1、樺褐孔菌石油醚提取物的抗腫瘤作用研究【摘要】目的討論樺褐孔菌石油醚提取物InntusbliquusPetrleuetherExtrats,IPE抗腫瘤作用。方法體外實驗采用TT法測定了IPE對Hela腫瘤細胞的抑制率。體內實驗，將接種S180腫瘤細胞后的小鼠隨機分為5組，每組10只，給予IPE10d，停藥后24h處死動物，稱體重，摘出腫瘤，測定腫瘤抑制率、脾指數、胸腺指數、淋巴細胞轉化率、NK細胞活性。結果在體外，IPE對Hela腫瘤細胞具有毒性作用；體內實驗說明中大劑量IPE對荷瘤小鼠腫瘤生長具有抑制作用，可增加脾指數及胸腺指數，對體外淋巴細胞轉化功能和NK細胞活性亦有增強作用。結論樺褐孔菌

2、石油醚提取物具有明顯的抗腫瘤活性。【關鍵詞】樺褐孔菌石油醚提取物抗腫瘤TheExperientalStudynAntiturEffetfPetrleuEtherExtratsfInntusbliquusAbstrat：bjetiveTstudytheantitureffetfpetrleuetherextratsfInntusbliquus(IPE).ethdsInvitrtest,theturinhibitryeffetstHelaellserestudiedbyTTethd.Inviv,theieereinulatedithS180turellsanddividedint5grupsran

3、dly(n=10),hihereadinisteredIPE10dntinuusly.TheieerekilledandEighed24hafterthelastadinistratin,andtheinhibitinratiftheturEIghtinthespleenindex,thyusindex,transfratinfuntinflyphyteandNKellativitieserealulated.ResultsThevitrtestshedIPEhadsignifiantautetxiityttheHelaturells.TheIPEuldinreasethelevelsfinh

4、ibitinratiftureightandthespleenindexandthyusindexinieandinreasethetransfratinfuntinflyphyteandNKellativitiesinvitr.nlusinTheIPEhasbviusantitureffet.Keyrds：PetrleuetherExtratsfInntusbliquus(IPE)；Antitur樺褐孔菌Inntusbliquus是一種大型真菌，主要分布于北緯4550的地區，如俄羅斯西西伯利亞、遠東地區、中國黑龍江、吉林省長白山地區等。作為一種民間草藥，樺褐孔菌在俄羅斯等國家已有很長的使用歷

5、史。近年的研究也說明，它在抗腫瘤、抗HIV、治療糖尿病等方面都具有一定的潛力15。成分研究說明，樺褐孔菌低極性提取物中含有大量的三萜類化合物，主要為羊毛甾醇、樺褐孔菌醇及其衍生物。本文通過體內和體外實驗對樺褐孔菌中石油醚提取物抗腫瘤方面的作用及機理進展了研究。1材料與方法1.1藥品的制備樺褐孔菌子實體購自大連王力靈芝行，由江蘇省藥用植物生物技術重點實驗室鄭維發教授鑒定，樣品保存于江蘇省藥用植物生物技術重點實驗室。將樺褐孔菌子實體稱重、粉碎后用石油醚加熱萃取屢次，過濾。濾液經濃縮枯燥后得到樺褐孔菌石油醚提取物，記為IPE。1.2動物與試劑1.2.1動物及瘤株昆明種IR小鼠，體重為202g，徐州醫

6、學院實驗動物中心提供，合格證號：蘇動202202。自由攝食飲水，室溫252。S180肉瘤細胞、Hela人宮頸癌細胞、K293人胚腎細胞，由中國科學院遺傳與發育研究所提供。1.2.2試劑TT，美國Siga公司產品；DS，美國Siga公司產品；注射用環磷酰胺，江蘇恒瑞藥業股份產品，消費批號040221；生理鹽水，徐州遠恒藥業產品，消費批號04121311；RPI1640培養基、RPI1640完全培養基，美國GIB公司產品；PBS溶液實驗室自制。1.3方法1.3.1IPE對腫瘤細胞的抑制實驗6分別取對數生長期的Hela細胞及K293細胞1105/l接種于96孔培養板中，150l/孔，然后參加50l不

7、同濃度的IPE，總體積200l/孔，藥品的終濃度為0，50，100，200，300，500g/l，每組均設6個樣本孔。在37，5%2、飽濕條件下培養72h，以TT比色法測吸光度并計算藥物對腫瘤細胞的抑制率和對K293細胞的生長促進率。1.3.2IPE對小鼠S180肉瘤的抑制作用實驗7取傳代后7d的S180肉瘤細胞懸液2106，每鼠右后腋窩皮下接種0.2l。次日隨機分組，每組10只，于接種后24h給藥。分別為IPE高劑量組(240g/kg)，中劑量組(120g/kg)，低劑量組(60g/kg)，環磷酰胺陽性對照組(20g/kg)，生理鹽水對照組以及正常對照組，均以0.2l/10g灌胃給藥，1次/

8、d，連續10d。末次給藥后24h，處死小鼠剝取瘤塊，別離、摘取脾臟和胸腺，計算抑瘤率，脾指數和胸腺指數。1.3.3淋巴細胞增殖實驗8荷瘤小鼠按1.3.2條件給藥10d，于停藥24h后將小鼠放血致死，取脾，按文獻制備脾細胞懸液。將脾細胞濃度調整為4106/l，向96孔板參加脾細胞懸液100l/孔，然后參加1g/l的nA100l/孔，對照孔加RPI1640液，設5個復孔，置37，飽和濕度、5%2孵箱中培養72h，以TT法測D值，以D值大小反映淋巴細胞增殖反響。轉貼于論文聯盟.ll.1.3.4IPE促進NK細胞活性實驗9同1.3.3處理動物和制備脾細胞，取不同藥物濃度處理的脾細胞作效應細胞，調整細胞

9、濃度至1106/l，參加96孔培養板中，另取Hela細胞作為靶細胞，效應細胞:靶細胞=50:1，每份標本設3個復孔，同時設靶細胞對照組和效應細胞對照組，置37，5%2孵箱中培養4h，并以TT法于酶標儀570n波長處測光密度D值，并計算NK細胞活性。1.4數據處理所有數據均用SPSS11.5軟件進展處理，以t-檢驗計算組間的差異。2結果2.1IPE對腫瘤細胞的抑制實驗結果見表1。表1樺褐孔菌石油醚提取物對Hela細胞和K293細胞的增殖抑制略從實驗結果可知，IPE各劑量組對腫瘤的抑制率均大，且根本呈現出劑量依賴關系，細胞毒作用明顯。同時多個劑量組IPE對K293的生長都呈現較高的生長促進率，說明

10、了IPE對正常細胞的增殖無抑制作用。2.2IPE對小鼠S180肉瘤抑制率的影響結果見表2。表2樺褐孔菌石油醚提取物對小鼠S180肉瘤的腫瘤抑制率的影響略結果說明，與空白對照組相比擬，IPE的中大劑量組對荷瘤小鼠的腫瘤均具一定程度的抑制作用。結果還說明，IPE具有明顯增加荷瘤小鼠脾指數和胸腺指數的作用，呈劑量依賴關系，且與陽性對照組間存在顯著性差異。2.3淋巴細胞增殖實驗結果見表3。表3樺褐孔菌石油醚提取物對小鼠淋巴細胞轉化的促進作用略結果說明在nA的誘導下荷瘤小鼠脾淋巴細胞增殖普遍低于正常小鼠，而中大劑量IPE能有效進步實驗D值，且與陽性對照組存在顯著性差異P0.01，這說明IPE能有效地促進

11、淋巴細胞的增殖，可以進步荷瘤小鼠的免疫程度。2.4IPE促進NK細胞活性實驗結果見圖1。結果顯示IPE能有效促進NK細胞對靶細胞的殺傷活性，呈現出明顯的劑量依賴關系，而且中大劑量組明顯高于環磷酰胺陽性對照組和正常對照組的NK細胞活性。3討論從天然產物特別是大型真菌中挑選抗腫瘤活性物質是抗腫瘤新藥物研發的一個重要方向。一般認為大型真菌是通過調節機體的免疫力，從而起到抗腫瘤的療效的，但研究的重點多集中在真菌的水提物組分上。本研究通過體內外抗腫瘤實驗和免疫藥理學實驗對樺褐孔菌多糖的抗腫瘤作用及機制進展了研究。體外對Hela腫瘤細胞的增殖實驗說明當給藥濃度為50g/l時，IPE就具有直接殺死腫瘤細胞的

12、細胞毒作用，并且呈現劑量依賴關系；同時實驗還說明，IPE對正常細胞的增殖無抑制作用，大濃度時甚至能明顯促進細胞生長。體內抗腫瘤實驗的結果說明，120g/kg以上劑量的IPE灌胃給藥時，對小鼠S180肉瘤均有一定的抑制作用。腫瘤的發生開展與機體的免疫調節功能親密相關，其中由T細胞介導的細胞免疫起著更重要的作用，T細胞的激活是發揮細胞免疫效應的重要條件。NK細胞缺乏免疫記憶和H約束性，能溶解廣譜的腫瘤細胞、包括同基因的、同種異基因的，以及異種的靶細胞，是一類在早期腫瘤免疫機制中起重要作用的效應細胞，對機體抗腫瘤起著重要作用。本研究在證實IPE具有良好抗腫瘤效果的根底上，討論了IPE對小鼠S180肉

13、瘤的免疫調節作用及可能機理。實驗說明IPE對兩個主要免疫學器官脾臟和胸腺均有增重作用，并呈劑量依賴性。與陽性對照組相比，中大劑量組IPE可促進nA誘導的體外小鼠淋巴細胞轉化。同時，各劑量組IPE對荷瘤小鼠體內NK細胞活性均有明顯促進作用。以上結果顯示，IPE的抗腫瘤作用可能是通過其細胞毒作用及調節機體的免疫力，刺激T細胞、NK細胞等功能來實現的。【參考文獻】1黃年來.俄羅斯神秘的民間藥用真菌樺褐孔菌J.中國食用菌,2001,21(4):7.2NazareizT,LedhshiZ,KnpaJ,etal.Studiesnantineplastiprpertiesfpriablique.II.stu

14、diesntheeffetfpriabliquanthegrthftransplantertursinanialsJ.Ntry,1961,11:401.3T.izun,.Zhuang,K.Abe,H.kat,T.Kih,S.Uai,S.LelerandL.Eijer,AntiturandhypglyeiativitiesfplysaharidesfrtheslertiaandyeliafInntusbliquus(Per.:Fr.)Pil,(Aphyllphryetideae)J.InternatinalJurnalfediinalushrs,1999,1:301.4ValentinaG.Babitskaya,NinaA.Bisk,NadezdaYu.itrplskaya,etal.elaninplexfrediinalushrInntusbliquus(Pers.:Fr.)Pilat(haga)(Aphyllphryetideae)J.InternatinalJurnalfediinalushrs,2002,4.139.5Yngui,Dng-SekKi,Kyung-hanPark.AntixidanteffetfInntusbliqu