1、生理學(xué)報(bào) Acta Physiologica Sinica, April 25, 2004, 56(2): 224-229 HYPERLINK Received 2003-07-29 Accepted 2003-09-19 This work was supported by the National Basic Research Priorities Programme of Peoples Republic of China (No. G2000056906) and the National Natural Science Foundation of China (No.30070872

2、). *Corresponding author. Tel: Fax: E-mail: zhangyy -腎上腺素受體激動(dòng)對(duì)新生大鼠心肌細(xì)胞代謝的影響 閆 潔, 陳 鍇, 徐 明, 呂志珍, 韓啟德, 張幼怡* 北京大學(xué)第三醫(yī)院血管醫(yī)學(xué)研究所, 分子心血管學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 北京 100083 摘 要: 為了觀察-腎上腺素受體 (-AR) 持續(xù)激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞代謝的影響, 本工作以培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞為研究對(duì)象, 采用3H-亮氨酸 (3H-leucine）摻入法和BCA蛋白分析法檢測(cè)心肌細(xì)胞的蛋白合成代謝與蛋白含量, 3H-2-脫氧-D

3、-葡萄糖攝取測(cè)定方法檢測(cè)心肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取量, 并采用蛋白免疫印跡雜交方法檢測(cè)腺苷酸活化蛋白激酶 (adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK) 磷酸化程度。結(jié)果顯示, -AR激動(dòng)劑異丙腎上腺素 (isoproterenol, ISO) 持續(xù)刺激心肌細(xì)胞48 h, 心肌細(xì)胞3H-leucine摻入量和蛋白質(zhì)含量與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異。用ISO或去甲腎上腺素(1-AR特異性拮抗劑哌唑嗪存在下)持續(xù)激動(dòng)-AR 48 h, 心肌細(xì)胞的葡萄糖攝取量和AMPK磷酸化均顯著高于對(duì)照組。上述結(jié)果表明, -AR持續(xù)激動(dòng)對(duì)培養(yǎng)的新生大鼠心肌

4、細(xì)胞蛋白質(zhì)合成及蛋白質(zhì)含量沒(méi)有明顯的作用, 但可引起葡萄糖攝取量明顯增加和AMPK的激活, 提示-AR可能與心肌肥厚過(guò)程中能量代謝狀態(tài)的變化有關(guān)。 關(guān)鍵詞: -腎上腺素受體; 代謝; 心肌細(xì)胞; 腺苷酸活化蛋白激酶 中圖分類號(hào): Q463 Effects of -adrenoceptor activation on metabolism in neonatal rat cardiomyocytes YAN Jie, CHEN Kai, XU Ming, LU Zhi-Zhen, HAN Qi-De, ZHANG You-Yi* Institute of Vascular medicine, p

5、eking university third hospital and Key Laboratory of Molecular Cardiology, Education Ministry, beijing 100083, China Abstract: The aim of the present study was to investigate the effects of -adrenergic receptor (-AR) activation on metabolism in cultured neonatal rat cardiomyocytes. The protein synt

6、hesis and total protein content of cardiomyocytes were determined by 3H-leucine incorporation and BCA protein content assay. Cardiomyocyte glucose uptake was measured by 3H-2-deoxy-D-glucose uptake analysis. Adenosine monophosphate activated protein kinase (AMPK) phosphorylation was detected by West

7、ern blot. The results showed that sustained stimulation with isoproterenol (ISO), a -adrenoceptor agonist, had no effect on 3H-leucine incorporation and total protein content in cardiomyocytes. With -AR activation by ISO or NE (pretreated with a selective blocker of the 1-adrenoceptor prazosin) for

8、48 h, both the glucose uptake and AMPK phosphorylation increased significantly compared with unstimulated cardiomyocytes. These results suggest that although sustained -AR activation has no effect on cardiomyocyte protein metabolism, glucose uptake and AMPK activity are increased significantly. The

9、role of these -AR activation-induced changes in cardiac hypertrophy remains to be further investigated. Key words: -adrenergic receptor; metabolism; cardiomyocytes; AMPK 腎上腺素受體 (adrenergic receptor, AR) 介導(dǎo)的兒茶酚胺效應(yīng)在心臟收縮功能、心肌細(xì)胞生長(zhǎng)與凋亡 的調(diào)節(jié)中起著十分重要的作用1。分布在心臟中的AR主要為1-AR和-AR。-AR在介導(dǎo)心臟功能中占主導(dǎo)地位，其激動(dòng)后引起正性變力、變時(shí)和增加舒

10、張作用2。研究表明, -AR亦參與了心肌肥厚的發(fā)生, 長(zhǎng)期應(yīng)用-AR拮抗劑可以明顯減少心力衰竭病人的死亡率 3。Eichhorn等研究發(fā)現(xiàn), 給予充血性心力衰竭病人12周b1-AR拮抗劑美托洛爾治療后, 心肌組織的脂肪酸氧化明顯減少而乳酸的攝取和葡萄糖的氧 化明顯增強(qiáng), 心臟功能明顯得到改善4。因此, -AR持續(xù)激動(dòng)所引起的代謝改變?cè)谛募》屎癜l(fā)展和轉(zhuǎn)歸過(guò)程中可能發(fā)揮著重要作用, 但其作用機(jī)制尚不清楚。 為此, 本實(shí)驗(yàn)以培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞為研究對(duì)象, 通過(guò)觀察心肌細(xì)胞3H-亮氨酸 (3H-leucine)摻入量及蛋白含量來(lái)反映心肌細(xì)胞蛋白代謝; 以心肌細(xì)胞對(duì)3H-2-脫氧-D-葡萄糖(3H-

11、2-deoxy-D-glucose, 3H-2DG) 攝取量反映其對(duì)葡萄糖的攝取情況; 并采用蛋白免疫印跡雜交方法觀察了對(duì)代謝有重要調(diào)控作用的腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK)活性的變化, 對(duì)-AR持續(xù)激動(dòng)引起的心肌細(xì)胞代謝改變進(jìn)行了初步探討。 1 材料和方法 1.1 材料和試劑 去甲腎上腺素(norepinephrine，NE), 異丙腎上腺素(isoproterenol, ISO), 哌唑嗪 (prazosin,Praz), 普萘洛爾(propranolol, Prop), Hoechest33

12、258,Anti-Sarcomeric a-actinin antibody均購(gòu)自Sigma公司; 胰蛋白酶和DMEM購(gòu)自Hyclone公司; 型膠原酶購(gòu)自Worthington Biotechnology公司; 3H-leucine購(gòu)自Amersham Biosciences公司；3H-2DG購(gòu)自 Perkin Elmer Life Sciences公司；BCA protein assay reagent 購(gòu)自Pierce Chemicals 公司；anti-phospho-AMPK-a抗體和anti-AMPK-a抗體購(gòu)自Cell Signaling公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記anti-rabb

13、it及anti-mouse抗體購(gòu) 自Santa Cruz Biotechnology公司；LumiGL(R)化學(xué)發(fā)光試劑盒購(gòu)自New England Biolabs公司；PVDF膜購(gòu)自Bio-Rad公司。 1.2 新生大鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng) 取新生1-2 d SD大鼠 (北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部提供) 心室肌組織, 在含0.1%胰蛋白酶和80 U/ml型膠原酶的Hank抯液中進(jìn)行消化, 8 min/次, 共8-10次。離心收集細(xì)胞, 加入含10% 胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液, 接種于100 mm2培養(yǎng)皿中, 在37、5% CO2培養(yǎng)1 h后, 用差速貼壁法除去非心肌細(xì)胞, 將未貼壁的心肌細(xì)胞接

14、種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)液中加入100 mol/L 5-溴脫氧尿嘧啶核苷以抑制非心肌細(xì)胞生長(zhǎng)。心肌細(xì)胞培養(yǎng)48 h，更換為無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液24 h后加藥處理。用免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞進(jìn)行純度鑒定。 1.3心肌細(xì)胞蛋白合成測(cè)定 采用Bogoyevitch等5報(bào)道的方法測(cè)定心肌細(xì)胞 3H-leucine摻入量來(lái)反映心肌細(xì)胞蛋白合成情況。無(wú)血清DMEM培養(yǎng)心肌細(xì) 胞24 h后, 分別加入100 nmol/L或1 mol/L ISO、 10 mol/L NE或先用AR拮抗劑孵育細(xì)胞30 min再加入NE, 培養(yǎng)心肌細(xì)胞48 h, 并提前6 h加入37 kBq/ml 3H-leucine

15、。以預(yù)冷的10%三氯乙酸于4固定 細(xì)胞30 min, 甲醇洗滌2次, 用1 ml裂解液(0.1 mol/L NaOH, 0.1% SDS)裂解細(xì)胞30 min, 將細(xì)胞裂解液加入到閃爍液中, 用液閃儀(美國(guó)Beckman公司)測(cè)定其dpm (disintegrations per minute) 值。 1.4 心肌細(xì)胞蛋白含量的測(cè)定 無(wú)血清條件下培養(yǎng)24 h后, 以100 nmol/L或1 mol/L ISO分別刺激心肌細(xì)胞48 h, 1 ml 含0.25% (w/v) SDS的1SSC (standard sodium citrate)裂解細(xì)胞。BCA蛋白分析方法測(cè)定心肌細(xì)胞總蛋白含量, 用

16、Hoechest 33257染色法測(cè)定心肌細(xì)胞DNA含量6 。用總蛋白量/DNA表示心肌細(xì)胞蛋白含量, 以排除因細(xì)胞數(shù)量不同產(chǎn)生的差異。 1. 5 心肌細(xì)胞葡萄糖攝取的測(cè)定 根據(jù)Fischer等7的報(bào)道, 以心肌細(xì)胞對(duì)3H-2DG攝取量來(lái)反映其對(duì)葡萄糖的攝取情況。 無(wú)血清條件下培養(yǎng)24 h后換為低糖DMEM培養(yǎng)液, 以1 mol/L ISO、 10 mol/L NE分別刺激心肌細(xì)胞48 h, 或先用AR拮抗劑孵育細(xì)胞30 min, 然后加入NE, 在加入藥物同時(shí)加入37 kBq/ml 3H-2DG繼續(xù)培養(yǎng)48 h, 20 mol/L細(xì)胞松弛素終止反應(yīng)。0.5 mol/L氫氧化鈉裂解細(xì)胞15 m

17、in后, 加入同體積0.5 mol/L鹽酸中和。用BCA法測(cè)定蛋白含量,用液閃儀測(cè)定加入閃爍液中細(xì)胞裂解液的dpm值。 不加任何激動(dòng)劑只加入20 mol/L細(xì)胞松弛素培養(yǎng)48 h測(cè)得的dpm值為心肌細(xì)胞非特異性結(jié)合的放射活性。 (心肌細(xì)胞總放射活性-非特異性結(jié)合的放射活性)蛋白含量即得出心肌細(xì)胞 3H-2DG攝取量。 1.6 蛋白質(zhì)免疫印跡檢測(cè) 心肌細(xì)胞總蛋白提取: 無(wú)血清培養(yǎng)24 h后, 以1 mol/L ISO、 10 mol/L NE分別刺激心肌細(xì)胞48 h, 或先用AR拮抗劑孵育細(xì)胞30 min, 然后加入NE。每孔中加入200 ml細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞10 min, 超聲處理后于4,

18、12000 g離心15 min, 取上清備用。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白免疫印跡雜交: 細(xì)胞裂解液(25 mg總蛋白量/泳道)經(jīng)聚丙烯酰胺變性凝膠電泳（SDS)分離蛋白后, 將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上, 于TBST (5% BSA)室溫封閉1 h, 分別與一抗(anti-phospho-AMPK-a抗體, 抗體稀釋度為1:2000)和二抗(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記, 稀釋度1:4000) 室溫先后孵育2 h和1 h, 每次孵育完畢后用 TBST漂洗35 min。將膜與化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑室溫孵育1 min后用X光膠片曝光顯影。此PVDF膜洗脫后再用anti-AMPK- a抗體孵育, 重復(fù)上述二抗孵育、

19、漂洗和顯影等步驟。對(duì)顯影條帶進(jìn)行密度掃描定量。以AMPK- a亞基Thr172磷酸化(p-AMPK-a)的程度反映AMPK活性。將p-AMPK- a與AMPK-a的光密度比值表示AMPK-a磷酸化的程度。 1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果以meanSE表示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用Prism 3.0軟件進(jìn)行分析(Graphpad Software Inc.)。對(duì)照組與處理組之間的比較采用t檢驗(yàn)或方差分析。 P0.05, n=4）;同樣條件下持續(xù)刺激心肌細(xì)胞48 h, 心肌細(xì)胞3H-leucine摻入量分別為253.215.1、273.117.5 dpm, 與對(duì)照組(257.114.9 dpm)相比無(wú)顯著差

20、異(P0.05, n=4)(圖1A)。 用10 mol/L AR非選擇性激動(dòng)劑 NE持續(xù)刺激心肌細(xì)胞48 h, 心肌細(xì)胞3H-leucine摻入量較對(duì)照組明顯增加 (664.2106.4 dpm vs 235.916.5 dpm, P0.05, n=4) (圖1B)。 圖 1. -AR激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞蛋白合成的影響 Fig. 1. Effect of -AR on protein synthesis in neonatal rat cardiomyocytes. After 24 h in serum-free medium, cardiomyocytes were stimulated wit

21、h 100 nmol/L or 1 mol/L ISO for 24 h or 48 h (A), or pretreated with Praz for 30 min, then stimulated with NE (10 mol/L) (B) for 48 h. 3H-leucine was added 6 h before harvest. The relative 3H-leucine incorporation of stimulated myocytes compared with that of unstimulated myocytes is shown as meanSE

22、from four to five independent experiments. *P0.05, n=4)(圖2）。 圖 2. -AR激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞蛋白含量的影響 Fig. 2. Effect of -AR on protein content in neonatal rat cardiomyocytes . After 24 h in serum-free medium, cardiomyocytes were exposed to 100 nmol/L or 1 mol/L ISO for 48 h. Total protein contents were measured by us

23、e of the BCA protein assay reagent and corrected by DNA contents. Data were normalized by mean of nonstimulated control. Each data represents meanSE from four independent experiments. 2. 3 -AR激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞葡萄糖攝取的影響 1 mol/L ISO持續(xù)刺激心肌細(xì)胞48 h可使心肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取量明顯增加, 較對(duì)照組增加7.12.5倍(554. 6177.5 dpm/mg vs 79.94.9 dpm/m

24、g, P0.001, n=3)(圖3A）。用Praz預(yù)處理心肌細(xì)胞30 min, 再給予10 mol/L NE刺激48 h, 心肌細(xì)胞葡萄糖攝取量亦顯著高于對(duì)照組(530.522.2 dpm/mg vs 84.33.5 dpm/mg, P0.05, n=3)。 圖 3. -AR激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞葡萄糖攝取的影響Fig. 3. Effect of -AR on glucose uptake in neonatal rat cardiomyocytes. After 24 h in serum-free medium, cardiomyocytes were stimulated with 1 mol

25、/L ISO (A); or pretreated with Praz or Praz plus Prop for 30 min, then stimulated with 10 mol/L NE (B) in the presence of 37 kBq/ml 3H-2DG for 48 h. Data were normalized by mean of nonstimulated control. Each data represents meanSE from three independent experiments. *P0.001 vs control. 2.4 -AR激動(dòng)對(duì)心肌

26、細(xì)胞AMPK磷酸化的影響 1 mol/L ISO刺激心肌細(xì)胞48 h使AMPK磷酸化程度較對(duì)照組增加6.21.7倍 (P0.05, n=3)(圖4A)。用Praz預(yù)處理心肌細(xì)胞30 min, 再給予NE刺激48 h, 心肌細(xì)胞AMPK磷酸化程度亦顯著高于對(duì)照組4.11.4倍(P0.05, n=3); 而同時(shí)用Praz及Prop預(yù)處理后, 再給予NE刺激, 心肌細(xì)胞AMPK磷酸化程度與對(duì)照組相比則無(wú)顯著差異(圖4B)。 圖 4. -AR激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞AMPK磷酸化程度的影響Fig. 4. Effect of -AR on AMPK phosphorylation in neonatal rat

27、cardiomyocytes. After 24 h in serum-free medium, cardiomyocytes were stimulated with ISO 1 mol/L (A) or pretreated with Praz or Praz plus Prop for 30 min, then stimulated with NE 10 mol/L for 48 h (B). The upper in each panel shows the representative Western blot. The lower shows the average data fr

28、om three independent experiments. *P0.05, *P0.01 vs control. 3 討論 當(dāng)機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí), 交感-兒茶酚胺系統(tǒng)被激活, 血中腎上腺素和去甲腎上腺素濃度增高, 通過(guò)AR實(shí)現(xiàn)心血管系統(tǒng)功能和代謝狀態(tài)的調(diào)節(jié), 以適應(yīng)機(jī)體應(yīng)激的需要8。已知-AR激動(dòng)可介導(dǎo)心臟的正性變 力和正性變時(shí)效應(yīng)2。但是了解-AR長(zhǎng)期激動(dòng)對(duì)心 肌細(xì)胞能量代謝的影響, 對(duì)全面認(rèn)識(shí)-AR在調(diào)節(jié)心臟功能中的作用具有重要意義。為此, 本實(shí)驗(yàn)以培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞為模型, 觀察了-AR激動(dòng)48 h后心肌細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成速率、葡萄糖攝取量和AMPK活性的變化, 初步分析了-A

29、R持續(xù)激動(dòng)對(duì)新生大鼠心肌細(xì)胞代謝的影響及其機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)首先觀察了-AR激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)合 成速率及蛋白含量的影響。結(jié)果顯示, -AR特異性激動(dòng)劑ISO (100 nmol/L或1 mol/L)或先用1-AR特異性拮抗劑Praz預(yù)處理心肌細(xì)胞30 min后, 再給予10 mol/L NE, 即在僅持續(xù)激動(dòng)-AR 24 h和 48 h的條件下, 心肌細(xì)胞3H-leucine摻入量均無(wú)顯著變化。此外, ISO持續(xù)刺激也不能引起心肌細(xì)胞蛋白含量增加。可見(jiàn)-AR激動(dòng)對(duì)新生大鼠心肌細(xì)胞蛋白合成和蛋白 含量并無(wú)明顯作用, 說(shuō)明單獨(dú)激動(dòng)-AR不影響培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞蛋白質(zhì)的代謝。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果與 Sim

30、pson等人9的報(bào)道相同, 他們的研究認(rèn)為, 新生大鼠心肌細(xì)胞的蛋白合成主要是由1-AR介導(dǎo)的, 而-AR并不參與。從我們的結(jié)果也可以看出, 當(dāng)用1-和-AR非選擇性激動(dòng)劑 NE持續(xù)刺激心肌細(xì)胞時(shí), 心肌細(xì)胞3H-leucine摻入量明顯增加。當(dāng)先用1-AR特異性拮抗劑Praz預(yù)處理心肌細(xì)胞以阻斷1-AR, 再給予10 mol/L NE刺激即僅激動(dòng)-AR的情況下, 心肌細(xì)胞3H-leucine摻入量并無(wú)明顯增加。說(shuō)明在交感- 兒茶酚胺系統(tǒng)促進(jìn)新生大鼠心肌細(xì)胞蛋白合成過(guò)程中a 1-AR的激動(dòng)是占主導(dǎo)地位的, 而-AR的獨(dú)立作用不明顯。但這一結(jié)果并不能否定-AR在心肌肥厚發(fā)生 過(guò)程中的作用。我們以

31、前的研究也表明, 盡管-AR單獨(dú)激動(dòng)時(shí), 對(duì)心肌細(xì)胞蛋白合成無(wú)直接的作用, 但當(dāng)-AR與1-AR同時(shí)激動(dòng)時(shí), -AR對(duì)1-AR引起的心肌細(xì)胞蛋白合成有明顯的正協(xié)同作用(結(jié)果待發(fā) 表)。目前對(duì)1-AR和-AR在心肌肥厚發(fā)生過(guò)程中 的作用還存在爭(zhēng)議。Simpson及Knowlton等9,10 研究發(fā)現(xiàn), NE引起的新生大鼠心肌細(xì)胞肥大反應(yīng)主要由1-AR介導(dǎo), Gq及MAPK途徑激活在其中起重要作用; Pinson等11認(rèn)為1-AR與-AR共同介導(dǎo)了成年大鼠 心肌細(xì)胞肥大反應(yīng); 在對(duì)整體動(dòng)物心肌肥厚的研究表明, 長(zhǎng)期輸注-AR激動(dòng)劑可導(dǎo)致明顯的心肌肥厚和心力衰竭12。我們的實(shí)驗(yàn)對(duì)象是離體培養(yǎng)的新生大

32、鼠心肌細(xì)胞, 與成年大鼠及在體心臟的情況可能有所不同, 這也是本研究的局限性所在。 用1 mol/L ISO持續(xù)激動(dòng)心肌細(xì)胞-AR 48 h, 心肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取量明顯增加, AMPK活性明顯增高。同樣, 用Praz預(yù)處理心肌細(xì)胞阻斷1-AR后,再用10 mol/L NE激動(dòng)-AR, 心肌細(xì)胞葡萄糖攝取量及AMPK活性亦顯著高于對(duì)照組。正常心肌組織 的代謝速率極其迅速, 60%-90%的ATP由脂肪酸在線粒體中的-氧化所產(chǎn)生, 10%-40%ATP由來(lái)自于葡萄糖及乳酸的丙酮酸氧化產(chǎn)生。與正常心肌相似, 肥厚心肌也是以脂肪酸尤其是長(zhǎng)鏈脂肪酸如油酸和軟脂酸為主要能量來(lái)源。但心肌肥厚過(guò)程中, 存

33、在心肌能量和代謝的改變, 表現(xiàn)為對(duì)長(zhǎng)鏈脂肪酸的氧化明顯減少, 而對(duì)外源性葡萄糖的攝取和酵解加快。糖攝取和酵解的加快對(duì)脂肪酸氧化的降低有一定的代償意義13,14。臨床研究顯示, 通過(guò)增加葡萄糖的攝取或刺激葡萄糖的氧化, 或通過(guò)抑制脂肪酸的氧化改善心肌能量代謝對(duì)肥厚心肌功能的維持有重要意義15,16, 但其確切機(jī)制并不清楚。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn), -AR持續(xù)激動(dòng)使心肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取明顯增加。已知葡萄糖攝取入 細(xì)胞的過(guò)程是其被氧化利用的限速步驟, 并且我們采用的實(shí)驗(yàn)方法是觀察在一定時(shí)間內(nèi)心肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖 攝取量的變化, 因此, -AR持續(xù)激動(dòng)對(duì)心肌細(xì)胞攝取葡萄糖的量、速度及其利用都可能存在促進(jìn)作用。

34、提示-AR與心肌肥厚發(fā)生發(fā)展過(guò)程中能量代謝狀態(tài)的改變有關(guān)。 AMPK是一種重要的代謝應(yīng)激蛋白激酶。它是由 、三個(gè)亞基構(gòu)成的異三聚體, 其中為催化亞基, 和g為調(diào)節(jié)亞基。心臟中主要表達(dá)1、 2及2、1、2 亞型。研究表明, 在細(xì)胞能量供求發(fā)生改變時(shí), AMPK作為細(xì)胞內(nèi)的能量感受器, 主要通過(guò)增加心肌細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體 (glucose transporters , GLUT)的轉(zhuǎn)位來(lái)促進(jìn)葡萄糖的攝取,并通過(guò)磷酸化乙酰CoA羧化酶而減少丙二酰CoA的生成, 進(jìn)一步解除其對(duì)肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶的抑制, 使脂肪酸氧化加速17,18。本實(shí)驗(yàn)中, -AR持續(xù)激動(dòng)引起心肌細(xì)胞對(duì)葡萄糖攝取的增加的同時(shí)AMPK的活性

35、也明顯增強(qiáng), 提示AMPK可能參與了對(duì)心肌細(xì)胞葡萄糖代謝的調(diào)控。 綜上所述, 本工作證實(shí)了在培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞-AR激動(dòng)對(duì)蛋白合成及蛋白含量等蛋白代謝的 作用不顯著, 首次觀察到-AR持續(xù)激動(dòng)時(shí)心肌細(xì)胞的葡萄糖攝取量及AMPK活性的增加, 提示-AR參與了心肌肥厚發(fā)生發(fā)展過(guò)程中能量代謝狀態(tài)的改變。 然而-AR激動(dòng)時(shí)對(duì)心肌細(xì)胞脂肪酸代謝有無(wú)作用以及AMPK調(diào)節(jié)代謝的確切機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。 參考文獻(xiàn) 1 Koch WJ, Lefkowitz RJ, Rockman HA. Functional consequences of altering myocardial adrenergic r

36、eceptor signaling. Annu Rev Physiol 2000;62:237-260. 2 Dzimiri N. Regulation of -adrenoceptor signaling in cardiac function and disease. Pharmacol Rev 1999;51(3):465-501. 3 Barry WH, Gilbert EM. How do beta-blockers improve ventricular function in patients with congestive heart failure? Circulation

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48、;42(3):238-256. 七夕，古今詩(shī)人慣詠星月與悲情。吾生雖晚，世態(tài)炎涼卻已看透矣。情也成空，且作“揮手袖底風(fēng)”罷。是夜，窗外風(fēng)雨如晦，吾獨(dú)坐陋室，聽(tīng)一曲塵緣，合成詩(shī)韻一首，覺(jué)放諸古今，亦獨(dú)有風(fēng)韻也。乃書(shū)于紙上。畢而臥。凄然入夢(mèng)。乙酉年七月初七。嘯之記。 1號(hào)題第一站：病史采集：男，21歲，腹痛伴惡心嘔吐8小時(shí)急診就診。病歷分析是十二指腸潰瘍。第二站：體格檢查是血壓測(cè)量，頸部部淋巴結(jié)檢查，肺底移動(dòng)度，脾觸診，Brudzinski征。基本操作，腹穿。第三站：正常心電圖，右側(cè)氣胸。2號(hào)題病史采集：發(fā)熱，右頸部包塊病例分析：腹股溝斜疝，腸梗阻操作：皮膚彈性及水腫檢查，心臟叩診，腹部體表標(biāo)志及

49、四分法，吸痰 上機(jī)：肝癌，三度房室傳導(dǎo)阻滯等3號(hào)題第一站：病史采集：呼吸困難 病例分析：子宮肌瘤 節(jié)育環(huán)4號(hào)題病史采集：反復(fù)發(fā)作喘息，加重；病例分析是：乳腺囊性增生（鑒別診斷：乳腺癌、乳房纖維腺瘤，進(jìn)一步檢查：B超、乳腺鉬靶、腫物穿刺活檢；治療原則：戴胸罩、服用逍遙散等中藥、脹痛嚴(yán)重時(shí)可考慮在月經(jīng)前10天服用甲基睪丸酮）1、病史采集:患者女，歲，發(fā)熱，咳嗽，咳痰天入院。 、病案分析：男性患者，車渦傷，右下肢活動(dòng)完全受限，股骨中段腫大，有骨擦感，神清（大體是這樣，好多記不得了） 第二站：測(cè)呼吸（邊講邊做），聽(tīng)肺部，視腹部（邊做邊講），肩甲角體位，胃手術(shù)的消毒范圍（邊做邊講，問(wèn)這個(gè)手術(shù)是否要備皮）

50、 后面問(wèn)（生命體征？）5號(hào)題病史采集 咳嗽 咳痰 病例分析 前列腺肥大操作 穿手術(shù)衣 腋窩淋巴結(jié)的觸診。誰(shuí)有第三站的 麻煩補(bǔ)充6號(hào)題 咯血 水痘7 號(hào)題第一站；病史采集是關(guān)于一個(gè)下肢水腫10天來(lái)就診的病人，既往有冠心病史。病案分析為一個(gè)59歲的女患者，大便后肛門有腫物脫出，伴有便血，腫物可手法幫助復(fù)位，血常規(guī)陰性8號(hào)題體檢：甲狀腺觸診單手肝臟觸診膝反射操作：左前臂外傷10小時(shí)后清創(chuàng)縫合病史采集:胸骨疼痛3年，2小時(shí)再發(fā)。冠心病病例分析：內(nèi)痣伴出血，脫垂9號(hào)題1、病史采集:患者女，歲，發(fā)熱，咳嗽，咳痰天入院。 、病案分析：男性患者，車渦傷，右下肢活動(dòng)完全受限，股骨中段腫大，有骨擦感，神清（大體是

51、這樣，好多記不得了） 2 u第二站：測(cè)呼吸（邊講邊做），聽(tīng)肺部，視腹部（邊做邊講），肩甲角體位，胃手術(shù)的消毒范圍（邊做邊講，問(wèn)這個(gè)手術(shù)是否要備皮）后面問(wèn)（生命體征？）病史采集：反復(fù)發(fā)作喘息，加重 ；病例分析是：乳腺囊性增生（鑒別診斷：乳腺癌、乳房纖維腺瘤，進(jìn)一步檢查：B超、乳腺鉬靶、腫物穿刺活檢；治療原則：戴胸罩、服用逍遙散等中藥、脹痛嚴(yán)重時(shí)可考慮在月經(jīng)前10天服用甲基睪丸酮10號(hào)題第一站病史詢問(wèn)題號(hào)10號(hào)，題目是活動(dòng)后氣短一個(gè)月，加重一周。高血壓病史10年。病例分析是35號(hào)，急性腸梗阻第二站體格檢查是68號(hào)，題目是肺下界移動(dòng)度的叩診，肋脊角腎區(qū)扣痛，巴賓氏基征陽(yáng)性的檢查操作時(shí)胸外心臟按壓第三

52、站肺的呼吸音，心電圖有正常心電圖，x片一個(gè)股骨頸骨折，一個(gè)是腸梗阻，CT是腦出血11號(hào)題病史 是女性26歲 低熱盜汗 腹瀉2月病例分析是65歲病人，5年反復(fù)左胸前區(qū)疼痛，加重8小時(shí),既往發(fā)作服用硝酸甘油可緩解今次不能緩解血壓高既往多在150-180、90 110之間操作是48和1 內(nèi)容是頸部淺表淋巴結(jié)檢查和闌尾炎手術(shù)的消毒,體格還有個(gè)膀胱12號(hào)采集是腹痛，黑便，消瘦病歷分析是結(jié)核性胸膜炎體格檢查胸部視診問(wèn)題是胸骨角對(duì)的第2肋間腦膜刺激征問(wèn)題是浮髕實(shí)驗(yàn)的意義操作是背部脂肪瘤的切除問(wèn)題是頭頸、四肢扯線時(shí)間14號(hào)題病史采集：上腹痛，嘔吐, ep! U( J# b2 Y& O病例分析：COPD15號(hào)題

53、病史采集是腹痛，嘔血，黑便。病例分析是過(guò)敏性鼻炎和支氣管哮喘16號(hào)題：采集：上腹痛5年，加重伴嘔吐2天。病例分析：胸痛7天，加重4小時(shí)。診斷應(yīng)該是心梗。感覺(jué)時(shí)間比較緊，后面的進(jìn)一步檢查和治療都是瞬間寫(xiě)的，肯定丟分不少，虧啊！第三站心肺聽(tīng)診：奔馬律、右下方呼吸音減弱；X線：左肺炎（左胸悶、氣喘n天，忘記了）、股骨骨折；CT（飽食后惡心、嘔吐2年）：肝癌；心電圖：心梗、另一題好像錯(cuò)了，選了左束支傳導(dǎo)阻滯；醫(yī)德醫(yī)風(fēng)：A。得了18分17號(hào)題號(hào)題采集：上腹痛5年，加重伴嘔吐2天。18號(hào)題病史采集。女17歲，腹痛，腹瀉，嘔吐。病例分析肺心病，心功能2級(jí)，心衰。慢性扁桃體炎（還有關(guān)節(jié)疼痛，懷疑風(fēng)心病）體格檢

54、查，乳房觸診，直腸指診，肋脊角扣診C、脊肋角叩擊痛操作（5分）被檢查者體位、肋脊點(diǎn)選擇正確（2分）?囑檢查者采取坐位或側(cè)臥位（1分），肋脊點(diǎn)選擇正確：第十二肋與脊柱夾角的頂點(diǎn)（1分）。?叩擊操作正確（3分）。檢查者用左手掌平放在被檢查者脊肋角處，右手握拳，用由輕到中等的力量叩擊左手背（1分），每叩1-2下，停一停，重復(fù)2-3次，同時(shí)問(wèn)被檢查者感覺(jué)（1分），兩側(cè)均叩，進(jìn)行對(duì)比（1分）。D、檢查結(jié)束，愛(ài)傷意識(shí)。（1分）態(tài)度、語(yǔ)言（告知）、動(dòng)作技能操作救護(hù)車，上臂開(kāi)放性骨折，無(wú)進(jìn)行性出血。三角巾固定考官提問(wèn) 1胸骨角的臨床意義?胸骨角位于胸骨柄、體交界處，兩側(cè)與第二肋軟骨相連,是臨床胸部計(jì)算肋骨的標(biāo)

55、準(zhǔn)之一2如果患者腹部發(fā)現(xiàn)條形物 考慮哪些疾病19號(hào)題，病史采集：肝硬化腹水病例分析：急性乳腺炎操作：穿脫手術(shù)服帶無(wú)菌手套體檢：心臟的聽(tīng)診，膝關(guān)節(jié)和小腿的檢查，問(wèn)了浮髕試驗(yàn)？3站：考了腦梗！正常心電圖，三度房室傳導(dǎo)阻滯，20號(hào)題：1、筆試：病例分析：乳腺囊性增生2、操作：穿手術(shù)衣、乳腺觸診、腹部觸診：反跳痛、緊張度等上機(jī)拿了19分，最后一道是抗生素的，錯(cuò)了21號(hào)題，體格檢查：脾觸診，問(wèn)題：腫大分幾度：輕度腫大（肋下小于2cm），中度腫大（不過(guò)臍），重度腫大（過(guò)臍或腹中線）、技能操作前臂清創(chuàng)術(shù)，問(wèn)題：為什么先清創(chuàng)后縫合22號(hào)題病史采集：腹瀉便血病例分析：心肌梗塞操作：腹股溝淋巴結(jié)，心臟叩診，振水音

56、，小腿骨折包扎上機(jī)的不肯定23號(hào)題：患者女性，30歲，自幼體弱。易感冒，咽痛，經(jīng)常咳嗽，常呈現(xiàn)勞力性呼吸困難，近日出現(xiàn)夜間陣發(fā)性呼吸困難，坐起后稍好轉(zhuǎn)。在外院疑診為“風(fēng)濕性心臟病，二尖瓣狹窄”，患者來(lái)院診治。（18分）考試與評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：（1）、考官問(wèn)：你作為接診醫(yī)師，體格檢查過(guò)程中在對(duì)本病例心臟視診方面應(yīng)特別注意那些內(nèi)容？ 答：心前區(qū)有無(wú)隆起（1分）或凹陷（1分），心尖搏動(dòng)位置與范圍是否左移和彌散（1分）。（2）、考官指定考生做心臟視診，并要求考生正確敘述被檢查者心尖搏動(dòng)的范圍（12分）。A、查體前，愛(ài)傷意識(shí)。（1分）態(tài)度、語(yǔ)言（告知）、動(dòng)作B、被檢查者仰臥位（或坐位），正確暴露胸部。（1分）例

57、：仰臥位時(shí)，上至頸以下，下至中上腹，兩側(cè)至腋中線。（暴露不規(guī)范扣分）C、視診法正確（5分）24號(hào)題一、病史采集病例分析1,厭油膩 右上腹痛伴黃疸！2，左顳頂部出血三、上機(jī)腦出血 奔馬律第2站1、間接法測(cè)血壓、心臟叩診 、腹部血管雜音聽(tīng)診2、上臂開(kāi)放性骨折的緊急處理及三角巾包扎25號(hào)題操作 左前臂外傷10小時(shí)后清創(chuàng)縫合26號(hào)題：頸椎第7棘突的位置，腹部包塊的觸診。簡(jiǎn)易呼吸器的使用。27號(hào)題目一、病史采集病例分析1,進(jìn)食油膩厚右上腹痛伴黃疸！2，左顳葉出血三、上機(jī)腦出血 奔馬律28號(hào)題操作：皮膚彈性，肺部叩診，肝臟觸診，皮膚消毒，腹部皮膚消毒病史采集：肝癌病歷分析：高血壓一級(jí)心律失常低鉀血30號(hào)題

58、病史采集：男性青年上腹脹痛伴嘔吐，既往有潰瘍病史。病例分析：青年女性多汗心悸體重減輕。FT3 FT4 TSH 升高有突眼，雙手震顫，心電圖竇性心動(dòng)過(guò)速。甲狀腺二度彌漫性腫大。心尖部可聞及2/6吹風(fēng)樣雜音。輔助檢查 FT3 FT4 TSH升高體格檢查：1、甲狀腺二度腫大，口述內(nèi)容。2、肝臟單手觸診。3、膝反射（正常情況應(yīng)該下肢抬高）提問(wèn)：甲狀腺腫大分度基本操作：患者左前臂有一深達(dá)5cm傷口，請(qǐng)?jiān)谀M人操作清創(chuàng)縫合術(shù)。注意無(wú)菌操作。31號(hào)題病史采集：胸部閉合損傷。病例分析：甲狀腺癌 技能操作1、腋窩淋巴結(jié)的觸診 2、吸氧術(shù) 多媒體：1、腸梗阻X線片 2、左側(cè)股骨骨折X線片 3、正常心電圖，室速心電

59、圖 4、硬膜下血腫CT片32題河南執(zhí)業(yè)病史采集間斷咳嗽咳痰痰中帶血有吸煙史病例分析風(fēng)濕胸廓體表標(biāo)記膀胱檢查腦膜刺激征闌尾炎換藥心電圖正常室速（不確定）食管癌股骨骨折外加腦出血33號(hào)題病史：肺結(jié)核，。病例：糖尿病/病史采集:咯血并發(fā)熱/盜汗肺結(jié)核/病例分析:？型糖尿病中年男性三多一少癥狀有家族史尿糖陽(yáng)性（鑒別診斷：糖尿病、甲狀腺功能亢進(jìn)癥；進(jìn)一步檢查：檢查血脂、定期監(jiān)測(cè)血糖變化、24小時(shí)尿糖定量、眼底檢查、肝腎功能檢查。治療原則：一般治療。生活規(guī)律，預(yù)防感染、飲食治療、降血糖藥物治療）體格檢查:口述呼吸運(yùn)動(dòng) 肝臟單手確診 浮髕試驗(yàn)/操作:脊椎搬運(yùn)/第一題心臟聽(tīng)診:心律不齊第二題肺部聽(tīng)診:兩肺哮鳴

60、音并啰音第三題X光:右側(cè)氣胸第四題X光:脛腓骨骨折第五題:CT片.脾破裂第六題心電圖:正常第七題心電圖:室上性心動(dòng)過(guò)速第八題:醫(yī)德醫(yī)風(fēng),這題就不說(shuō)了,要是不會(huì)做直接回家34號(hào)題 病史采集：咳嗽咯血2個(gè)月 胸痛2周病例分析：反復(fù)腹痛2個(gè)月 十二指腸潰瘍 并出血 中度貧血 體格檢查：眼睛角膜鞏膜檢查 胸部叩診 墨菲事診陽(yáng)性診鑒于什么病 面罩給氧的方法，濕化瓶的作用上機(jī)操作：正常心電圖、陣發(fā)性室上性心動(dòng)過(guò)速、右尺橈骨骨折35號(hào)題，急性腸梗阻36 號(hào)題：采集：女性，四肢關(guān)節(jié)疼痛討論：男性，22歲，腹痛伴嘔吐2天查體：胸部體表標(biāo)志腹部液波震顫操作：吸氧提問(wèn)：頸椎前屈后伸的最大角度都是多少？吸氧為什么要濕