3(3)淀粉葡萄糖苷酶溶液:稱取2淀粉葡萄糖苷酶(a公司),加乙酸緩沖液研磨成勻漿。3離心,取上清液。()乙醇:乙醇加水至酸(6)2乙酸溶液:量取冰乙酸,加水至,混勻。()氫氧化鉀溶液:稱取22氫氧化鉀,用水溶解并加至。(6)2乙酸溶液:量取冰乙酸,加水至,混勻。(7)其它試劑同《葡萄糖測定方法》。5.操作步驟5.1樣品處理:測定時,直接稱取樣品0.?1;測定時,選用生的樣品,先研磨打碎后再稱取樣品0.?1,。測定時,則先將樣品加水煮沸至少15i使之凝膠化,然后取出放入4℃冰箱冷藏過夜,再混勻后稱取樣品0.?1(需折合水分)。加入10酶溶液,輕輕混勻。37℃溫箱或水浴中酶解16。加入40無水乙醇,使乙醇含量終濃度為0%充分搖勻。靜置30i3000離心15,上清液轉移至100容量瓶中。用0乙醇反復洗滌沉淀?3次。合并上清液并用乙酸緩沖液定容,供測定可消化淀粉用。5.水解抗性淀粉:將經反復洗滌的沉淀置于100℃干燥,然后用15水將沉淀轉移至錐形瓶中,沸水浴中加熱30i冷卻至室溫。加入1倍體積的4氫氧化鉀溶液,使氫氧化鉀終濃度為,室溫下混合30。(注:在樣品凝膠化后,氫氧化鉀的作用是進一步破壞淀粉結構,如果氫氧化鉀的濃度過高或過低,不利于結構破壞,操作中需注意。)加入約30乙酸溶液,調節為5.0,再加入淀粉葡萄糖苷酶溶液5i65℃~70℃水浴0。冷卻后將水解液轉移至100容量瓶中,用乙酸緩沖液定容至刻度。過濾。5.3測定:吸取0.5上清液(5.1)和抗性淀粉水解液(5.),按照葡萄糖氧化酶法分別測定葡萄糖含量(從測定步驟開始)。同時做葡萄糖標準曲線。6.計算根據葡萄糖標準曲線得出上清液中和抗性淀粉水解液中葡萄糖濃度,再根據稀釋定容體積和稱樣量分別計算出可消化淀粉和抗性淀粉含量。AAb)XVXFX0.X0.1X0.0.5X式中樣品中可消化淀粉抗性淀粉含量,100A由標準回歸方程求出的樣品測定管中葡萄糖含量,Ab由標準回歸方程求出的樣品空白管中葡萄糖含量,V樣品定容體積,;F稀釋倍數0.5測定時吸取樣品提取液的體積,;樣品質量,;0.1將轉換成100的系數。.注意事項根據抗性淀粉的分類,對樣品處理采用不同的處理方法。讀者可根據實驗需要選擇相應的方法。測定抗性淀粉時,模擬胃腸道內環境,根據a淀粉酶水解時間長短,將時已水解的淀粉稱為快消化淀粉,?水解的淀粉稱為慢消化淀粉,后仍沒有水解的淀粉稱為抗性淀粉。有的學者指出在體內實驗中,腸道對淀粉的消化能力可能超過認為的水解時間過

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