3/3分析方法驗證方案異煙肼含量測定分析方法驗證方案驗證原因：驗證類型：

新項目驗證再驗證

其它

預驗證

回顧性驗證轉移驗證

方法描述：

本分析方法為中國藥典2010版二部方法。為確保其檢測結果準確，對該分析方法的專屬性、精密度（系統精密度、方法精密度、中間精密度）、線性和范圍、準確度、耐用性進行評價。

驗證依據：

中國藥典2010年版分析方法（295頁）

驗證時間：

2010年07月09日～2010年07月10日

驗證項目組成員及職責：

驗證內容:-

a)人員培訓：

b)儀器設備、標準品和試劑：

儀器設備

標準品和試劑

c)樣品

色譜條件

色譜條件

色譜柱：agilentODS-2長度：250cm，內徑：4.6mm，填料C18，填料粒度：5μm檢測波長：262nm，帶寬30

柱溫：25℃

進樣量：20μl

流速：1.0ml/min

流動相A：0.02mol/l磷酸氫二鈉溶液（用磷酸調pH至6.0），流動相B：甲醇

A:B=85:15

停止時間：12min

1.系統精密度

1.1.溶液配制

系統精密度溶液：取異煙肼10mg，置100ml容量瓶中，精密稱量，用水溶解并稀釋至刻度。

1.2驗證過程及結果

系統精密度溶液連續(xù)進樣6次，記錄其異煙肼峰面積、保留時間。

可接受標準：異煙肼峰面積RSD≤2.0%,保留時間RSD≤2.0%。

結論：

2.重現性試驗（方法精密度）

2.1.溶液配制

2.1.1.對照溶液：取異煙肼工作標準品10mg，精密稱量，置100ml容量瓶中，用水溶解

并稀釋至刻度。

2.1.2.方法精密度溶液：取異煙肼樣品10mg置100ml容量瓶中，精密稱定，用水溶解并

稀釋至刻度。用此方法配置同一批號的樣品溶液6份。

2.2.驗證程序及結果

工作標準品溶液進2針，樣品溶液各進2針。記錄異煙肼峰面積，計算樣品含量。

可接受標準：異煙肼含量的RSD≤2.0%。

結論：

3.線性和范圍

3.1.溶液配制

3.1.1.a供試品溶液：取異煙肼50mg，置100ml容量瓶中，精密稱量，用水溶解并稀釋至

刻度，混勻，即得。

3.1.2.線性點溶液：精密移取a供試品溶液5ml、2ml、1ml、分別置10ml容量瓶中，用水

稀釋至刻度，得到濃度約為50ug/ml（d供試品溶液）、100ug/ml（c供試品溶液）、250ug/ml（b供試品溶液）、500ug/ml（a供試品溶液）的線性點溶液，再精密移取1mlb供試品溶液1ml置100ml容量瓶中，用水稀釋至刻度，得到濃度約為2.5ug/ml（e供試品溶液）。

3.2.驗證程序及結果

按色譜條件分別對線性點溶液進行分析，每個溶液進樣1次。以濃度為X軸，主峰峰面積平均值為Y軸，畫出線性圖，求出回歸方程，計算線性相關系數R。

可接受標準：R≥0.999

結論：

4.準確度

4.1.溶液配制

4.1.1.對照溶液：取異煙肼10mg，置100ml容量瓶中，精密稱量，用水溶解并稀釋至刻

度，混勻，即得。

4.1.2.準確度溶液：以對照溶液濃度為100%，配置80%、100%和120%濃度的準確度溶

液。即分別取同一批異煙肼樣品8mg、10mg、12mg至100ml容量瓶中，精密稱量，用水溶解并稀釋至刻度。每個濃度的準確度溶液配制3份。

4.2.驗證程序及結果

按照色譜條件分別對對照溶液和準確度溶液進行分析，每個溶液各進2針，按外標法計算準確度溶液中異煙肼含量，計算其回收率。

可接受標準：該定量方法的回收率應為98.0%～102.0%。回收率RSD≤2.0%。

結論：

5.耐用性

5.1.溶液配制

5.1.1.混合溶液：精密稱取10mg異煙酸和10mg異煙肼樣品置100ml容量瓶中，用水溶

解并稀釋至刻度，混勻，即得。

5.2.驗證過程及結果

按下列條件改變方法，原條件溶液和改變色譜條件的順序進樣，計算異煙肼的理論塔板數,拖尾因子。計算相對保留時間RRT偏差絕對值。

a.改變柱溫為23℃和27℃

b.改變流速為0.9ml/min和1.1ml/min。

c.改變0.02mol/l磷酸氫二鈉溶液(磷酸調pH至6.0)與甲醇配比為87:13和83:17。

d.選用同一填料的兩個不同色譜柱比較

可接受標準：理論塔板數大于4000，拖尾因子在0.9～1.4之間。分離度R＞1.5，相對保留時間RRT偏差絕對值不大于20％。