1、體內藥物分析中的樣品預處理技術體內藥物分析是指體內樣品（生物體液、器官或組織）中藥物及 其代謝產物或內源性生物活性物質的定量分析。通常藥物進入體內后，其化學結構與存在狀態(tài)就可能發(fā)生顯著變 化。在體液中，藥物的存在形式多樣化，除游離型的原料藥物或其代 謝物，也有原形藥物或其代謝物與葡萄糖醛酸等內源性小分子經共價 結合的結合物（或綴合物），還有與蛋白質分子經氫鍵及其他分子間 力結合的結合型藥物；而且藥物及其代謝物的濃度通常很低、干擾物 質多。因此，在測定時，除少數(shù)情況將體液作簡單處理后可直接測定 外，通常在測定前要對體內樣品進行分離凈化與濃集等樣品前處理， 從而為體內樣品中藥物的測定提供良好的環(huán)境

2、和條件。常用的樣品前 處理方法有：去除蛋白質、綴合物水解、化學衍生化、分離濃集及微 波萃取和微透析技術等。一、體內樣品種類：體內藥物分析采用的體內樣品包括血液、尿液、唾液、頭發(fā)、臟 器組織、乳汁、精液、腦脊液、淚液、膽汁、胃液、胰液、淋巴液、 糞便等樣品。這些大都具有：采樣量少；待測物濃度低；干擾 物質多的特點。二、體內樣品預處理的目的：使待測藥物游離，以便測定藥物或代謝物的總濃度；滿足測量方法的要求，純化濃集樣品；保護儀器性能、改善分析環(huán)境。三、常用生物樣品預處理技術:1有機破壞法：濕法破壞：電熱消化器法、電熱板消化法、烘箱消化法干法破壞：高溫電阻爐灰化法、低溫等離子灰化法氧瓶燃燒法2去蛋白

3、質法：溶劑解法（加入與水相混溶的有機溶劑）、加入中性鹽、加入強 酸、加入含鋅鹽或銅鹽的沉淀劑、超濾法、酶水解法、加熱法分離、純化和濃集法：液-液萃取法、固相萃取法綴水物的水解法：酸水解法、酶水解法化學衍生化發(fā)：硅烷化、酰化、烷基化、紫外衍生化、熒光衍生化、點化學衍 生化、生成非對映異構體衍生化發(fā)四、新興生物樣品預處理技術：1微波消解2自動化固相萃取3固相微萃取4液相微萃取5微透析技術超臨界流體萃取分子印跡固相萃取這里就固相微萃取技術和超臨界流體萃取技術進行簡單說明：固相微萃取固相微萃取(Solid phase micro2-extraction,SPME)是 80 年 代末發(fā)展起來的樣品預處理

4、方法，其裝置簡單，操作方便，已實現(xiàn) 自動控制，適用于現(xiàn)場分析。它用一個類似于氣相色譜微量進樣器的 萃取裝置，從樣品中萃取出待測物質，并直接與氣相色譜(GC)或高 效液相色譜(HPLC)聯(lián)用，在進樣口(GC即為氣化室)將萃取的組分 解吸附后進行色譜分離檢測。SPME集萃取、濃縮、進樣于一身，極大地提高了分析速度。萃 取模式可分為直接固相微萃取(Direct-SPME)和頂空固相微萃取 (Headspace-SPME,HS-SPME)兩種。Direct-SPME 將涂有高分子固相 液膜的石英纖維直接伸入樣品基質中進行萃取，經過一定時間達到 分配平衡，即可取出進行色譜分析HS-SPME則將石英纖維放

5、在樣品 溶液上方進行頂空萃取，避免了基質的干擾，提高了分析速度。HS-SPME在體內分析中能克服其它物質的強烈干擾，對生物樣 品的分析步驟少于Direct-SPME法，并能延長石英纖維的使用壽命。 Fustinoni等用HS-SPME法測定人血液及尿液中的苯和甲苯含量, 方法是：將2 ml血樣與1 g NaCl加入密封瓶中，在40 C下平衡 30分鐘，用涂有聚二甲基硅氧烷的石英纖維進行頂空萃取，從GC 進樣口直接進樣。GC采用內填DB1的熔融硅石英柱，載氣為He氣, 用程序升溫法進行分析，校正曲線范圍：12 ng/卜5以g/L ,實驗 結果的RSD為1 %9 %。體液的背景干擾很小。但HS-S

6、PME也有 其局限性，一般只能萃取沸點較低的藥物。目前設計出的一種中空纖 維膜，能從復雜的生物基質中萃取出高沸點的待測物，有望克服應 用范圍窄的不足。 超臨界流體萃取技術超臨界流體(SF)是指溫度與壓力均在其臨界點之上的流體。在 研究過的超臨界流體體系中,CO2因其價廉無毒，應用最為廣泛。超臨 界流體同時表現(xiàn)出液體與氣體的優(yōu)點，既有與液體相近的密度，又 有與氣體相近的粘度及高的擴散系數(shù)。故具有很高的溶解能力和良好 的流動、傳遞性能，可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有毒、易揮發(fā)、易燃的有機溶劑。 超臨界流體萃取技術(Supercritical fluid extraction, SFE)對熱 敏感物質和復雜樣品中微

7、量組分萃取的有效性已引起人們關注，日 前已用于體內分析。SFE的裝置主要是有一個在頭部可進行冷卻的注射(或往復) 泵，用泵把液態(tài)SF壓到一個萃取池中；萃取池為一置于恒溫箱中的 不銹鋼圓筒，恒溫箱溫度需高于SF的臨界溫度；在萃取池后有一個 限流器。為保證萃取系統(tǒng)中有一定的壓力，限流器常用一支內徑為 50 Lm的彈性石英毛細管。在采用SFE進行萃取時，為增加溶劑的 選擇性，可加入各種1 %10 %的極性改性劑，如甲醇、異丙醇、 乙睛、二氯甲烷、甲酸等。Allen等分別用SFE與固相萃取(SPE)法測定了全血中的嗎啡 含量，并對兩種方法的檢測結果加以比較。用SFE萃取時，以超臨界叫為流動相，加入30

8、0p L甲醇-三乙胺(13:7)溶液做為改性劑, 流速2 mL/min,然后進行衍生化；另一份血樣先加入0.1 mol/L的 磷酸鹽緩沖液1mL和NH4OH溶液50 p L,用先經乙烷處理的SCX固 相小柱萃取，再同樣進行衍生化。萃取后待測組分用GC-質譜(M S) 法分離檢測。與SPE法相比，SFE具有萃取效率高、速度快、選擇 性好、萃取過程易于控制，萃取物易與CO2分離的優(yōu)點。Simmons等 采用SFE技術從血清和水中萃取苯并二氮雜卓類藥及同化類藥物 (anabolic drug),再用HPLC定量分析。與液-液萃取(LLE)和SPE 的實驗結果相比，使用SFE時，其回收率、精密度均有很大提高，且 LLE需使用大量有機溶劑，而SFE技術所用超臨界CO2消耗少，無毒 副作用。應用展望：SPME與SFE技術作為快捷安全、易于實現(xiàn)自動化的新型樣品 預