1、分解纖維素的微生物的分離選擇培養與鑒別培養導學案 武漢市黃陂區第二中學 彭瑤 【學習重點】（1） 分解纖維素的微生物的分離的關鍵實驗流程（2）選擇培養與鑒別培養的原理及培養基成分的比較【學習難點】（1）以分離纖維素分解菌實驗流程為基礎，理解選擇培養與鑒別培養的原理編號成分含量粉狀硫10g（NH4）2SO40.4gK2HPO44.0gMgSO49.25gFeSO40.5gCaCl20.5gH2O100ml（2）運用所學內容解決微生物分離與鑒定的實際問題【新授內容】 問題探討：1、尿素是一種重要的農業肥料，需經過土壤中的微生物分解才能更好地被植物利用。如何能從土壤中篩選到能降解尿素的微生物？ 問題

2、探討：2、右表是某微生物培養基成分，可培養的微生物代謝類型是 。問題探討：3、某同學在做微生物實驗時，不小心把圓褐固氮菌和酵母菌混在一起，如何能將二者分離開？ 選擇培養選擇培養的原理人為提供有利于 生長的條件(包括營養、溫度、pH等)，同時 其他微生物生長。（2）選擇培養基【知識鏈接】加入青霉素的培養基:分離酵母菌、霉菌等真菌；加入高濃度食鹽的培養基: 分離金黃色葡萄球菌無氮培養基: 分離固氮菌；不加含碳有機物的無碳培養基:分離自養型微生物鑒別培養常見的鑒別培養的實例1、在含有纖維素的培養基中加入 ，在纖維素分解菌周圍會產生以菌落為中心的 。2、伊紅美藍培養基， 會有紫黑色菌落并有綠色金屬光澤

3、。3、加入酚紅指示劑的培養基，培養基中 升高，指示劑（酚紅）將變紅。分離分解纖維素微生物【知識鏈接】實驗流程土壤取樣 選擇培養 梯度稀釋 將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上 挑選產生透明圈的菌落培養基配方思考1、選擇培養的目的是什么？本實驗鑒別培養的原理是什么？纖維素粉5.0gNaNO31.0gKH2PO40.9gNa2HPO47H2O1.2gMgSO47H200.5gKCl0.5g水解酪素0.5g酵母膏0.5g蒸餾水1000mLCMC-Na5-10gKH2PO40.25g瓊脂15g土豆汁100mL酵母膏0.5g蒸餾水1000mL思考2、上述有關分解纖維素微生物分離的培養基，按物理性質分類

4、分別是什么培養基？為什么要使用這種狀態的培養基？思考3、選擇培養基的選擇作用是哪種成分體現的？如何設計實驗證明選擇培養基的選擇作用？ 思考4、要驗證培養基的制作是否合格應該如何設置對照？【想一想1】1、植物秸稈中纖維素可被某些微生物分解，為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學設計甲、乙兩種培養基（成分見下表）：注：“+”表示有，“-”表示無。據表判斷，培養基甲_（填“能”或“不能”）用于分離纖維素分解菌，原因是 ；培養基乙_（填“能”或“不能”）用于鑒別纖維素分解菌，原因是 。【想一想2】國家標準規定每毫升酸奶產品中乳酸菌菌數不得低于1106.為了解某酸奶中的乳酸菌含量是否

5、達到國家標準，某興趣小組進行了如下實驗，請回答下列問題：(1)樣品稀釋：先將樣品稀釋10倍，可用無菌移液管吸取25mL酸奶樣品加入盛有_mL無菌水的三角瓶中，使樣品與水充分混勻。然后進行系列稀釋操作，得到稀釋至106、107、108倍的樣品。(2)培養與統計：吸取不同稀釋度的樣品各1mL,分別置于不同培養皿內，加入適宜溫度的溶化狀態的培養基，使之混合均勻，冷卻成平板。每個稀釋度做3個重復。在適宜條件下培養一段時間后，對平板的菌落數進行統計，結果如下：為了保證結果準確，應選擇上述稀釋度為_倍的平板菌落數作為統計結果，計算出樣品中每毫升乳酸菌數為_個。(3)測定微生物的數量常采用稀釋涂布平板法，其

6、統計的數值往往比實際數目 ,原因是 。除了本實驗的計數方法之外，統計微生物的數量還可以采用 ，此方法統計的數值往往比實際活菌值要 。 對照實驗與重復實驗比較項目對照實驗重復實驗設置目的排除 對實驗結果的影響排除 對實驗結果的影想設置措施常設置空白對照常設置幾個相同的平板實例檢測培養基是否 取多個平板計數，并取 【想一想3】人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發酵處理秸稈，提高秸稈的營養價值。為了增強發酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究。 請回答下列問題：（1）篩選纖維素酶高產菌株應加入的唯一碳源應是 ，不以葡萄糖作為唯一碳源的原因是 。（2）科研人

7、員將采集的菌株加人上述培養液中，振蕩培養至培養液變混濁，再吸取一定量的培養液移入新的培養液中重復多次，這一培養過程稱為 培養。（3）吸取適量的培養液稀釋涂布到固體培養基中培養，選擇有菌落生長的培養基，加入剛果紅溶液進行染色，在菌落周圍會形成透明圈。應從中選出 的菌落，挑選的理由降解圈大小與纖維素酶的 有關。圖中降解纖維素能力最強的菌株是 （填圖中序號）。（5）研究人員用篩選到的纖維素酶高產菌株J1和J4，在不同溫度和pH條件下進行發酵，測得發酵液中酶活性的結果見下圖，推測菌株 更適合用于人工瘤胃發酵，理由是 。篩選優良菌種可以根據透明圈的大小以及進行發酵產纖維素酶的實驗，測定纖維素分解得到的

8、來進一步篩選優良菌種。【課后練習】1.從土壤中篩選纖維素分解菌的實驗設計，下列流程正確的是A土壤取樣梯度稀釋稀釋涂布平板挑選菌落B土壤取樣選擇培養稀釋涂布平板挑選菌落C土壤取樣梯度稀釋選擇培養挑選菌落D土壤取樣梯度稀釋稀釋涂布平板選擇培養挑選菌落2下列有關分解纖維素微生物的分離的敘述，不正確的是A纖維素酶的發酵方法有液體發酵和固體發酵B對分解纖維素的微生物進行了初步篩選后，無需再進行其他實驗C纖維素酶的測定方法，一般是對所產生的葡萄糖進行定量的測定D纖維素酶是一種復合酶有機農藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環境。研究發現，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。 微生物生長繁殖所需的主要營養物質有碳源、水、 四類，該實驗所用的選擇培養基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是 。（2）純化菌株時，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個平板