微生物檢驗學之衣原體及檢驗微生物檢驗學之衣原體及檢驗微生物檢驗學之衣原體及檢驗V:1.0精細整理，僅供參考微生物檢驗學之衣原體及檢驗日期：20xx年X月衣原體及檢驗一、概述

（一）概念衣原體是一群體積較小，能通過細菌濾器，細胞內專性寄生，并有獨特發育周期的原核細胞型微生物。由于它具有一些與細菌類似的生物學特性，現歸屬于廣義的細菌范疇。（二）分類與命名

1.傳統分類法按第九版Bergey細菌學分類手冊，衣原體屬于衣原體目、衣原體科、衣原體屬。根據衣原體的抗原構造和DNA同源性的特點，將衣原體屬分為四個種，包括沙眼衣原體、肺炎衣原體、鸚鵡熱衣原體和家畜衣原體。能引起人類致病的主要是前三種。

沙眼衣原體可分三個生物亞種，即沙眼生物亞種、性病淋巴肉芽腫生物亞種（LGV）及鼠生物亞種。其中沙眼亞種又分A～K14個血清型；LGV生物亞種又分4個血清型L1、L2、L2a和L3。前兩個亞種對人類有致病性，鼠亞種則不侵犯人類。

肺炎衣原體是衣原體屬中的一個新種。只有一個血清型，即TWAR組。

2.分子生物學特性分類法該法主要是從衣原體種系發生上分析和評價傳統分類法。

二、生物學性狀

1.發育繁殖周期與形態染色衣原體在宿主細胞內生長繁殖有獨特的發育周期，可見到兩種形態結構不同的顆粒。

（1）原體：呈球形或橢圓形，直徑約0.3μm，外有胞壁，內含致密的核質，為成熟的衣原體。吉姆薩染色呈紫色，Macchiavello染色呈紅色。在細胞外較為穩定，無繁殖能力，但有高度的感染性。（2）網狀體又稱始體：呈球形或橢圓形，直徑0.5～1μm，無胞壁，胞漿內無致密的核質，而有纖細的網狀結構。吉姆薩染色和Macchiavello染色均呈藍色。為衣原體發育周期中的繁殖型，代謝活潑，不能自胞外存活，無感染性。

衣原體的發育周期：原體當與易感細胞表面的特異受體吸附后，通過細胞的吞飲作用進入細胞，形成吞噬小泡。原體在泡內變軟，增大為網狀體。約8小時后，網狀體在空泡內以二分裂方式繁殖、聚集，構成各種形狀的包涵體。感染18～24小時后，網狀體濃縮形成具有堅韌細胞壁的原體，最后隨宿主細胞破裂而釋出，再感染新的易感細胞，開始新的發育周期。每個發育周期約需40～72小時。2.抗原成分衣原體的抗原性相當復雜，有屬、種、型等特異性抗原。

（1）屬特異性抗原：衣原體細胞壁LPS為屬特異性補體結合抗原。其與革蘭陰性菌LPS結構不同，缺乏O-多糖和部分核心多糖，無典型內毒素生物學活性。長期應用于衣原體血清學診斷。

（2）種特異性抗原：主要位于外膜蛋白（MOMP）上。

（3）型特異性抗原：也位于MOMP上，用單克隆抗體作微量免疫熒光試驗可識別衣原體各血清型。3.分離培養特性衣原體專性細胞內寄生。絕大多數能在6～8日齡雞胚卵黃囊中生長繁殖，并可在卵黃囊膜中找到包涵體、原體和始體顆粒，也可在傳代細胞（如HeLa-299和Mc-Coy等細胞株）中培養。

4.抵抗力衣原體抵抗力弱，沙眼衣原體感染材料在35～37℃條件下，經48小時左右即失去活性。不耐熱，加熱50℃經30分鐘或56～60℃5～10分鐘可殺死，但耐寒，在冰凍條件下可存活數年。鸚鵡熱衣原體比沙眼衣原體穩定。對四環素、青霉素、紅霉素、螺旋霉素、利福平較敏感。

三、臨床意義

人類衣原體病主要包括：

（一）沙眼衣原體

1.沙眼由沙眼生物亞種A、B、Ba和C四個血清型引起。主要通過眼-眼或眼-手-眼（常通過公用毛巾等媒介）的途徑進行直接或間接接觸傳播。

2.包涵體結膜炎由沙眼生物亞種B、Ba、D、Da、E、F、G、H、I、Ia、J、K血清型引起。包括嬰兒及成人兩類。嬰兒經產道時該亞種可致包涵體結膜炎和嬰幼兒肺炎。3.泌尿生殖道感染主要由沙眼生物亞種D-K血清型引起，是經性接觸傳播引起的非淋菌性泌尿生殖道感染的主要病原。衣原體感染是男性尿道炎最常見的病因之一。未經治療者多數轉為慢性，周期性加重，或可合并附睪炎、前列腺炎等。在女性可引起尿道炎、宮頸炎、陰道炎、盆腔炎，也可與婦女不孕癥有關。衣原體常與淋病奈瑟菌混合感染，淋病奈瑟菌對衣原體的繁殖起激活和促進作用。

4.性病淋巴肉芽腫由沙眼衣原體LGV生物亞種（L1、L2、L2a、L3）血清型引起，主要通過性接觸傳播。引起以化膿性腹股溝淋巴結炎為特征的性病，又稱第四性病。

主要侵犯淋巴組織，女性以累及會陰、肛門、直腸及盆腔淋巴結多見，男性以累及腹股溝淋巴結為常見，發生化膿性炎癥和慢性肉芽腫，有些可形成瘺管。（二）鸚鵡熱衣原體主要引起鳥類或家禽感染，由感染該衣原體的鳥類等動物的糞便污染環境，以氣溶膠形式傳給人類。使人類發生上呼吸道感染、肺炎和毒血癥。典型臨床表現為非典型肺炎。也有引起心內膜炎的報道。

（三）肺炎衣原體其傳播方式主要是人與人之間經飛沫或呼吸道分泌物傳播。引起青少年急性呼吸道感染，以肺炎為主，常可呈地方性、散發性流行，也可引起支氣管炎、咽炎等。該衣原體也可引起慢性感染，其與急性心肌梗死和慢性冠心病的關系越來越引起注意。

四、微生物檢驗

1.標本采集與處理

（1）沙眼衣原體：沙眼和包涵體結膜炎的患者，取眼穹隆部及瞼結膜病灶作刮片。子宮頸炎取子宮頸刮片上皮細胞或分泌物作涂片。標本置于運送培養基中送檢，常用的運送培養基為2SP培養基。

性病淋巴肉芽腫患者可取腹股溝淋巴結膿液，也可取直腸拭子或活檢材料送檢。（2）鸚鵡熱衣原體：采取患者血液、痰液或咽喉含漱液，痰標本用約2～10倍的滅菌肉湯或組織培養液洗脫附著在標本上的病原體，用力振搖，制成懸液，置室溫1～2小時后，低速離心取上清液接種。尸檢材料取肝、脾、肺等組織，也可采腹腔和心包滲出液。

（3）肺炎衣原體：一般利用拭子經鼻前庭插入鼻咽部，旋轉后取出，利用轉運培養基，冷藏送檢。也可采集氣管內痰液或肺泡灌洗液。要求24小時內接種或置-70℃保存。2.直接顯微鏡檢查染色鏡檢，尋找上皮細胞細胞質內的包涵體。包涵體即指在易感細胞內含增殖的始體和子代原體的空泡。根據包涵體的形態、在細胞內的位置及染色性等特性，對鑒別衣原體有意義。

（1）吉姆薩（Giemsa）染色：原體呈紫紅色，始體呈藍色，包涵體呈深紫色。沙眼衣原體包涵體密度低，呈空泡形。鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體包涵體呈深密度的卵圓形，肺炎衣原體在HeLa細胞中的包涵體形態與鸚鵡熱衣原體十分相似，但不像鸚鵡熱衣原體具有多形性。

（2）碘液染色：標本經甲醛固定后，用Lugol碘液染10分鐘，水洗后鏡檢。因包涵體的基質含有豐富的糖原，可被碘液染成深褐色，而細胞的其他部分呈黃色。沙眼衣原體含糖原，碘液染色陽性。鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體碘液染色陰性。

（3）可利用抗LPS單抗進行直接法熒光抗體染色檢測上皮細胞內的衣原體抗原。3.酶免法檢測抗原可檢測臨床標本中的可溶性抗原。

4.核酸檢測按MOPO基因序列或其他具有種、型特異性的核酸片段，構建特異性引物或探針，利用PCR、核酸探針技術進行檢測。按16SrRNA基因序列設計引物一般具有屬特異性。

5.分離培養各種衣原體均可在雞胚卵黃囊和組織細胞內生長繁殖，鸚鵡熱衣原體常用小鼠分離。

（1）雞胚卵黃囊接種：將檢查標本加適當抗生素（如鏈霉素等）處理后接種于雞胚卵黃囊分離培養。（2）細胞培養：目前常用的細胞有兩種：即經X線照射的McCoy細胞和HeLa細胞。不同種的衣原體有各自最適合的培養細胞系。沙眼衣原體多用McCoy細胞，鸚鵡熱衣原體適合用Hela229細胞系進行培養。肺炎衣原體適合用HEP-2和HL細胞系進行培養。為了達到較好的培養效果，可對細胞系進行一定處理，可以用DEAE葡聚糖預處理，以便增加分離率，也可以用細胞生長抑制劑，抑制宿主細胞生長，以利于衣原體的分離培養。

（3）小白鼠接種：小白鼠對不同種衣原體的敏感性不同，對沙眼衣原體不敏感，主要用于鸚鵡熱衣原體的分離。用小鼠腹腔、顱內或滴鼻接種。

6.檢測抗體用補體結合試驗、微量免疫熒光法、酶免法檢測抗體。

五、治療原則

四環素類及大環內酯類對衣原體有較高的活性，青霉素類、磺胺、氧氟沙星以及利福平等也有一定的活性，磺胺對肺炎衣原體無效。孕婦、哺乳期婦女以及兒童禁用四環素而首選紅霉素。【例題】下列何種微生物能通過濾器

A.軍團菌

B.分枝結核桿菌

C.衣原體

D.肺炎克雷伯桿菌

E.流感嗜血桿菌

『正確答案』C

『答案解析』衣原體是一群體積較小，能通過細菌濾器，細胞內專性寄生，并有獨特發育周期的原核細胞型微生物。【例題】下列說法正確的是

A.衣原體與病毒結構相似

B.衣原體可引起非典型肺炎

C.衣原體對抗生素不敏感

D.衣原體無自己的酶系統

E.衣原體不能通過濾器

『正確答案』B

『答案解析』人類衣原體病主要包括沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體和肺炎衣原體。其中，鸚鵡熱衣原體主要引起鳥類或家禽感染，由感染該衣原體的鳥類等動物的糞便污染環境，以氣溶膠形式傳給人。使人發生上呼吸道感染、肺炎和毒血癥。典型臨床表現為非典型肺炎。