精選優質文檔-----傾情為你奉上精選優質文檔-----傾情為你奉上專心---專注---專業專心---專注---專業精選優質文檔-----傾情為你奉上專心---專注---專業見習實習方案[2010.9]課程名稱：醫學與生物安全課程編號：MED學分：2學時：36實習的目的與內容目的：實驗室生物安全是指在從事病原微生物實驗活動的實驗室中避免病原微生物對工作人員和相關人員的危害，對環境的污染和對公眾的傷害，為了保證試驗研究的科學性還要保護被試驗因子免受污染。其措施包括強化工作和管理人員生物安全意識，建立規范化、法制化和日?；墓芾眢w系，加強人才的建設、培訓，配備必要的物理、生物防護設施、設備，掌握規范的微生物操作技術和方法等。內容：設施系統……………1-2個人防護……………3-4生物安全柜…………5-6清場…………………7-8滅菌器………………9-10實驗室生物安全基礎見習實習指導（一）設施系統目的：闡述生物安全實驗室的防護原則，以及對實驗室設施、設備的要求。初步了解生物安全實驗室在建筑上的結構特征，如實驗室布局、送排風系統等。材料與物品：復旦大學三級生物安全防護實驗室實習步驟：生物安全實驗室為“盒中盒”結構，主要采用物理隔離分區與負壓通風過濾技術。因此見習的重點為這兩個方面。A[物理隔離分區]物理隔離（墻體）和密封門把實驗室與公共環境分開，這里重點介紹BSL-3實驗室由外到內可以劃分為清潔區（更衣、淋?。?、緩沖區I、半污染區（準備間）、緩沖區II、核心區（實驗操作區）五個區域，其中緩沖區兩扇門互鎖，加上負壓通風，保證實驗室內氣流為定向流，方向為：非污染區→半污染區→核心區。見習要點：控制室內PLC控制系統上實驗室平面分區圖告知分區設置、進出路線。B[負壓通風過濾技術]負壓通風過濾主要應用于BSL-3/4、ABSL-3/4。在BSL-3實驗室通風設計中，要求各區室之間氣壓保持一定的壓力梯度，且走向恒定（此處不是指實驗室任何時刻氣流都是在房間與房間之間竄動，而是指各區之間門打開時，不出現倒灌現象）。因此要求風機開啟時先排后送，關閉時，先送后排。核心區與半污染區的空氣一律要經HEPA過濾后排放。因此其安裝位置應盡量減少污染范圍，即HEPA盡可能靠近污染源。按照GB19489-2004要求，BSL-3實驗室應頂部送風，下面排風，且送風口與排風口呈對角分布。另HEPA安裝在排風口的最前端。BSL-3實驗室空氣排出方向：室內→前端HEPA→末端HEPA（BIBO）→環境安全柜內空氣：安全柜內→安全柜HEPA→排放管道→末端HEPA→外環境見習要點：機房內告知其新風采集、過濾；排風中BIBO布置，風管走向、排風口設置。注意事項： 1．實習過程中禁止亂碰觸摸實驗室內設施設備 2. 實習過程中實驗室內按鈕、開關未經允許禁止隨意按下附：見習過程中需介紹到的內容：位置：建筑物中自成隔離區（帶出入控制）或為獨立建筑物平面布局：分區組成、安全門設置位置、傳遞窗使用、安全柜位置原理入口等維護結構：抗震防火密封避污染門自動關閉、發光指示、防嚙齒類節肢動物進入等通風系統：A 獨立的送排風系統確保氣流走向與壓力梯度B 送風與排風對角分布，上送下排，降低氣流死角與渦流形成C 送排風為直排式，不得采用回風結構D BSC內氣體經HEPA直接排出，確保BSC與排風系統平衡E 送風經初、中、高三級過濾，保證污染區的靜態潔凈度為7-8級，10W-1w級F 排風口直排，遠離送風口，設置在主導風下風向，高出建筑物2m，防雨鼠蟲G HEPA安裝在送風末端，排風前端H 安裝牢固，部件氣密，HEPA更換前消毒，更換后焚燒消毒，年檢制度I 送排風安裝氣密閥，必要時進行房間化學熏蒸J 安裝風機與安全柜啟動連鎖裝置，確保實驗室不出現正壓與確保生物安全柜內氣流不倒流，排風機一用一備，K 核心區與半污染區不應另外安裝分體空調、暖風、電風扇等環境參數：A 室內負壓，核心區-50Pa左右，半污染與實驗室之間相對-30Pa，半污染區的相對壓力以（-20+-5）Pa為宜，B 實驗室溫度以人體舒適范圍為宜，相對濕度不超過70%C 空氣潔凈度1-10w級D 照明均勻，不炫目，不反光，工作照度不大于500lxF 噪聲不超過65dB其它A 臺面防水耐熱耐腐蝕B 家具牢固易清潔，邊角光滑無毛刺C 最好不要使用真空泵，如需要真空管線接入在線高效過濾器，且不影響室內的負壓D 壓縮鋼瓶放于實驗室外E 安全出口應有長效發光指示標識F 電源確保實驗室工作期間有不間斷的電力供應G 實驗室入口處的顯著位置安裝聲光報警壓力顯示裝置H 通訊系統如電話、傳真、計算機等

實驗室生物安全基礎見習實習指導（二）個人防護部分目的：1.掌握各種個人防護用品的正確使用方法，穿脫步驟。2.理解不同危害等級使用不同的個人防護用品3.了解個中個人防用品的工作原理準備物品：口罩（N95，普通），手套，防護服（聯體，反穿），鞋套，靴套，袖套，帽子，面罩N95口罩個人密合適合性檢測系統；正壓呼吸系統步驟：以進入的實驗生物安全等級為基礎，考慮個人防護級別及防護要求的重點。清查所需個人防護用品是否齊全。任何個人防護用品使用前務必檢查其質量，確保安全。穿戴過程：脫防護用品過程：注意事項：同一層次防護，手套腕部需蓋過防護服腕部；須選擇自己適合的尺寸；N95口罩需要先進行個人密合適合性試驗。應急情況下，視具體情況使用正壓呼吸系統。1）使用前準備：設備應完好、無損、安裝正確，使用前應更換任何損壞或有缺陷部件；根據使用的使用說明對面罩做使用前檢查；使用前，檢查i.s.電機罩，將腰帶安裝在電動送風裝置上。2）電池提前充電，3）校準，4）檢查濾罐，5）檢測流量，6）連接裝置，7）調整面罩，8）注意事項：注意防止呼吸管卷繞在突出的物體上；使用中若進入面罩的氣流停止，或流量降低且有警報，或感覺到有異味，應立即撤出污染區，檢查故障原因。9）摘卸：應先撤出污染區域，再將面罩從頭上取下后，關閉電源，解開腰帶。穿戴防護用品過程脫去防護用品過程

實驗室生物安全基礎見習實習指導（三）生物安全柜目的：1.掌握生物安全柜內感染性物質操作的一般準則和技術要點；2.熟悉生物安全柜運行的一般規則；3.了解生物安全柜故障時的一般處理原則。準備物品：培養液、TRIZOL細胞培養瓶、病毒收集瓶、15ml離心管廢物缸、廢液缸、廢物盒實驗步驟：個人防護裝備：口罩，手術帽，手套（內白外蘭），防水衣，鞋套BSC的準備:啟動程序，清潔，UV消毒物品清單，物品運入及擺放（見附圖）實驗重點一：樣品離心，3000rpm5’。防氣溶膠操作方法實驗重點二：感染上清收集，防意外接種及氣溶膠操作方法。物品退出BSC:實驗樣品，干凈物品，廢物BSC清潔:酒精擦拭廢棄物處理:高壓滅菌程序結束實驗:防護服脫卸，洗手附：BSC內物品擺放示意圖（fortheright-hand）污染區域污染區域清潔區域實驗區域實驗步驟及記錄時間：實驗人員：實驗室：物品準備：培養液、TRIZOL細胞培養瓶、病毒收集瓶、15ml離心管廢物缸、廢液缸、廢物盒實驗步驟：將帶入的H9細胞，廢物缸、廢液瓶、廢物盒、離心管、Trizol試劑等實驗必需品按相對污染與清潔區依次放置。分別將已接種HIV的H9細胞從培養箱內取出，編號，置顯微鏡下觀察，記錄見下。在安全柜正中靠操作者處鋪上吸水墊，噴上75%酒精。吸出已接種HIV的H9細胞懸液，編號，移入15ml離心管。將離心管在安全柜內放入離心杯中，噴消毒液，更換手套，帶出離心。轉/分鐘，離心分鐘。將離心杯帶入安全柜內，取出離心管。離心杯噴灑消毒劑后取出。分別將上清以每個ependorf管0.5ml分裝，標記保種，共管，標記。放入密封盒，記錄見附表。分別吸取ml病毒上清至帶入的未接種H9細胞培養瓶內，輕搖培養瓶混合，使病毒上清充分接觸細胞。細胞培養瓶外表面噴灑消毒劑后，拿出安全柜后放入培養箱。標記。將剩余上清，注意不要將沉淀細胞懸起。吸取微升Trizol加入細胞沉淀，混勻后吸出，移入1.5ml離心管，標記，放入密封盒，外表面噴灑消毒劑后，拿出安全柜。將吸水墊收起放入廢物盒，雙手噴上消毒劑，脫去外層手套，重戴干凈手套。將安全柜內物品噴灑消毒劑后取出，取出順序為干凈的物品先取出，廢棄物收集盒最后取出。最后將安全柜臺面噴灑消毒劑后，從干凈區域到污染區域的順序擦拭清潔。脫去外層手套帶出。換上干凈外層手套，關上安全柜窗口，打開紫外，定時15分鐘。實驗結果：實驗意外情況及處理：

實驗室生物安全基礎見習實習指導（四）清場、消毒與廢棄物處理目的：1.掌握實驗后清場的基本操作程序；2.了解消毒的原理及原則；3.了解污染廢棄物處理的基本程序。準備物品：培養液、TRIZOL細胞培養瓶、病毒收集瓶、15ml離心管廢物缸、廢液缸、廢物盒滅菌整理箱，生物安全廢物袋、滅菌指示帶、消毒劑（乙醇、新潔爾滅、氯）。步驟：良好的實驗行為規范是生物安全防護的重要保證，正確的清場程序是良好的實驗行為規范的一部分。清場可分為日常實驗后清場和實驗對象變更后清場。消毒劑的分類、消毒原理，配置方法以及消毒劑的選擇。清場消毒的操作規程：日常實驗過程按照不同的實驗安全操作規程進行。實驗結束后，由實驗人員進行清場，首先更換新的外層手套。處理實驗樣品如：取出實驗樣品放回冰箱，取出細胞培養瓶放回37℃取出所有未使用的物品如：未拆包裝的移液管等。在使用過的移液器表面上噴灑75%乙醇，然后取出移液器放入抽屜中。將實驗區域的吸水紙巾折疊好放入廢物盒中。將廢物盒中廢物整理好，拉起廢物袋，用膠帶將袋口扎好但不可過緊，貼好滅菌指示膠帶或放入滅菌指示劑，并在指示膠帶上寫明消毒日期。將廢液瓶放入廢物盒中。蓋上廢物盒的蓋子，然后在盒子表面噴灑75%乙醇。更換一副新的外層手套。取出廢物盒放入滅菌整理箱中。用75%乙醇清潔安全柜內清潔區域、污染區域及實驗區域所有表面，并用紙巾擦干。更換一副新的外層手套。關閉生物安全柜，設置UV照射。退出實驗室，帶出實驗后的廢棄物，進行高壓滅菌。60min后關閉通風系統。每周對地面和墻面消毒清潔一次。所有滅菌消毒處理后的廢物作為危險廢棄物收集于洗滌室的醫療廢棄物回收桶內，廢棄物應放置整齊，然后蓋好回收桶的桶蓋。所有滅菌消毒處理后的廢棄物送往指定的單位進行焚燒處理，定點單位定期到實驗室收取需要做焚燒處理的廢棄物。實驗室廢棄物處理人員和焚燒單位工作人員共同完成廢棄物回收記錄。

實驗室生物安全基礎見習實習指導（五）高壓蒸汽滅菌器的使用目的：1.掌握滅菌的原理和條件；2.了解高壓蒸汽滅菌器的使用。準備物品：高壓蒸汽滅菌器，滅菌整理箱，生物安全廢物袋、滅菌指示帶/劑、化學指示卡。步驟：滅菌的方法和原理。滅菌器的種類、構造和工作原理。雙扉高壓滅菌器的操作規程：3.1準備工作：開啟中控室總電源。確認水箱水位及水質。確認內室及夾套壓力。確認真空泵，壓縮泵。確認清潔側門。3.2使用程序：將滅菌室墻上所有電源開關置于向上接通電源，壓縮泵啟動，。打開控制系統電源，啟動滅菌器。按住污染側門（后門）開門按鈕，將滅菌物品均勻地放入到滅菌器內室中，同時放入生物滅菌指示劑。按住后門關閉按鈕，關閉電動門直到門墊圈充氣封緊為止。點擊控制面板觸摸屏上的run模塊，進入滅菌器控制系統。面板左上方顯示當前所處的行程，右上方顯示當前使用的程序，下方顯示“程序”“檢測”“啟動”和“校溫”四個可點擊的模塊。面板中間顯示滅菌器當前的條件狀態包括：空氣源，蒸汽源，水源以及前后門的狀態和夾套溫度和壓力。點擊面板畫面中“程序”模塊，畫面即進入程序選擇界面，顯示以下六種程序：輔料類，器械類，凈化，液體類，下排汽和動物類。點擊需要選擇的程序模塊。設定完畢后點擊確定模塊即完成程序的設定。選擇程序完畢后，滅菌器進入準備行程，蒸汽發生器產生蒸汽，夾套壓力不斷上升。可點擊“檢測”模塊，顯示輸入輸出通斷狀態，點擊“返回”模塊，則返回目前行程。當面板顯示“空氣源開關閉合蒸汽源開關閉合水源開關閉合前門關閉后門關閉”，壓力表顯示超過0.2MPa，以上條件均滿足的時候，可點擊觸摸屏上“啟動”模塊，啟動滅菌程序。當滅菌程序所有行程進行完畢以后，面板顯示“行程完畢，可開門”，壓力表顯示壓力為0MPa，開門燈亮起，此時可按住前