1、實驗八 細菌總數與大腸菌群的測定二、大腸菌群的檢測一、細菌總數測定法（操作，2人/組）示教11、細菌總數測定法（操作，2人/組） 1.原理： 用營養瓊脂傾注平板，測定被檢物在單位重量或體積（g或ml）內所含有的活細菌數量，以判明被檢物被細菌污染的程度。2 細 菌 學 檢 驗 程 序 樣品 細菌總數 大腸菌群 水樣稀釋或不稀釋 水樣稀釋或不稀釋 第一步- 初步發酵試驗 傾注平板培養 （乳糖發酵） 37 24小時 37 24小時 菌落計數 第二步- 平板分離培養（取平均數報告） （轉種鑒別培養基） 37 24小時 革蘭染色鏡檢 第三步- 乳糖復發酵試驗 報告結果3 9ml無菌生理鹽水 4支/桌 營

2、養瓊脂粉 + 蒸餾水300ml 無菌平皿 12個 / 桌 1ml無菌吸管6支 / 桌 500ml量筒1個： 2、材料：41.先將營養瓊脂粉加蒸餾水300ml，高壓滅菌15鎊20。2.以1ml無菌吸管吸取樣品1ml加入9ml 無菌生理鹽水， 使樣品成 1：10 和1：100 兩個稀釋度。 3.分別在無菌平皿內加入1：100、1：10、原樣的樣品各1ml，每個稀釋度均做兩個平行樣。注意 ：先加濃度低的樣品，再加濃度高的樣品。（2人一組）4.將冷卻45的營養瓊脂傾注于平皿中，搖勻，置37 培養24小時。. 3、方法：5 1、平皿分4部分點數（見圖） 2、求同一稀釋度的平均菌落數 如： A1數 + A

3、2數 2 4、菌落計數：6 1）平板菌落數的選擇 2）稀釋度的選擇 3）菌落數的報告 菌落數100 按實有數報告 菌落數100 采用兩位有效數，后面數值 四舍五入（也可用10的指數表示） 無法計數 無法計數報告 （ 注明水樣的稀釋倍數） 5. 菌落計數的報告：7 稀釋度的選擇： 1. 應選擇平均菌落數在30-300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數報告之（見表例1）。 2. 若有兩個稀釋度其生長之菌落數均在30-300，則應視二者之比如何來決定，若其比值小于2，應報告平均數。 若其比值大于2則報告其中較小的數字（見表例3）。 3. 若所有平均菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數

4、報告之（見表例4）。 8 4. 若所有稀釋度的平均菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之（見表例5）。 5. 若所有稀釋度的平均菌落數均不在30-300之間，其中一 部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌 落數乘以稀釋倍數報告之 （見表例6）。 6. 若所有稀釋度的菌落數均不可計數，則以最高稀釋倍數無法計數 報告之（見表例7）。9稀釋度選擇及細菌總數報告方法 稀釋液及菌落數 10-1 10-2 10-3 1 1,365 164 20 16，400 16，000或1.6104 2 2,760 295 46 1.6 37，750 38，000或3.8

5、104 3 2,890 271 60 2.2 27，100 27，000或2.7104 4 不可計 4，650 513 513，000 510，000或5.1 105 5 27 11 5 270 270或2.7 102 6 不可計 305 12 30，500 31，000或3.1 104 7 不可計 不可計 不可計 10-3無法計數 稀釋 倍數 平均 菌落數例 次兩稀釋度 菌落數之比細菌總數(個/g或個/ml) 報告方式(個/g或個/ml)10菌落計數的報告: 菌落數 報告結果1、 30300 之間 平均菌落數 X 稀釋倍數 2、 求比值 2 取較小稀釋倍數 在30300之間 300 最高稀釋度平均菌落數 X 最高稀釋倍數 4、 300 30 6、 無法計數 報告無法計數 取最接近的 X 稀釋倍數 (若有兩個稀釋度)112.大腸菌群的檢測 檢品 膽鹽乳糖發酵管 伊紅美蘭平板 大腸桿菌菌落純培養 乳糖復發酵管（-） 乳糖復發酵管（） 示教12 飲用水、乳、冷飲食品衛生標準的細菌指標 指 標 細菌總數