1、培養細胞的取材與別離 取材部位準確 嚴格無菌操作，防止微生物和化學污染 盡快培養，24h以內 減小損傷，使用銳器，防止撕扯 制備標本，以便鑒定第一頁，共三十頁。體外細胞的純化人工純化：酶消化法、機械刮除法、反復貼壁法、克隆法、培養基限定法、流式細胞儀別離法 等自然純化 第二頁，共三十頁。細胞凍存要點：冷凍過程要緩慢凍存細胞必須處在對數生長期細胞復蘇要點：快速解凍解凍后的細胞應離心去除冷凍保護劑后再接種到培養基中第三頁，共三十頁。細胞培養的污染、檢測與控制 微生物污染：細菌，真菌，支原體等污染污染的途徑：空氣 、器材 、操作 、試劑 、組織標本 微生物污染的檢測 微生物污染的控制：抗生素除菌法；

2、加溫處理 第四頁，共三十頁。細胞培養常用方法：組織塊培養法酶消化法第五頁，共三十頁。第二節口腔醫學中相關細胞培養及其特點第六頁，共三十頁。一、牙齒相關細胞第七頁，共三十頁。牙髓細胞 Dental pulp cells 培養方法：組織塊法；酶消化法細胞形態特點免疫組織化學染色體外培養細胞的生長增殖特點功能特點第八頁，共三十頁。牙髓細胞波形絲蛋白染色(+)未分化間充質細胞成纖維細胞第九頁，共三十頁。牙髓細胞 體外培養細胞的生長增殖Cell proliferation in vitro 生長增殖較快 傳代期較短，15-20代 (2-4 M) 可復層生長第十頁，共三十頁。牙髓細胞 功能特點 堿性磷酸酶

3、alkaline phosphatase, ALP)活性 礦化現象 (Von Kossa) 對細胞因子的反響 對蓋髓劑的反響第十一頁，共三十頁。牙髓細胞培養方法：組織塊培養法；酶消化法細胞形態特點：成纖維細胞型與牙周膜細胞類似免疫組織化學染色：波形絲蛋白+；角蛋白-體外培養細胞的生長增殖特點功能特點第十二頁，共三十頁。牙周膜細胞periodontal ligament cells 培養方法：組織塊法；酶消化法細胞形態特點免疫組織化學染色體外培養細胞的生長增殖特點功能特點牙周膜細胞增殖分化的影響因素 原代 人牙周膜成纖維細胞傳代人牙周膜成纖維細胞第十三頁，共三十頁。 免疫組織化學染色波形絲蛋白染

4、色陽性角蛋白染色陰性第十四頁，共三十頁。牙周膜細胞 成纖維樣細胞，培養成功率高 細胞增殖快 體外存活時間長 (4-12 M)第十五頁，共三十頁。功能特點分泌功能：膠原、非膠原蛋白、堿性磷酸酶。礦化功能收縮功能再生功能根面吸附等第十六頁，共三十頁。二、唾液腺細胞第十七頁，共三十頁。細胞形態特點腺泡上皮細胞：體外培養的腺泡細胞多呈“鋪路石樣排列導管上皮細胞：導管上皮細胞呈多邊形肌上皮細胞： 肌上皮細胞呈梭形或星形唾液腺細胞第十八頁，共三十頁。導管上皮細胞HSG細胞系HSG細胞系第十九頁，共三十頁。A 小型豬腮腺上皮細胞原代培養10B 小型豬腮腺上皮細胞alpha淀粉酶免疫組化染色10腺泡細胞上皮細

5、胞第二十頁，共三十頁。免疫組織化學染色腺泡上皮細胞：角蛋白、淀粉酶、對氨基水楊酸、 導管上皮膜、前角蛋白、單克隆角蛋白、分泌成分陽性反響導管上皮細胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗體染色陽性反響肌上皮細胞：肌動蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗體染色陽性反響第二十一頁，共三十頁。三、口腔黏膜細胞第二十二頁，共三十頁。口腔黏膜細胞培養方法：組織塊法和酶消化法形態特點：卵圓形、多邊形，呈“鋪路石樣單層排列免疫組織化學染色：波形絲蛋白陰性，角蛋白陽性功能：分泌大量的膠原蛋白與非膠原蛋白第二十三頁，共三十頁。 兔口腔黏膜上皮細胞ABA 無血清培養基培養條件下10B 滋養細胞層培養條件下4第二十四頁，共三

6、十頁。四、頜骨相關的硬組織細胞第二十五頁，共三十頁。破骨細胞形態學特點：多核巨細胞，體積大組織化學染色：破骨細胞單克隆抗體呈陽性反響；降鈣素反響呈藍紫色；抗酒石酸磷酸酶反響呈棕褐色功能：骨吸收功能影響因素： 促進：破骨細胞激活因子、甲狀旁腺素 抑制：-干擾素、降鈣素第二十六頁，共三十頁。成骨細胞形態學特點：不同培養方法所獲得的成骨細胞形態各有差異免疫組織化學染色特點：BGP、型膠原、堿性磷酸酶活性功能：成骨作用 調節破骨細胞骨吸收作用第二十七頁，共三十頁。五、口腔腫瘤細胞第二十八頁，共三十頁。口腔鱗癌細胞細胞系來源：鱗狀細胞癌標本原代及傳代培養生物學特性： 多角形上皮樣細胞 核/漿比例高，多核仁 高貼壁率，克隆形成率和軟瓊脂集落形成率Cal27 cell第二十九頁，共三十頁。內容總結培養細胞的取材與別離。傳代期較短，15-20代 (2-4 M)。培養方法：組織塊培養法。體外存活時間長 (4-12 M)。分泌功能：膠原、非膠原蛋白、堿性磷酸酶。導管上皮細胞：導管上皮細胞呈多邊形。肌上皮細胞： 肌上皮細胞