分子生物實(shí)驗(yàn)課件：基因組DNA的提取、LEPR基因的擴(kuò)增(10-9)_第1頁
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1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?了解基因組DNA提取的方法、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的原理和操作方法。實(shí)驗(yàn)原理：煮沸法提取基因組DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，英文縮寫PCR）是利用DNA片段旁側(cè)兩個(gè)短的單鏈引物，在體外快速擴(kuò)增特異DNA片段的技術(shù)。基因組DNA的提取、 LEPR基因的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)步驟：一、基因組DNA提取1.取含發(fā)囊的頭發(fā)4-5根，用剪刀將發(fā)根部剪下約1cm左右放于1.5ml的 EP管中 或用棉簽蘸取口腔的脫落細(xì)胞，放進(jìn)裝有1ml生理鹽水的EP管中后離心收集細(xì)胞，棄上清。2.消化液的配置(已經(jīng)配好，放在實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面上)： 蛋白酶K 10ul TE緩沖液 1ml DTT

2、10ul 3.取50ul 消化液（TE） 加入上述離心后的EP管，重懸細(xì)胞。4.先56度30min 然后 100度10min5.10000rpm 3min，上清為下步PCR反應(yīng)的模板二、PCR擴(kuò)增LEPR基因30ulPCR體系：ddH2O： 19.8ulBuffer: 3.0uldNTP: 1.0ul引物： 1.0ulEx taq: 0.2ul模板： 5.0ul注意：1.樣品多時(shí)可配置總反應(yīng)體系，然后分裝25ul的PCR反應(yīng)體系于PCR 反應(yīng)管中，再加入5ul的上步上清液作為模板 2.注意混勻和離心PCR擴(kuò)增條件：94 2min94 30s56 30s72 40s72 10min35個(gè)循環(huán)PCR產(chǎn)物電泳觀察：1.配置瓊脂糖凝膠：稱取瓊脂糖粉末1.0g，再量取1TAE緩沖液100ml，將二者放入錐形瓶中，在微波爐里加熱使瓊脂糖溶化，然后用流水冷卻至60度加入10ul Gelred染料，混勻，倒入兩塊平板中，直至凝固為止。2.樣品準(zhǔn)備：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物 5ul 6Loading Buffer 1ul3.電泳：將上步準(zhǔn)備好的6ul混合液以及5ul DNA Mar

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