血小板免疫和血小板輸注無效GianPaoloVisentin教授 紐約州立大學布法羅分校血小板免疫和血小板輸注無效GianPaoloVisent血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件人類血小板人類血小板血小板濃縮液血小板濃縮液血小板血小板血小板與炎癥出現炎癥反應后，儲存的血小板活化，激活免疫和非免疫細胞，傳遞炎癥信息，進步活化血小板。血小板與炎癥出現炎癥反應后，儲存的血小板活化，激活免疫和非免血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITPDTIP的病原學機制免疫復合體藥物和PF4反應，與肝素形成免疫復合體，引發一系列免疫反應，結合Fc受體激活血小板。DTIP的病原學機制免疫復合體藥物和PF4反應，與肝素形成免肝素誘發的血小板減少癥（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，發病率和死亡率都很高抗體相關的HIT與肝素和PF4復合體相關抗體相關的HIT在肝素存在的情況下可以誘導血小板活化肝素誘發的血小板減少癥（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，發病HIT病原學機制HIT病原學機制肝素依賴抗體的檢測聚合血小板14C-胺釋放試驗（SRA)肝素介導血小板凝集反應肝素/PF4ELISA流式細胞檢測肝素依賴抗體的檢測聚合血小板DITP試驗藥物加樣，孵育洗板，除去未結合和Ig與抗-人Ig，孵育陽性=血小板結合藥物Ig>無結合血小板血清DITP試驗藥物加樣，孵育洗板，除去未結合和Ig與抗-人Ig血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP血小板同種抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多態性蛋白的構象改變，對功能沒有影響，但是在血小板輸注和懷孕時，這些改變可能成為抗體的結合點同種免疫反應有時很嚴重血小板同種抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多態性血小板表面GP糖蛋白的多態性血小板表面GP糖蛋白的多態性HPA相關的免疫性血小板減少HPA相關的免疫性血小板減少HPA系統HPA系統HPA系統HPA系統HPA系統HPA系統HPA等位基因頻率HPA等位基因頻率人類GPIII基因早期變異人類GPIII基因早期變異血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP嚴重的NATP嚴重的NATPNATP的病因學NATP的病因學HPA基因多態性頻率表HPA基因多態性頻率表CD36（GPIV)糖蛋白88KD在單核細胞，血管內皮細胞，有核紅細胞，脂肪細胞和血小板上有表達受體:I&IV型膠原，瘧疾感染紅細胞，血小板反應素，氧化LDL，長鏈脂肪酸同種抗原NaKa-1989CD36（GPIV)糖蛋白88KDCD36缺乏血小板：亞洲人：3-11%美國-非洲人：2.5%沙哈拉非洲人：7.8%高加索人種：0.06%第一類：血小板和單核細胞缺失，導致輸血或懷孕產生抗CD36的反應第二類：僅僅是血小板缺失CD36缺乏血小板：CD36基因32kb,15外顯子染色體：7q11.12日本:CD36缺失出現4個變異

T478C在外顯子4上的變異最常見

Pro90Ser,81Kb阻止變異非洲:CD36缺失出現7個變異

T1264G在外顯子10變異最常見終止密碼子CD36基因32kb,15外顯子NATP的診斷NATP的診斷常用診斷NATP的方法比較單克隆ACE28/32免疫熒光21/32（主要是流式細胞技術）GTI或其它公司ELISA14/32全部基因型12部分基因型5很多實驗室聯合應用多種方法常用診斷NATP的方法比較單克隆ACE血小板抗體ELISA檢測血小板抗體ELISA檢測流式細胞儀（免疫熒光）流式細胞儀（免疫熒光）流式細胞儀的應用流體學原理流式細胞儀的應用流體學原理FC放散光路FC放散光路FC分離細胞群FC分離細胞群熒光柱狀圖熒光柱狀圖血小板多態性Luminex100/200磁珠法檢測血小板多態性Luminex100/200磁珠法檢測Luminex檢測血清和磁珠孵育洗滌抗-人IgG孵育調整體積收集數據分析數據Luminex檢測血清和磁珠孵育商品化的血小板抗體檢測試劑GTI:PAK-PlusTM,PAK-AutoTM,PAK-LX,MACE-1TM,PF4-enhancedIMMUCOR:?Capture-PTM,MCPTM,Capture-PReadyScreenTMSTAGO:?HITTMDiaMed:?ID-HATBiotest:?Thrombomatch?HPA-1aTyping?HPA-1aTyping商品化的血小板抗體檢測試劑GTI:血小板抗原基因型檢測PCR-SSP血小板抗原基因型檢測PCR-SSPReal-timePCR檢測基因型Real-timePCR檢測基因型血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP血小板輸注無效診斷血小板輸注無效診斷血小板配型HLA-A\B相合提供無相關HLA-抗體的血小板如果無相合的血小板，可以提供血清學配型陰性的血小板輸注HLA-C是否相合，影響不大一些HLA-B抗云不相合（HLA-B45,44)在血小板上表達弱，可以不予考慮如果血清學配型的血小板輸注無效，應尋找HLA相合的供者ABO血型在血小板上表達，ABO同型輸注十分重要血小板配型HLA-A\B相合血小板形態血小板形態血小板同種抗體HLA的分子結構導致抗體產生不同同種免疫反應有不可預知性由于HLA抗原的多態性（CREGs),同一種HLA分子可以產生多種抗體，血小板同種抗體HLA的分子結構導致抗體產生不同HLA抗體檢測方法補體依賴固相檢測

CDC-ELISA-流式PRAAHG-CDC-Luminex檢測

-敏感度低-敏感度高-補體依賴的抗體-補體依賴、不依賴抗體均可HLA抗體檢測方法補體依賴HLA抗體檢測方法比較

敏感度通量自動化費用/樣本配置設備AHG-CDC低低不低顯微鏡ELISA中-低高是12美金讀板機Flow-PRA高中-高是？30美金細胞計數儀（3色）Luminex高高是10美金LuminexHLA抗體檢測方法比較

敏感度通量自動化費用/樣本配置設備A相對敏感度的比較Flow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDCFlow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDC相對敏感度的比較Flow>ELISA>AHG-Aug流式細胞儀檢測敏感不需要補體IgG特異性HLA抗原特異性流式細胞儀檢測敏感流式-PRA32種不同的磁珠包被HLA-I和II類抗原判斷主觀HLA特異性需進一步檢測流式-PRA32種不同的磁珠包被HLA-I和II類抗原什么是PRA？群體反應性抗體檢測抗體檢測是通過HLA特異性細胞完成器官移植，用來判斷抗HLA的程度抗原的范圍不確定，一般是常見的抗原什么是PRA？群體反應性抗體檢測流式方法檢測PRA流式方法檢測PRA流式方法檢測PRA流式方法檢測PRA輸血后HLA-I抗體的表達輸血后HLA-I抗體的表達Luminex方法檢測HLA抗體高通量多元化檢測敏感、準確，可以判定HLA抗體的特異性反應易觀察Luminex方法檢測HLA抗體高通量雙色，100個磁珠判定準確結果雙色，100個磁珠判定準確結果Luminex方法的抗體檢測實驗13種不同的Luminex磁珠分別代表HLA-I,II抗原每個磁珠包被6種HLA-I細胞和8種HLA-II細胞Luminex方法的抗體檢測實驗13種不同的Luminex磁Luminex檢測系統Luminex檢測系統Luminex抗體檢測Luminex抗體檢測REALREAL血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP輸血相關急性肺損傷TRALI定義：急性肺損傷（ALI)發生在輸血后6h以內，并且以前無急性肺損傷病史，無其它相關的急性肺損傷的危險因素。可能TRALI：ALI發生在輸血后6h以內，以前無急性肺損傷病史，存在一個以上相關的急性肺損傷的危險因素ALI定義：SpO2<90%orPa02/Fi02<300mmHg血氧偏低X線有滲出性病變輸血相關急性肺損傷TRALI定義：輸血相關急性肺損傷急性肺損傷的危險因素直接肺損傷間接肺損傷呼吸膿毒癥肺休克吸入性中毒外傷肺挫傷燒傷溺水急性胰腺炎心肺搭橋藥物中毒輸血相關急性肺損傷急性肺損傷的危險因素不同血液制品TRALI的發生率不同血液制品TRALI的發生率TRALITRALI反應模式圖反應模式圖人粒細胞抗原系統（HNA）人粒細胞抗原系統（HNA）人粒細胞抗原系統（HNA）人粒細胞抗原系統（HNA）粒細胞特異性抗體的臨床應用非溶血性發熱反應TRALI新生兒粒細胞減少癥自身免疫性粒細胞減少癥骨髓移植后持續性粒細胞減少粒細胞特異性抗體的臨床應用非溶血性發熱反應下一步下一步HLA\HPA供者庫的建立HLA\HPA供者庫的建立血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效GianPaoloVisentin教授 紐約州立大學布法羅分校血小板免疫和血小板輸注無效GianPaoloVisent血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件血小板免疫和血小板輸注無效-Gian-Paolo-Visentin課件人類血小板人類血小板血小板濃縮液血小板濃縮液血小板血小板血小板與炎癥出現炎癥反應后，儲存的血小板活化，激活免疫和非免疫細胞，傳遞炎癥信息，進步活化血小板。血小板與炎癥出現炎癥反應后，儲存的血小板活化，激活免疫和非免血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITPDTIP的病原學機制免疫復合體藥物和PF4反應，與肝素形成免疫復合體，引發一系列免疫反應，結合Fc受體激活血小板。DTIP的病原學機制免疫復合體藥物和PF4反應，與肝素形成免肝素誘發的血小板減少癥（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，發病率和死亡率都很高抗體相關的HIT與肝素和PF4復合體相關抗體相關的HIT在肝素存在的情況下可以誘導血小板活化肝素誘發的血小板減少癥（HIT)HIT伴有或不伴有血栓，發病HIT病原學機制HIT病原學機制肝素依賴抗體的檢測聚合血小板14C-胺釋放試驗（SRA)肝素介導血小板凝集反應肝素/PF4ELISA流式細胞檢測肝素依賴抗體的檢測聚合血小板DITP試驗藥物加樣，孵育洗板，除去未結合和Ig與抗-人Ig，孵育陽性=血小板結合藥物Ig>無結合血小板血清DITP試驗藥物加樣，孵育洗板，除去未結合和Ig與抗-人Ig血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP血小板同種抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多態性蛋白的構象改變，對功能沒有影響，但是在血小板輸注和懷孕時，這些改變可能成為抗體的結合點同種免疫反應有時很嚴重血小板同種抗原（HPA）血小板膜糖蛋白具有多態性血小板表面GP糖蛋白的多態性血小板表面GP糖蛋白的多態性HPA相關的免疫性血小板減少HPA相關的免疫性血小板減少HPA系統HPA系統HPA系統HPA系統HPA系統HPA系統HPA等位基因頻率HPA等位基因頻率人類GPIII基因早期變異人類GPIII基因早期變異血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP嚴重的NATP嚴重的NATPNATP的病因學NATP的病因學HPA基因多態性頻率表HPA基因多態性頻率表CD36（GPIV)糖蛋白88KD在單核細胞，血管內皮細胞，有核紅細胞，脂肪細胞和血小板上有表達受體:I&IV型膠原，瘧疾感染紅細胞，血小板反應素，氧化LDL，長鏈脂肪酸同種抗原NaKa-1989CD36（GPIV)糖蛋白88KDCD36缺乏血小板：亞洲人：3-11%美國-非洲人：2.5%沙哈拉非洲人：7.8%高加索人種：0.06%第一類：血小板和單核細胞缺失，導致輸血或懷孕產生抗CD36的反應第二類：僅僅是血小板缺失CD36缺乏血小板：CD36基因32kb,15外顯子染色體：7q11.12日本:CD36缺失出現4個變異

T478C在外顯子4上的變異最常見

Pro90Ser,81Kb阻止變異非洲:CD36缺失出現7個變異

T1264G在外顯子10變異最常見終止密碼子CD36基因32kb,15外顯子NATP的診斷NATP的診斷常用診斷NATP的方法比較單克隆ACE28/32免疫熒光21/32（主要是流式細胞技術）GTI或其它公司ELISA14/32全部基因型12部分基因型5很多實驗室聯合應用多種方法常用診斷NATP的方法比較單克隆ACE血小板抗體ELISA檢測血小板抗體ELISA檢測流式細胞儀（免疫熒光）流式細胞儀（免疫熒光）流式細胞儀的應用流體學原理流式細胞儀的應用流體學原理FC放散光路FC放散光路FC分離細胞群FC分離細胞群熒光柱狀圖熒光柱狀圖血小板多態性Luminex100/200磁珠法檢測血小板多態性Luminex100/200磁珠法檢測Luminex檢測血清和磁珠孵育洗滌抗-人IgG孵育調整體積收集數據分析數據Luminex檢測血清和磁珠孵育商品化的血小板抗體檢測試劑GTI:PAK-PlusTM,PAK-AutoTM,PAK-LX,MACE-1TM,PF4-enhancedIMMUCOR:?Capture-PTM,MCPTM,Capture-PReadyScreenTMSTAGO:?HITTMDiaMed:?ID-HATBiotest:?Thrombomatch?HPA-1aTyping?HPA-1aTyping商品化的血小板抗體檢測試劑GTI:血小板抗原基因型檢測PCR-SSP血小板抗原基因型檢測PCR-SSPReal-timePCR檢測基因型Real-timePCR檢測基因型血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP自身免疫引起的血小板減少癥-ITP,AITP新生兒同種免疫血小板減少癥-NATPHLA和HPA輸血后紫癜-PTP血小板輸注無效

HLA和HPA粒細胞抗體---TRALIHNA血小板免疫失調藥物誘發的血小板減少癥-DITP血小板輸注無效診斷血小板輸注無效診斷血小板配型HLA-A\B相合提供無相關HLA-抗體的血小板如果無相合的血小板，可以提供血清學配型陰性的血小板輸注HLA-C是否相合，影響不大一些HLA-B抗云不相合（HLA-B45,44)在血小板上表達弱，可以不予考慮如果血清學配型的血小板輸注無效，應尋找HLA相合的供者ABO血型在血小板上表達，ABO同型輸注十分重要血小板配型HLA-A\B相合血小板形態血小板形態血小板同種抗體HLA的分子結構導致抗體產生不同同種免疫反應有不可預知性由于HLA抗原的多態性（CREGs),同一種HLA分子可以產生多種抗體，血小板同種抗體HLA的分子結構導致抗體產生不同HLA抗體檢測方法補體依賴固相檢測

CDC-ELISA-流式PRAAHG-CDC-Luminex檢測

-敏感度低-敏感度高-補體依賴的抗體-補體依賴、不依賴抗體均可HLA抗體檢測方法補體依賴HLA抗體檢測方法比較

敏感度通量自動化費用/樣本配置設備AHG-CDC低低不低顯微鏡ELISA中-低高是12美金讀板機Flow-PRA高中-高是？30美金細胞計數儀（3色）Luminex高高是10美金LuminexHLA抗體檢測方法比較

敏感度通量自動化費用/樣本配置設備A相對敏感度的比較Flow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDCFlow>ELISA>AHG-AugmentedCDC>CDC相對敏感度的比較Flow>ELISA>AHG-Aug流式細胞儀檢測敏感不需要補體IgG特異性HLA抗原特異性流式細胞儀檢測敏感流式-PRA32種不同的磁珠包被HLA-I和II類抗原判斷主觀HLA特異性需進一步檢測流式-PRA32種不同的磁珠包被HLA-I和II類抗原什么是PRA？群體反應性抗體檢測抗體檢測是通過HLA特異性細胞完成器官移植，用來判斷抗HLA的程度抗原的范圍不確定，一般是常見的抗原什么是PRA？群體反應性抗體檢測流式方法檢測PRA流式方法檢測PRA流式方法檢測PRA流式方法檢測PRA輸血后HLA-I抗體的表達輸血后HLA-I抗體的表達Luminex方法檢測HLA抗體高通量多元化檢測敏感、準確，可以判定HLA抗體的特異性反應易觀察Luminex方法檢測HLA抗體高通量雙色，100個磁珠判定準確結果雙色，100個磁珠判定準確結果Luminex方法的抗體檢測實驗13種不同的Luminex磁珠分別代表HLA-I,II抗原每個磁珠包被6種HLA-I細胞和8種HLA-II細胞Luminex方法的抗體檢測實驗13種不同的