1、黃連解毒湯方藥3種方法提取液成分比擬【摘要】目的選擇黃連解毒湯方藥的提取工藝。方法以小檗堿、黃芩素、梔子苷、總生物堿、總黃酮、1000D提取物為指標(biāo)，采用半仿生提取法(SBE法)、醇提取法AE法、水提取法E法進(jìn)展比擬研究。結(jié)果6個(gè)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)Y值為：SBE液AE法E液。結(jié)論黃連解毒湯以采用SBE法提取為佳。【關(guān)鍵詞】黃連解毒湯；指標(biāo)成分；超濾；提取方法Abstrat：bjetiveTptiizetheextratintehnlgyfHuanglianJieduDetin.ethdsTakingtheberberine,baialin,genipside,ttalalkalid,ttalflav

2、nid,extratfleular1000Dastheindexes,theethdsfsei-binisextratin(SBE),alhlextratinAE，aterextratinEerepared.ResultsThettalindexYvaluefthesixindexesas:SBEAEE.nlusinTheSBEisthebestextratinethdinpreparatinfHuanglianJieduDetin.Keyrds：HuanglianJieduDetin;arkerpnents;Ultrafiltratin;Extratinethds黃連解毒湯始見于唐?外臺(tái)秘要

3、?，由黃連、黃芩、黃柏和梔子組成，具有清熱、瀉火、解毒之成效。根據(jù)SBE法理論1，2，在SBE法工藝優(yōu)選和醇提最正確濃度的根底上，為進(jìn)一步討論該方藥用SBE法提取是否較目前普遍使用的提取方法為佳，故以小檗堿、黃芩素、梔子苷、總生物堿、總黃酮、1000D提取物為指標(biāo)，對(duì)該方藥3種提取方法進(jìn)展平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。1儀器與藥品pHS-3型精細(xì)pH計(jì)上海雷磁儀器廠；A110型電子分析天平上海第二分析儀器廠；AgiLent1100高效液相色譜儀G1315A二極管陣列檢測(cè)器；UV3010型紫外分析儀日立公司；KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗器昆山市超聲儀器；中空纖維超濾膜上海德宏生物醫(yī)學(xué)科學(xué)科技開展。中藥經(jīng)山東中

4、醫(yī)藥大學(xué)張兆旺教授鑒定：黃連為毛茛科植物黃連ptishinensisFranh的枯燥根莖；黃芩為唇形科植物黃芩StellariabaiaLensisGergi的枯燥根；關(guān)黃柏為蕓香科植物黃檗PhelldendrnarenseRupr的枯燥樹皮；梔子為茜草科植物梔子GardeniajasinidesEllis的枯燥成熟果實(shí)。鹽酸小檗堿111595202204、黃芩素110715202215、梔子苷110749202213均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品鑒定所；甲醇、乙腈均為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。2方法2.1樣品液制備2.1.1半仿生提取液SBE液按處方比例稱取1020目黃連15g、黃芩1

5、0g、關(guān)黃柏10g、梔子15g，按黃連、梔子合煎，黃芩、關(guān)黃柏合煎的組合方式，分別浸泡30in，分別用SBE法提取3次，加水量依次為藥量的10,8，8倍，3煎pH值依次為6.0，7.5，8.5，提取時(shí)間依次為120，60，30in，分別將3煎提取液依次粗濾，離心，一定規(guī)格的中空纖維超濾膜濾過(guò)，濃縮，合并，定容至250l，即得方藥1000D提取物的SBE樣品液(質(zhì)量濃度為2.0102gL-1)。2.1.2醇提液AE液按“2.1.1項(xiàng)下方法，只改用優(yōu)選的醇提最正確濃度61%的醇溶液作溶劑，依法即得方藥1000D提取物的AE樣品液(質(zhì)量濃度為2.0102gL-1)。2.1.3水提液E液按“2.1.1

6、項(xiàng)下方法，只改用水作溶劑，依法即得方藥1000D提取物的E樣品液(質(zhì)量濃度為2.0102gL-1)。2.2供試液的制備精細(xì)量勸2.1項(xiàng)下SBE、AE、E樣品液各10.0l，水浴濃縮蒸至近干，加硅藻土0.8g，蒸干，研勻，精細(xì)參加甲醇25l溶解，稱重，超聲提取30in，放冷，補(bǔ)足失重，濾除殘存硅藻土，即得SBE、AE、E供試液A質(zhì)量濃度80gL-1。供測(cè)定總生物堿。精細(xì)量取上述供試液A各2.5l，用甲醇定容至10l，即得SBE，AE，E供試液B質(zhì)量濃度20gL-1。供測(cè)定小檗堿、梔子苷。精細(xì)量勸2.1項(xiàng)下SBE、AE、E樣品液各10.0l，拌入聚酰胺6090目0.5g，參加已處理的聚酰胺柱上。依

7、次以蒸餾水300l,20%乙醇100l,70%乙醇80l洗脫至無(wú)色，搜集洗脫液，濃縮，再用70%乙醇定容至50l，得溶液甲。精細(xì)量取上述溶液甲各25.0l，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜?0l，即得SBE、AE、E供試液(1.0102gL-1)，供黃芩素含量測(cè)定。精細(xì)汲取上述溶液甲各0.35l，用70%乙醇定容至10l，得SBE、AE、E供試液D(質(zhì)量濃度為1.4gL-1)，供總黃酮含量測(cè)定。2.3對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品9.88，5.05g，分別依次用甲醇和pH7.0的緩沖溶液配制，得對(duì)照液0.395gl-1和對(duì)照液0.101gl-1。精細(xì)稱取黃芩素對(duì)照品7.38，3.68g，分

8、別依次用甲醇和70%乙醇配制成對(duì)照液0.295gl-1和對(duì)照液0.147gl-1。精細(xì)稱取梔子苷對(duì)照品7.33g，用甲醇配制成對(duì)照液0.293gl-1。2.4小檗堿含量測(cè)定2.4.1色譜條件色譜柱為Diansil185，2504.6；流動(dòng)相為乙腈-0.05l/LKH2P43070；檢測(cè)波長(zhǎng)265n；流速1.0l/in；進(jìn)樣量20l；柱溫30。3。見圖1。2.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精細(xì)吸勸2.3項(xiàng)下對(duì)照液，按上述色譜條件，進(jìn)樣2，4，6，8，10l。以峰面積為縱坐標(biāo)，鹽酸小檗堿的含量g為橫坐標(biāo)，得回歸方程為：Y=1662.9X+127.44r=0.9996(n=5)，線性范圍0.793.95g。2

9、.4.3含量測(cè)定按上述方法，將SBE，AE，E供試液B經(jīng)0.45微孔濾膜濾過(guò)，進(jìn)樣20l，分別平行進(jìn)樣3次，測(cè)得峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見表1。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.5總生物堿含量測(cè)定2.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精細(xì)吸勸2.3項(xiàng)下對(duì)照液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2l，用pH7.0的緩沖液稀釋至2.0l。參加0.007%溴麝香草酚藍(lán)8.0l，搖勻，參加氯仿10.0l，振搖，靜置分層2in。分取氯仿層，用枯燥濾紙濾過(guò)，相應(yīng)試劑為空白，在413n測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，回歸方程：Y=59.802X-0.0094，r=0.9995n=5，線性范圍為4.0412.12gl-14。2

10、.5.2含量測(cè)定精細(xì)汲取SBE、AE、E供試液A各0.15l，按上述方法，依次參加氯仿10.0，10.0，5.0l萃取，依法測(cè)定，總生物堿含量以鹽酸小檗堿計(jì)算。結(jié)果見表1。表1黃連解毒湯3種不同提取液各指標(biāo)成分含量及標(biāo)準(zhǔn)化處理結(jié)果略2.6黃芩素含量測(cè)定2.6.1色譜條件色譜柱為Diansil185，2504.6；流動(dòng)相為甲醇-0.4%醋酸水7030；檢測(cè)波長(zhǎng)275n；流速1.0lin-1；進(jìn)樣量20l；柱溫305。結(jié)果見圖2。2.6.2標(biāo)準(zhǔn)曲線精細(xì)吸勸2.3項(xiàng)下對(duì)照液1，2，3，4，5l，按上述色譜條件測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，黃芩素的含量g為橫坐標(biāo)，回歸方程為：Y=4129.4X241.09r

11、=0.9995(n=5)，線性范圍0.2951.475g。2.6.3含量測(cè)定精細(xì)汲取SBE、AE、E供試液，各進(jìn)樣20l，按上述色譜條件，依法測(cè)定計(jì)算黃芩素的含量。結(jié)果見表1。2.7總黃酮含量測(cè)定2.7.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精細(xì)吸勸2.3項(xiàng)下對(duì)照液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5l，用70%乙醇稀釋至10l。以70%乙醇為空白，在278n處測(cè)定，濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)，回歸方程為:Y=101.22X+0.0244r=0.9994(n=5)，線性范圍：1.477.35gl-16。2.7.2含量測(cè)定按上述方法測(cè)定SBE、AE、E供試液D，總黃酮含量以黃芩素計(jì)算。結(jié)果見表1。2.8梔子苷含量

12、測(cè)定2.8.1檢測(cè)條件色譜柱：DiansiLT鉆石185，2504.6；流動(dòng)相：乙腈-水1585；檢測(cè)波長(zhǎng)：238n；流速：1.0l/in；進(jìn)樣量：20l；柱溫：307。結(jié)果見圖3。2.8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精細(xì)吸勸2.3項(xiàng)下對(duì)照液1，5，10，15，20l，按上述色譜條件測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，梔子苷含量g為橫坐標(biāo)，回歸方程為：Y=1511.8X-42.55r=0.9998(n=5)，線性范圍0.2935.86g。2.8.3含量測(cè)定精細(xì)汲取SBE、AE、E供試液B，各進(jìn)樣20l，按上述色譜條件，依法測(cè)定計(jì)算梔子苷的含量。結(jié)果見表1。2.91000D提取物測(cè)定精細(xì)汲取SBE、AE、E樣品液各10

13、.0l，分別置枯燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105烘至恒重，計(jì)算1000D提取物得率。結(jié)果見表1。2.10實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)綜合評(píng)判方法將小檗堿、黃芩素、梔子苷、總生物堿、總黃酮、1000D提取物等6項(xiàng)指標(biāo)匯總，按以下公式進(jìn)展標(biāo)準(zhǔn)化處理xi.j=(xi,j-j)/sj。式中xi.j為標(biāo)準(zhǔn)化后的值，xi.j為樣品液i中成分j的含量，j為各種樣品液i中成分j的平均值，為成分j的標(biāo)準(zhǔn)偏向。根據(jù)各指標(biāo)在工藝選擇中的主次，給予不同的加權(quán)系數(shù)，即得綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)Y值，Y=(小檗堿+黃芩素+梔子苷)35+(總生物堿+總黃酮)23+1000D提取物2。Y值大者為佳。結(jié)果SBEY值最大，結(jié)果見表1。3討論3種提取液

14、小檗堿、黃芩素、梔子苷、總生物堿、總黃酮、1000D提取物得率等6項(xiàng)指標(biāo)綜合評(píng)判Y值的大小順序?yàn)椋篠BE液AE法E液，提示本制劑的方藥提取用SBE法為佳。本研究是對(duì)提取純化的最終產(chǎn)物“1000D提取物，作小檗堿、黃芩素、梔子苷、總生物堿、總黃酮的測(cè)定，即使對(duì)單體成分一無(wú)所知的中藥及其復(fù)方，也可以用1000D的提取物量為指標(biāo)，選擇提取工藝和控制質(zhì)量，這符合中醫(yī)藥的整體觀，對(duì)中藥現(xiàn)代化研究是很有借鑒意義的。以小檗堿、黃芩素、梔子苷這3個(gè)有效成分為指標(biāo)，同時(shí)以總生物堿、總黃酮、1000D提取物為指標(biāo)，綜合評(píng)價(jià)選擇提取工藝。這樣做表達(dá)了方劑藥效物質(zhì)提取中，堅(jiān)持“有成分論，不唯成分論，發(fā)揮活性混合物綜合作用特點(diǎn)的SBE法觀點(diǎn)。同時(shí)也有利于用單體成分控制制劑的質(zhì)量。【參考文獻(xiàn)】1張瑞亭,張兆旺,孫秀梅.思維方式的轉(zhuǎn)換與中藥“半仿生提取法J.中國(guó)中藥雜志，1997,22(9):542.2張兆旺,孫秀梅.中藥方劑藥效物質(zhì)提取新技術(shù)對(duì)“半仿生提取形式的討論J.世界科學(xué)技術(shù)中藥現(xiàn)代化,2000,2(4):53.3王曉林，鐘方麗.HPL測(cè)定復(fù)腎寧片中鹽酸小檗堿的含量J.中成藥,2022,30(3):463.4張學(xué)蘭,張兆旺，徐