Chapter9維生素類藥物的分析維生素：是維持人體正常代謝機(jī)能所必需的微量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。人體不能合成維生素。發(fā)現(xiàn)簡(jiǎn)史公元前3500年-古埃及人發(fā)現(xiàn)能防治夜盲癥的物質(zhì)，也就是后來的維A。

1600年-醫(yī)生鼓勵(lì)以多吃動(dòng)物肝臟來治夜盲癥。1747年-蘇格蘭醫(yī)生林德發(fā)現(xiàn)檸檬能治壞血病，也就是后來的維C。1831年-胡蘿卜素被發(fā)現(xiàn)。1905年-甲狀腺腫大被碘治愈。1911年-波蘭化學(xué)家豐克為維生素命名。1915年-科學(xué)家認(rèn)為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的1916年-維生素B被分離出來。

1917年-英國(guó)醫(yī)生發(fā)現(xiàn)魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是缺乏維D引起的。1920年-發(fā)現(xiàn)人體可將胡蘿卜轉(zhuǎn)化為維生素A。

1922年-維E被發(fā)現(xiàn)。

1928年-科學(xué)家發(fā)現(xiàn)維B至少有兩種類型。

1933年-維E首次用于治療。

1948年-大劑量維C用于治療炎癥。

1949年-維B3與維C用于治療精神分裂癥。

1954年-自由基與人體老化的關(guān)系被揭開。

1957年-Q10多酶被發(fā)現(xiàn)。

1969年-體內(nèi)超級(jí)抗氧化酶被發(fā)現(xiàn)。

1970年-維C被用于治療感冒。

1993年-哈佛大學(xué)發(fā)表維生素E與心臟病關(guān)系的研究結(jié)果必需維生素13種

維生素A，維生素B，維生素C，維生素D，維生素E，維生素K，維生素H（生物素），維生素P，維生素PP，維生素M，維生素T，維生素U，水溶性維生素。

VitA、D2、D3、E、K1等

脂溶性水溶性

VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、煙酰胺分類：VitMVitPP常見維生素的生理活性維生素A

：有VA1-3，其中VA1活性最高，又稱為視黃醇；維生素A是眼睛中視紫質(zhì)的原料，也是皮膚組織必需的材料，人缺少它會(huì)得干眼病、夜盲癥等。對(duì)人體的生長(zhǎng)、視覺和生殖功能都很重要。維生素D：又稱鈣化醇，

與鈣、磷代謝及植物神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌及血管系統(tǒng)有密切關(guān)系，具有皮質(zhì)類固醇激素樣作用。可用于治療異位性皮炎、紅斑狼瘡、斑禿、聚合性痤瘡、泛發(fā)性膿皰性銀屑病等；與曬太陽有關(guān)。維生素E

可用于治療凍瘡、多形紅斑、結(jié)節(jié)性紅斑、單純性紫癜、色素性紫癜性皮膚病、肢端紫紺癥、痛經(jīng)以及治療抑郁癥。

維生素K

促進(jìn)肝臟合成凝血酶原及血漿因子，與皮質(zhì)類固醇激素有協(xié)同作用。可用于治療紫癜、慢性蕁麻疹、淋巴瘤伴皮膚瘙癢病等。

維生素B1

可用于治療濕疹、皮炎、膿皮病、念珠菌病、光感性皮膚病、帶狀皰疹后遺神經(jīng)痛、多發(fā)性神經(jīng)炎等。

維生素B2

可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、尋常須瘡、口周濕疹、日光性皮炎等。維生素B6

可用于治療脂溢性皮炎、脂溢性脫發(fā)、尋常痤瘡、酒渣鼻、濕疹、滲出性銀屑病、神經(jīng)性皮炎、妊娠癢疹、斑禿、唇炎等。維生素B12

是體內(nèi)多種代謝過程中必需的輔酶，參與核蛋白的合成，甲基的轉(zhuǎn)換以及脂肪和糖的代謝，可用于治療慢性蕁麻疹、接觸性皮炎、早期銀屑病、扁平疣、水痘、帶狀皰疹、扁平苔癬、脂溢性皮炎、光感性皮膚病等。維生素C

主要用于抗炎和抗衰老，可用于治療紫癜性皮膚病、濕疹、蕁麻疹、黃褐斑、黑變病、特發(fā)性斑狀色素沉著、早期銀屑病、砷劑皮炎等。-H維生素A醇-COCH3維生素A醋酸酯-COC15H31維生素A棕櫚酸酯R:第一節(jié)維生素A的分析全反式（一）為一個(gè)具有共軛多烯側(cè)鏈的環(huán)己烯1.具有UV吸收2.存在多種立體異構(gòu)化合物結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、維生素A325.5100%全反式新維生素Aa32875%2－順新維生素Ab320.524%4－順新維生素Ac310.515%2，4－順異維生素Aa32321%6－順異維生素Ab32424%2，6－順

相對(duì)生物效價(jià)順反異構(gòu)VitA2VitA33.易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)鯨醇△或有金屬離子存在時(shí)氧化↑臨床使用時(shí)成酯后，溶于植物油中；陰涼干燥處保存，還需加入N2或一定抗氧劑提高穩(wěn)定性。共軛多烯側(cè)鏈易被氧化（二）環(huán)氧化物VitA醛VitA酸（三）與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)CHCl3溶解性（四）不溶于水，微溶于乙醇；易溶于有機(jī)溶劑和植物油等(五)紫外吸收特征共軛多烯－－紫外吸收；325－328nm范圍內(nèi)有最大吸收，可用于鑒別和定量測(cè)定；三氯化銻反應(yīng)（一）條件：無水、無醇CHCl3鑒別試驗(yàn)二、SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正離子的正電荷消失藍(lán)色紫紅λmax為326nm一個(gè)吸收峰UV法（二）λmax為350～390nm三個(gè)吸收峰去水VitA（VitA3）↓VitAUSP顯色劑磷鉬酸規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值BP對(duì)照品法顯色劑三氯化銻TLC法（三）立體異構(gòu)體氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物合成中間體去氫維生素A（VitA2）去水維生素A（VitA3）UV法（三點(diǎn)校正法）（一）含量測(cè)定三、三點(diǎn)校正法1.前提條件：（1）雜質(zhì)的吸收在310~340nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的增大吸收度減小；（2）物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性。測(cè)定對(duì)象：VitA醋酸酯第一法等波長(zhǎng)差法第二法等吸收比法(皂化法)測(cè)定對(duì)象：VitA醇2.波長(zhǎng)的選擇：（1）1VitA的max（如VitA酯328nm）（2）23分別在1的兩側(cè)各選一點(diǎn)第二步：求3、測(cè)定法（1）基本步驟:第一步：A選擇，A328測(cè)定或A328校正第三步求效價(jià)第四步：求標(biāo)示量％A*D*換算因數(shù)*W＝W*100*標(biāo)示量×100％換算因數(shù)：?jiǎn)挝籈％1cm數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)數(shù)（由純品計(jì)算而得）

方法：（2）

第一法維生素A醋酸酯

判斷是否在326～329nm之間改用第二法是否

求算并與規(guī)定值比較

規(guī)定值差值

判斷差值是否超過03%－15%－3%第二法第二法

計(jì)算A328（校正）

用A328計(jì)算有超過0.02無超過f

VitAD膠丸中VitA的含量測(cè)定

精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物0.2399g至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)為328nm，并在下列波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度為A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299求本品中維生素A的含量？A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.344

0.5550.9071.0000.8110.299

+0.01－0.010+0.02+0.04

－－－－－=====適用于維生素A醇（等吸收比法）第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法[皂化法、6/7A法]（3）第二法水溶性脂溶性

判斷max是否在323～327nm之間取未皂化樣品采用色譜法純化后再測(cè)定

計(jì)算是否

判斷A300/A325是否大于0.73是否取未皂化樣品采用色譜法純化后再測(cè)定

計(jì)算A325(校正)03%－3%f三氯化銻比色法（二）優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便快速λmax618nm～620nm標(biāo)準(zhǔn)曲線法缺點(diǎn)：呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性（三）高效液相色譜法流動(dòng)相：正己烷－異丙醇（997︰3）檢測(cè)波長(zhǎng)：325nm第二節(jié)維生素B1的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1.溶解性(1)易溶于水(2)水溶液呈酸性3.UV共軛雙鍵λmax=246nm二、性質(zhì)2.硫色素?zé)晒夥磻?yīng)4.與生物堿沉淀試劑反應(yīng)雜原子的反應(yīng)，能與某些生物堿沉淀試劑反應(yīng)，生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測(cè)定。5.氯化物的特性6.硫元素反應(yīng)：與NaOH共熱，形成硫化鈉，＋硝酸鉛生成黑色沉淀；7.紅外光譜特征專屬性反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)（一）硫色素反應(yīng)硫色素＋2HVitB1H+H+H+H+（二）沉淀反應(yīng)S元素反應(yīng)Cl-反應(yīng)（三）其他反應(yīng)H+三、含量測(cè)定喹那啶紅－亞甲藍(lán)(紫紅→天藍(lán))（一）非水溶液滴定法UV法（二）片劑、注射劑=421（每片）相當(dāng)于標(biāo)示量的%=A=ECLChP11×

標(biāo)示量%×

WEA

×%cm×

100D××

100平均片重（每ml）相當(dāng)于標(biāo)示量的×

標(biāo)示量%×

VEA

×%cm×

100D×

100注意維生素Ｂ1的紫外吸收峰隨溶液的pH變化而不同：pH2.0時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)在246nm處；pH7.0時(shí)，2個(gè)吸收峰：232－233和266；可采用差示分光光度法測(cè)定其含量；NaOH（三）硫色素?zé)晒夥ǎ壕S生素B1的專屬性反應(yīng)原理1、+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇+NaOH+鐵氰化鉀+異丁醇+NaOH+異丁醇SdAb對(duì)照液供試液dSbAC樣′--=×C標(biāo)特點(diǎn)3、（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）專屬性強(qiáng)，氧化產(chǎn)物及代謝產(chǎn)物不干擾，可用于制劑分析，體液分析等。硫色素?zé)晒夥ㄌ攸c(diǎn)為維生素B1的專屬性反應(yīng)，可用于維生素B1及制劑的含量測(cè)定；不受氧化破壞產(chǎn)物的影響，結(jié)果較準(zhǔn)確；但操作比較復(fù)雜，受干擾因素多；氧化劑除了鐵氰化鉀外，還可以使用氯化汞或者溴化氰；第三節(jié)維生素C的分析L－抗壞血酸結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、（一）結(jié)構(gòu)二烯醇內(nèi)酯兩個(gè)手性碳（C4,C5）C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.572.酸性一元酸（二）性質(zhì)1.溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性L(+)－抗壞血酸活性最強(qiáng)手性C（C4、C5）3.旋光性**有活性有活性無活性4.還原性二烯醇結(jié)構(gòu)與堿反應(yīng)5.水解反應(yīng)△糖類的顯色反應(yīng)50℃結(jié)構(gòu)與糖類相似6.具糖的性質(zhì)7.UV特征nmnmmaxOHmaxH265l????243l????-+利用還原性：與氧化劑的反應(yīng)鑒別試驗(yàn)二、（一）與AgNO3反應(yīng)（二）與2，6-二氯靛酚反應(yīng)氧化型玫瑰紅色還原型藍(lán)色OHˉ（玫瑰色）（無色）與堿性酒石酸銅反應(yīng)USP與KMnO4反應(yīng)（三）與其他氧化劑反應(yīng)（四）糖類的反應(yīng)（藍(lán)色）(糠醛)（戊糖）50℃(吡咯)BP0.01mol/LHCl（五）UV三、雜質(zhì)檢查（一）溶液的澄清度與顏色檢查（二）鐵、銅離子的檢查維生素C原料藥片劑注射劑維生素C原料藥糠醛縮合呈色催化Vc氧化分解原子吸收法(三)草酸的檢查草酸與金屬離子作用形成沉淀；所以對(duì)Vc的原料，尤其是注射液，要進(jìn)行草酸檢查；加入CaCl2，比濁法；指示劑淀粉指示液（一）碘量法四、含量測(cè)定原理：利用Vc強(qiáng)的還原性H+

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6。2、方法原料藥（2）酸性環(huán)境稀醋酸

（1）新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度（3）立即滴定

趕走水中O2減少O2的干擾3、討論4.附加劑干擾的排除片劑——過濾注射劑——抗氧劑——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a(二)2，6-二氯靛酚滴定法1、原理2、方法自身指示終點(diǎn)法（2）快速滴定2min內(nèi)

（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC防止其他還原性物質(zhì)干擾（3）亦可剩余比色測(cè)定

（定量過量）（測(cè)剩余染料）3、討論（4）缺點(diǎn)

需經(jīng)常標(biāo)定貯存≤一周不穩(wěn)定專屬性強(qiáng)，多用于含Vc的制劑和食品的分析（5）優(yōu)點(diǎn)（三）高效液相色譜法血漿中維生素C的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液包括樣品預(yù)處理過程均需加入偏磷酸，偏磷酸同時(shí)可用于血樣中的蛋白沉淀；當(dāng)天取血當(dāng)天測(cè)定；處理好的樣品亦需冰箱保存第四節(jié)維生素D的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)維生素D2(麥角骨化醇)維生素D3(膽骨化醇)1.性狀無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末；無臭，無味。2.溶解性宜溶于有機(jī)溶劑，在植物油中略溶，在水中不溶。3.不穩(wěn)定性含有多個(gè)烯鍵，所以極不穩(wěn)定，宜氧化變質(zhì)，效價(jià)降低，毒性增強(qiáng)。（二）性質(zhì)4．旋光性維生素D26個(gè)手性碳原子維生素D35個(gè)手性碳原子5．顯色反應(yīng)甾類化合物氯仿溶液黃色紅色紫色綠色6．紫外吸收特性無水乙醇265nm維生素D2為460－490維生素D3為465－495醋酐硫酸E1cm1%E1%1cm二、鑒別試驗(yàn)

（一）顯色反應(yīng)1．與醋酐-濃硫酸反應(yīng)

氯仿溶液黃色紅色紫色綠色醋酐硫酸2．與三氯化銻反應(yīng)本品1,2-二氯乙烷

三氯化銻試液

橙紅色

粉紅色3．其它顯色反應(yīng)

維生素D

三氯化鐵

橙黃色

二氯丙醇乙酰氯綠色（二）比旋度鑒別無水乙醇溶液

維生素D2

比旋度為＋102.5°至＋107.5°維生素D3

比旋度為＋105°至＋112°（三）其它鑒別方法薄層色譜法、HPLC法制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)紫外、紅外吸收光譜

（四）維生素D2、D3的區(qū)別反應(yīng)維生素D2

維生素D3

96%乙醇

10ml取0.1ml

乙醇1ml和85%硫酸5ml

紅色λmax570nm

黃色

λmax495nm

三、雜質(zhì)檢查（一）麥角甾醇的檢查維生素D290%乙醇溶液

洋地黃皂苷溶液不得發(fā)生渾濁或沉淀（二）前維生素D的光照產(chǎn)物四、含量測(cè)定正相高效液相色譜法（一）維生素D測(cè)定法

含量以單位表示每單位相當(dāng)于維生素D0.025μg注意：計(jì)算的是維生素D及前維生素D經(jīng)折算成維生素D的總量測(cè)定在半暗室及避免氧化的情況下進(jìn)行第一法：無干擾雜質(zhì)第二法：有VA及其他雜質(zhì)干擾第三法：用第二法時(shí)，前VD峰受雜質(zhì)干擾僅VD峰可分離第一法內(nèi)標(biāo)物：鄰苯二甲酸二甲酯色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：填充劑：硅膠流動(dòng)相：正己烷-正戊醇（997：3）檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm無干擾雜質(zhì)維生素D3△光照前維生素D3反式維生素D3維生素D3速甾醇D3與維生素D3的比保留時(shí)間分離度＞1.0＞1.0溶液組成先后進(jìn)樣5次，維生素D3峰面積的RSD≤2.0%0.50.61.01.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)校正因子測(cè)定：維生素D的校正因子:f1=Asmi/Aims前維生素D折算成維生素D的校正因子:f2=（Asmr-f1msAr1）/（Ar2ms）含量測(cè)定：計(jì)算維生素D及前維生素D折算成維生素D的總量mi=（f1Ai1+f2Ai2）ms/As第二法第一步：皂化提取供試品OH-加熱回流冷卻乙醚提取乙醚提取液揮干乙醚殘?jiān)状既芙夤┰嚾芤篈有VA及其他雜質(zhì)干擾第二步：分離收集供試品溶液ARP-HPLC維生素D前維生素D維生素A及其他雜質(zhì)疊峰分離收集供試品溶液B維生素D及前維生素D第三步：按第一法進(jìn)行含量測(cè)定（內(nèi)標(biāo)法）揮干內(nèi)標(biāo)的正己烷溶液溶解第三法第一步：皂化提取同第二法得供試品溶液A第二步：供試品溶液ARP-HPLC維生素D前維生素D維生素A及其他雜質(zhì)疊峰分離供試品溶液C收集揮干異辛烷溶解90℃、1.5h揮干正己烷溶解前維生素D維生素D第三步：用第一法色譜條件按外標(biāo)法計(jì)算含量用第二法時(shí)，前VD峰受雜質(zhì)干擾苯并－二氫吡喃醇第五節(jié)維生素E的分析

一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)名稱R1R2相對(duì)活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***生物效價(jià)右旋體：消旋體=1.4：10（天然品）（合成品）dl－α－生育酚醋酸酯（二）性質(zhì)1、溶解性：易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水4、UV：乙醇溶液中UV284nm2、水解性：酯鍵易水解△3、氧化性：無氧條件下十分穩(wěn)定，200度也不被破壞；75℃15′（一）硝酸反應(yīng)橙紅色二、鑒別試驗(yàn)（橙紅色）生育紅生育酚HNO3強(qiáng)氧化