1、分子病理學原理和實踐分子病理學原理和實踐The development of molecular and genetic approaches to the diagnosis and classification of human tumours The design and validation of predictive biomarkers for treatment response and disease progressionThe susceptibility of individuals of different genetic constitution to develop

2、 cancer一、分子病理學診斷的定義開發分子和遺傳學方法用于人類腫瘤診斷和分類設計和確認生物標志物用于疾病進展和療效的預測不同遺傳背景個體對于腫瘤發生的敏感性The development of molecular a二、常用分子病理學診斷方法PCR 聚合酶鏈反應FISH 熒光原位雜交Microarray 基因芯片二、常用分子病理學診斷方法PCR 聚合酶鏈反應FISH 熒光PCR發明者獲得諾貝爾化學獎PCR發明者獲得諾貝爾化學獎三、PCR(結合DNA測序)技術在 分子病理診斷中的應用三、PCR(結合DNA測序)技術在 基因突變檢查EGFRc-kit PDGFRAk-rasB-rafPIK3C

3、A基因突變檢查EGFRc-kit PDGFRAk-rasB-rEGFR基因突變與肺癌的靶向治療EGFR基因突變與肺癌的靶向治療什么是EGFR基因及其突變？表皮生長因子受體erbB1HER1什么是EGFR基因及其突變？表皮生長因子受體肺癌患者為什么要進行EGFR基因突變檢測？西妥昔單抗（愛必妥）易瑞沙（吉非替尼）特羅凱（厄羅替尼）肺癌患者為什么要進行EGFR基因突變檢測？西妥昔單抗（愛必妥非小細胞肺癌中藥敏相關的EGFR突變耐藥非小細胞肺癌中藥敏相關的EGFR突變耐藥EGFR突變檢查及其臨床意義易瑞沙和特羅凱是治療非小細胞肺癌的重要靶向藥物EGFR基因突變主要集中在酪氨酸激酶區，18，19，21

4、外顯子。19外顯子約占45，21外顯子約占40突變可以增強腫瘤細胞對酪氨酸激酶抑制劑的敏感性EGFR突變檢查可以作為靶向治療的有效預測指標EGFR突變檢查及其臨床意義易瑞沙和特羅凱是治療非小細胞肺 c-kit和PDGFRA突變檢測在胃腸間質瘤診斷和治療中的意義c-kit 基因第11、9、13和17外顯子存在突變PDGFRA基因第12和18外顯子存在突變 大多數GIST（6585）的基因突變發生在c-kit的第11或9外顯子突變使其在無配體結合的情況下，蛋白仍然保持活性 c-kit和PDGFRA突變檢測c-kit 基因第1甲磺酸伊馬替尼（格列衛）最初是用來治療慢性髓性白血病，最近才用來治療c-k

5、it異常表達的GIST在突變的患者中，相對于第9號外顯子突變和野生型，第11號外顯子突變患者療效最佳第9號外顯子突變患者一線治療應用800比400md/d明顯延長中位無進展生存期C-kit突變與臨床治療甲磺酸伊馬替尼（格列衛）最初是用來治療慢性在突變的患者中，相k-ras 基因檢測及其臨床應用k-ras 基因檢測及其臨床應用k-ras基因突變k-ras基因被激活最常見的方式是點突變,多發生在N端第12,13和61密碼子,其中又以第12密碼子突變最常見,為GGT突變成GAT或GTT2050結直腸癌發生K-ras基因突變第12和13密碼子突變占90，第61密碼子 占5k-ras基因突變k-ras基

6、因被激活最常見的方式是點突變,k-ras突變的臨床意義K-ras基因突變型患者不能從抗EGFR治療中獲益，反而增加不良反應危險和治療費用只有k-ras基因野生型患者才能接受EGFR抑制劑（如西妥昔單抗和帕尼單抗）治療但并不是所有k-ras基因野生型對靶向治療都有效k-ras突變的臨床意義K-ras基因突變型患者不能從抗EG石蠟組織中基因突變檢測流程石蠟組織中基因突變檢測流程分子病理學原理和實踐小 結分子病理學檢查在某些腫瘤靶向治療 和診斷中具有重要價值基于PCR的多種生物學技術和方法用于 突變檢測，各有利弊，需要合理選擇小 結分子病理學檢查在某些腫瘤靶向治療基于PCR的多四、FISH 熒光原位

7、雜交技術及其應用四、FISH 熒光原位雜交技術及其應用 熒光原位雜交(FISH)技術的簡介： 發展歷史、原理和實驗操作程序 FISH檢查在腫瘤靶向治療中的應用： 乳腺癌（Her2）、肺癌（EGFR、ALK） FISH檢查在病理診斷中的應用： 宮頸癌、膀胱癌、淋巴瘤、前列腺癌等 FISH檢查在其他方面的應用： 流產、遺傳病等 熒光原位雜交(FISH)技術的簡介： FISH檢查在腫基本原理堿基互補配對原則，同源的DNA-DNA，DNA-RNA, RNA-RNA兩條單鏈在一定條件下能結合成雙鏈。用放射性或非放射性物質標記一條鏈作為探針，與組織切片或細胞內待測核酸（RNA或DNA）片段進行雜交，通過放

8、射自顯影或其他方法顯示目的基因存在和定位。基本原理堿基互補配對原則，同源的DNA-DNA，DNA-RN基本原理基本原理組織切片脫蠟酶消化雜交過夜清洗DAPI染細胞核熒光顯微鏡觀察FISH檢查實驗流程圖組織切片脫蠟酶消化雜交過夜清洗DAPI染細胞核熒光顯微鏡觀察乳腺癌和胃癌HER2 FISH檢查乳腺癌和胃癌HER2 FISH檢查熒光原位雜交探針制備熒光原位雜交探針制備典型的乳腺癌HER2 FISH結果ABCD典型的乳腺癌HER2 FISH結果ABCD結 果 判 斷 Ratio= Her2信號總數/CEP17信號總數HER2:CEP17胃癌 乳腺癌 無擴增2.02.02.2結 果 判 斷HER2:

9、CEP17胃癌 乳腺癌 無擴增FISH檢查淋巴瘤基因重排和其他應用 FISH檢查淋巴瘤基因重排和其他應用 淋巴瘤類型探針名稱涉及基因發生率臨床意義B細胞淋巴瘤GLP ICHIGH50%-85%鑒別B細胞惡性淋巴瘤和淋巴組織良性增生性病變濾泡性淋巴瘤GLP IGH/GLP BCL2IGH/BCL290%輔助診斷濾泡性淋巴瘤套細胞淋巴瘤GLP IGH/GLP CCND1IGH/CCND1 95%輔助診斷套細胞淋巴瘤彌漫性大B細胞淋巴瘤GLP BCL6BCL640%輔助診斷彌漫性大B細胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤GLP C-MYCC-MYC100%輔助診斷伯基特淋巴瘤粘膜相關淋巴組織淋巴瘤GLP MALT1

10、MALT110%-20%輔助診斷MALT淋巴瘤GLP API2/GLP MALT1API2/MALT140%指導抗HP治療間變性大細胞淋巴瘤GLP ALKALK60%-80%評估預后淋巴瘤FISH檢測試劑盒淋巴瘤類型探針名稱涉及基因發生率臨床意義B細胞淋巴瘤GLP IGH/BCL2融合基因檢測輔助診斷濾泡性淋巴瘤（FL）IGH/BCL2融合基因檢測輔助診斷濾泡性淋巴瘤（FL）分子病理學原理和實踐IGH/BCL2基因FISH檢測IGH/BCL2基因FISH檢測IgHBcl2IGH/BCL2探針14（灰）號和18號（黑）染色體IgH基因Bcl-2基因雜交正 常 異 常融合基因擴增雙色雙融合易位探針

11、(IGH/BCL2）IgHBcl2IGH/BCL2探針14（灰）號和18號（黑）正常融合基因拷貝數增加雙色融合易位探針( IGH/BCL2）正常融合基因拷貝數增加雙色融合易位探針( IGH/BCL2）FISH檢查在其他方面的應用產前染色體異常診斷遺傳病染色體分析自然流產染色體異常診斷膀胱癌、前列腺癌肺癌靶向治療FISH檢查在其他方面的應用產前染色體異常診斷遺傳病染色體分小 結FISH技術給乳腺癌、胃癌腫瘤靶向 治療提供了金標準為某些疾病診斷提供了無創性檢查手段 病理診斷提供了有用的輔助指標 為開展科學研究提供了重要實驗技術小 結FISH技術給乳腺癌、胃癌腫瘤靶向為某些疾病診美國斯坦福大學病理科

12、美國斯坦福大學病理科分子病理學原理和實踐 Autopsy Pathology Clinical Biochemical Genetics Clinical Chemistry Clinical Microbiology Clinical Virology Cytogenetics Cytopathology Dermatopathology Hematopathology / Clinical Hematology Immunodiagnosis Molecular Genetic Pathology Neuropathology Renal Pathology Surgical Pathology (general and consultation services) Transfusion Medicinesfusion Medicine Autopsy Pathology分子病理學原理和實踐分子病理學原理和實踐分子病理學原理和實踐分子病理學原理和實踐分子病理學原理和實踐分子病理學原