3/3ISO10993-23生物相容性刺激試驗(yàn)新方法—體外刺激試驗(yàn)

國際標(biāo)準(zhǔn)化組織于2021年1月頒布了刺激試驗(yàn)新標(biāo)準(zhǔn)ISO10993-23，在ISO10993-10的基礎(chǔ)上豐富和優(yōu)化了刺激試驗(yàn)體外替代方法的章節(jié)。刺激試驗(yàn)是醫(yī)療器械生物相容性測試的常規(guī)測試，醫(yī)療器械、醫(yī)療器械組件或生物材料的刺激試驗(yàn)可以使用器械、器械組件、生物材料本身或其浸提液進(jìn)行，豚鼠、兔子都是典型的動(dòng)物模型。一般通過皮內(nèi)注射或者表面涂抹進(jìn)行，動(dòng)物的皮膚狀況是試驗(yàn)的關(guān)鍵因素,只能使用皮膚健康無損傷的動(dòng)物。推薦在自然光線或全光譜燈光下觀察皮膚反應(yīng)，依據(jù)皮膚的紅斑、焦痂和水腫評分進(jìn)行刺激性判定。任何已確定為皮膚、眼、黏膜組織刺激物的材料,或是pH≤2.0或≥11.5的材料,不應(yīng)進(jìn)行刺激試驗(yàn)。需要進(jìn)一步的風(fēng)險(xiǎn)表征/評定的，例外情況下,即使已知被試材料是刺激物或材料的pH在上述范圍之外可能還是需要進(jìn)行測試,這種情況應(yīng)論證并形成文件。

隨著國內(nèi)外對于動(dòng)物福利的關(guān)注度越來越高，尋找驗(yàn)證新的體外測試途徑格外重要。體外刺激試驗(yàn)符合3R原則(Reduction,Replacement和Refinement)，可以大大縮短測試周期減少動(dòng)物成本。SkinEthic?RHE三維重建表皮模型由正常角質(zhì)形成細(xì)胞在碳酸酯膜經(jīng)過體外培養(yǎng)而成，含有正常的表皮角蛋白細(xì)胞,具有組織構(gòu)造的基底、棘突及顆粒層以及與體內(nèi)類似的多層角質(zhì)層，結(jié)構(gòu)和功能與人類的表皮非常接近。該型號均已通過ECVAM驗(yàn)證可用于確定供試品的皮膚刺激性。

方法★METHODS★

本試驗(yàn)中供試品分別在氯化鈉溶液和精制芝麻油中于培養(yǎng)箱浸提。陰性/空白對照對照為同條件下處理的浸提介質(zhì)，陽性對照為生理鹽水溶解配制的1%（w/v）十二烷基硫酸鈉(SDS/SLS)溶液。SkinEthic?RHE三維重建表皮模型接收后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中于二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜，次日取出模型給藥，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。約24小時(shí)后取出用不含Ca2+和Mg2+的PBS徹底沖洗組織沖洗后轉(zhuǎn)移至加有MTT的24孔板中，放回培養(yǎng)箱培養(yǎng)孵育，去除MTT溶液將SkinEthic?RHE皮膚模型轉(zhuǎn)移至加有異丙醇的震蕩，混勻，酶標(biāo)儀570nm波長測量吸光度。試驗(yàn)中陰性/介質(zhì)對照應(yīng)當(dāng)大于0.7，陽性對照需引起顯著的刺激性，所有活力數(shù)值標(biāo)準(zhǔn)差SD應(yīng)當(dāng)≤20%。

體外刺激試驗(yàn)方法簡便，可操作性強(qiáng)。蘇州藥明康德醫(yī)療器械測試中心已完成對該方法的驗(yàn)證和培訓(xùn)工作。國際ISO10993-23的頒布后，相信國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)已經(jīng)開始籌劃該標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化工作。國內(nèi)外每年有大量的醫(yī)療器械需要評估刺激性需