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文檔簡介

1、熒光分光光度法測定熒光素鈉的含量一、實驗目的學習熒光分光光度法測定熒光素鈉的分析原理。2.掌握熒光分光光度計的操作技術和測定熒光素鈉的方法。熒光分析法，是以溶液中物質分子對光的選擇性吸收為基礎而建立起來的一類 分析方法。常溫下，處于基態(tài)的分子吸收一定的紫外可見光的輻射能成為激發(fā)態(tài)分子，激 發(fā)態(tài)分子通過無輻射躍遷至第一激發(fā)態(tài)的最低振動能級，再以輻射躍遷的形式回到 基態(tài)，發(fā)出比吸收光波長長的光而產生熒光。在稀溶液中，熒光強度if與物質的濃度c有以下的關系：If = 2.303 0 Ebc當實驗條件一定時，熒光強度與熒光物質的濃度成線性關系：、=Kc這是熒光光譜法定量分析的理論依據(jù)。三、儀器及試劑儀

2、器960熒光分光光度計；LC-UV紫外檢測器；微量進樣器試劑二氯熒光素(分析純);熒光素鈉標準溶液配制準確稱取0.05g二氯熒光素標樣，配制成2500ml溶液，則此溶液濃度為 0.05pm/mL ,分別移取此溶液 2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，于 25ml 容量 瓶中，并用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻后，待測定各標準溶液的熒光強度。熒光強度測定熒光光度計操作開啟220V穩(wěn)壓電源至220V； 打開主機電源開關。檢查氙燈電是否開啟。二氯熒光素發(fā)光譜的繪制，參數(shù)設置如下：設定縱坐標設定靈敏度；設定掃描速度；發(fā)射波長 EMISSION Wavelength 250.0 nm ；激發(fā)波長范圍

3、200-350 nm ；將某一濃度的二氯熒光素標液置于試樣池中；掃描得到激發(fā)光譜。標準溶液及樣品的測定，參數(shù)設置如下：設定縱坐標設定靈敏度;設定掃描速度；設定激發(fā)波長EXCITION Wavelength 496.0nm（從激發(fā)光譜曲線中）得 至U；發(fā)射波長范圍 EMISSION Wavelength 518nm ;將1號標準溶液放入試樣池中；掃描得到熒光光譜。儀器開始掃描，得到1號標準溶液的熒光強度。其余4各標準溶液和樣品液 只要重復上述操作，就可以分別得到它們的熒光光譜。按各標液的熒光強 度做出I-CT作曲線。五、數(shù)據(jù)記錄及計算1.列表樣品編號樣品濃度（pm/mL）熒光強度（IF）10.0258.720.0498.

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