1、精選優質文檔-傾情為你奉上精選優質文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業專心-專注-專業精選優質文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業第一章 緒論法醫物證學：法醫物證學是應用多種學科的理論知識和技術研究并解決涉及法律方面有關生物性檢材的檢驗與鑒定的一門學科。應用的學科包括：醫學、生物學、遺傳學、免疫學、血型血清學、生物化學及分子生物學等。法醫物證學：是以法醫物證為研究對象，以提供科學證據為目的，研究應用生命科學技術解決案件中與人體有關的生物檢材鑒定的一門學科。法醫物證學是法醫學的分支學科，其研究內容屬于法醫學中的物證檢驗部分，是法醫學研究的主要內容之一。法醫物證是一門應用科學，研究的方法涉及多種學科包

2、括：化學，物理學，電子計算機，形態學，免疫血清學，生物化學，分子生物學，遺傳學等方法。 法醫物證的特點：法醫物證的穩定性受環境條件的影響；法醫物證屬于“科學證據”。第二章 法醫物證分析的遺傳學基礎何謂遺傳標記？個體的單位遺傳性狀作為標志用于法醫物證分析時，這種遺傳性狀就成為遺傳標記GM。何謂基因、基因型和表型？基因型：是指個體一個或多個基因座上等位基因的組合，是生物體可見性狀的實際基因組成。表型：是指生物體某特定基因所表現的性狀。表型由基因型決定。Hardy-Weinberg平衡定律的前提條件和意義前提條件：群體無限大、隨機婚配、沒有突變、沒有大規模的遷移和沒有選擇因素的影響。結論：群體中的基

3、因頻率和基因型頻率在逐代傳遞中保持不變。意義：反映基因頻率和基因型頻率的關系（純合子基因型頻率=基因頻率的平方，雜合子=該兩基因頻率乘積的二倍）群體樣本的檢驗非父排除概率（P23）PE是指孩子的非親生父親的男子，能夠被某個遺傳標記系統排除的概率。PE用于評估某一遺傳標記系統在親權鑒定案件中的實用價值。何謂個人識別概率？（P22）個人識別概率（DP）是指在群體中隨機抽取兩個體，兩者的遺傳標記表型不相同的概率。DP是評價該遺產標記系統識別無關個體效能大小的指標，DP越高，效能越強。第三章 DNA多態性的分子基礎何謂DNA多態性？（P37）在基因組DNA中，由不同堿基結構的等位基因所形成的多態性叫做

4、DNA多態性。按照DNA遺傳標記的結構特征，DNA多態性可分為長度多態性和序列多態性。何謂VNTR？（P37）小衛星DNA中的可變數目串聯重復序列稱為VNTR。何謂STR？微衛星的可變數目串聯重復序列稱為短串聯重復序列，STR。第四章 DNA長度多態性RFLPAmp-FLRDNA指紋圖譜的基本特征？遺傳方式：孟德爾規律、所有片段獨立遺傳個體的組織同一性：穩定一致群體遺傳學特征：突變率：配子細胞形成時重排、重組與交換DNA紋印圖譜的基本特征？高多態性遺傳規律：共顯性個體組織同一性：一致群體遺傳學特征：高突變率：配子細胞形成時重排、重組、交換何謂擴增片段長度多態性分析？Amp-FLR：采用PCR技

5、術擴增VNTR或STR基因座等位基因進行DNA長度多態性分析的方法。RFLP與Amp-FLP技術有何異同？（P74）STR分型用于法醫物證鑒定的主要優點？高靈敏度：適用于微量降解檢材高鑒別能力：節約檢材、試劑和提高效率標準化分型：實現數字化結果，利于實驗室間數據交換，建立數據庫何謂miniSTR？miniSTR分型有何法醫學應用價值？miniSTR：通過重新設計引物，使其結合在更靠近核心重復區的側翼序列，從而降低擴增產物的大小，進一步提高靈敏度和分型成功率，這種技術稱為短片段STR分型或miniSTR分型。miniSTR法醫學應用價值：STR基因座的擴增片段較短，靈敏度更高，尤其適用于微量或降

6、解生物檢材的DNA分型；等位基因片段長度范圍較窄，不易發生因小等位基因的優勢擴增而造成的等位基因丟失現象；可對多個STR基因座進行復合擴增，從而節約檢材、降低成本，提高單次檢測的信息量何謂多基因座復合擴增？在一個PCR體系中同時擴增多個靶基因座的方法叫做復合擴增。復合擴增可提高單次檢測的信息量，提高個人識別率，也可降低成本和檢材的消耗。Y-STR有何法醫學應用特點？Y染色體為男性特有Y-STR呈父系遺傳特征單倍體遺傳：在減數分裂過程中，Y-特異性區不發生重組，所有Y-STR基因座均呈連鎖遺傳，等位基因頻率不能以相乘方法計算GD=PE結果不具有唯一性，不能認定Amelogenin基因（名解）牙釉

7、基因（AMG）：位于X染色體Xp22，編碼牙原基質牙釉質蛋白，故命名牙釉基因。在人Y染色體中心粒附近有一類牙釉基因（AMGL），與牙釉基因的堿基序列有90%同源性。用一對特異性引物可同時擴增AMG和AMGL序列片段，X特異性片段長度為977bp，Y為788bp。擴增后，男性可獲得兩條帶，女性只觀察到一條帶。但是其擴增產物較長，不適合腐敗血痕、過于陳舊血痕的性別鑒定。第五章 STR自動分型簡述STR自動分型技術的主要步驟DNA自動化提取PCR多色熒光標記STR復合擴增PCR產物電泳前處理自動毛細管電泳結合激光誘導的熒光檢測自動數據采集并分型何謂off-ladder在STR分型圖譜中，常會遇到部分

8、樣本的少量片段峰未被程序化數字命名，在分型圖譜中被標識為off-ladder漂移作用和新等位基因都可標識為off-ladder何謂LCNLCN：基因組含量小于100pg的樣本稱為低拷貝DNA（low copy number）。第六章 DNA序列多態性DNA多態性（DNA polymorphisms）：基因水平上的多樣性來自基因的突變，當基因突變以等位基因形式在群體中得以保留，并能夠從親代遺傳給子代，可形成個體間的遺傳差異。不同個體間的遺傳差異形式是不同的等位基因組成。等位基因之間的差異可以是點突變引起的序列不同，也可以是因為堿基的插入或缺失引起的片段長度不同，都能構成具有個體特征的DNA遺傳標

9、記。DNA遺傳標記可以出現在編碼區，也可以存在于非編碼區。在基因組DNA中，這種由不同堿基結構的等位基因所形成的多態性叫做DNA多態性。DNA長度多態性（DNA length polymorphisms）：是指同一基因座上各等位基因之間的DNA片段長度差異構成的多態性。DNA長度多態性靶序列主要是指可變數目串聯重復序列（VNTR），VNTR既存在于小衛星DNA中，也存在于微衛星DNA中。由于命名習慣和為了便于區分，通常小衛星DNA中的可變數目串聯重復序列稱為VNTR，而把微衛星的可變數目串聯重復序列稱為短串聯重復序列（STR）。DNA序列多態性（sequence polymorphisms）：

10、是指一個基因座上，因不同個體DNA序列有一個或多個堿基的差異而構成的多態性。可以理解為該基因座上所有等位基因DNA長度相同，但是它們之間的序列存在差異。在基因組DNA中，無論是編碼區或者非編碼區，單堿基替換是最基礎的突變形式。在人類基因組范圍內，如果任何單堿基突變使特定核苷酸位置上出現兩種堿基，其中最少的一種在群體中的頻率不少于1%，就形成單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）。限制性片段長度多態性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）：RFLP分析是一種傳統的分子生物學檢測技術，廣泛應

11、用于突變分析、基因診斷、基因定位等各個方面。法醫物證鑒定應用RFLP技術主要是對人類基因組中的VNTR基因座進行分型，其技術核心是DNA分子雜交，決定RFLP分析圖譜個體特異性的因素是限制性核酸內切酶的特異性和探針的特異性。檢測所用的探針多是由人類基因組DNA中篩選出的小衛星序列，選擇特異性不同的探針，在不同的雜交條件下，可以只檢出單個VNTR基因座，也可同時檢出多個VNTR基因座，前者稱為DNA紋印，后者稱之為DNA指紋，檢測所用的相應探針分別被稱為單基因探針（single-locus probe）和多基因探針(multi-locus probe)。Southern印跡雜交：是進行基因組DN

12、A特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定DNA分子的含量。其基本原理是：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定的條件下，可按堿基互補的原則形成雙鏈，此雜交過程是高度特異的。由于核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性，綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果，便可繪制出DNA分子的限制圖譜。Southern印跡雜交（Southern blot）是研究DNA圖譜的基本技術，在遺傳病診斷、DN

13、A圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值。Southern印跡雜交的基本方法是將DNA標本用限制性內切酶消化后，經瓊脂糖凝膠電泳分離各酶解片段，然后經堿變性，Tris緩沖液中和和高鹽下通過毛吸作用將DNA從凝膠中轉印至硝酸纖維素膜上、烘干固定后即可用于雜交。凝膠中DNA片段的相對位置在DNA片段轉移到濾膜的過程中繼續保持著，附著在濾膜上的DNA與32P標記的探針雜交，利用放射自顯影術確立探針互補的每一條DNA帶的位置，從而可以確定在眾多消化產物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。（瓊脂糖凝膠電泳硝酸纖維素膜吸印）。限制性內切酶常見的有那些？限制性內切酶（restriction endo

14、nuclease）：一種在特殊核甘酸序列處水解雙鏈DNA的內切酶。型限制性內切酶既能催化宿主DNA的甲基化，又催化非甲基化的DNA的水解；而型限制性內切酶只催化非甲基化的DNA的水解。合成引物的要點，PCR的反應組成：標準的PCR反應體系 10擴增緩沖液10l4種dNTP混合物200l引物10100l模板DNA0.12gTaq DNA聚合酶2.5 lMg2+1.5mmol/L加雙或三蒸水100 lPCR反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即： 模板DNA，寡核苷酸引物，dNTP，反應緩沖液，TaqDNA聚合酶。PCR基本原理：PCR技術是模擬生物體內DNA的半保留復制，在體外合成DNA鏈

15、的方法，在模板、DNA、引物、dNTP、Taq酶存在的條件下經過：“高溫變性低溫退火中溫延伸”三步循環，獲得大量擴增片段。合成引物的要點：引物合成是通過測定引物的OD值，溶解引物，最終合成引物的一個完善的過程。目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩定的特點。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3端向5端合成的，相鄰的核苷酸通過35磷酸二酯鍵連接。第一步，是將預先連接在固相載體CPG上的活性基團被保護的核苷酸與三氯乙酸反應，脫去其5-羥基的保護基團DMT，獲得游離的5-羥基

16、。第二步，合成DNA的原料，亞磷酰胺保護核苷酸單體，與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，它的3端被活化，5-羥基仍然被DMT保護，與溶液中游離的5-羥基發生縮合反應。第三步，帶帽(capping)反應，縮合反應中可能有極少數5-羥基沒有參加反應(少于2%)，用乙酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續發生反應，這種短片段可以在純化時分離掉。第四步，在氧化劑碘的作用下，亞磷酰形式轉變為更穩定的磷酸三酯。經過以上四個步驟，一個脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三氯乙酸脫去它的5-羥基上的保護基團DMT，重復以上步驟，直到所有要求合成的堿基被接上去。常染色體STR與性染色體STR有什么不同？

17、常染色體STR：短串聯重復序列(STR)是廣泛存在于人類基因組中的一類具有長度多態性的DNA序列。它由26 個堿基對構成核心序列,呈串聯重復排列,其長度多態性主要由核心序列拷貝數目的變化而產生。一般認為,人類基因組平均每610kb就有1個STR基因座,為法醫個人識別和親子鑒定提供了高信息基因座的豐富來源。與限制性片段長度多態性產生的DNA 指紋相比,用聚合酶鏈反應技術(PCR)擴增STR 基因座產生的DNA紋印具有更高的靈敏度。STR擴增片段較短(100300bp),對于常見含部分降解 DNA的陳舊斑痕,PCR擴增STR比DNA指紋分析更容易成功。性染色體STR：人類Y染色體屬于近端著絲粒染色

18、體，由長臂Yq和微小的短臂Yp組成，DNA長度約60Mb。Y-DNA中大致有五類多態性遺傳標記：衛星DNA、小衛星DNA、微衛星DNA、插入或缺失及SNP。Y染色體STR基因座（Y-STR）是其中一種重要的遺傳標記。與常染色體STR基因座相比，大多數Y-STR基因座具有復雜的串聯重復結構：一個基因座內常含有兩種以上不同的重復單位，恒定重復序列和可變重復序列同時存在。與常染色體STR基因座比較，Y-STR分型的法醫學應用具有以下特點：Y染色體為男性所特有，Y-STR呈父系遺傳特征，只能有父親傳遞給兒子，在減數分裂過程中，Y-特異性區不發生重組，評估Y-STR鑒別能力的指標是遺傳差異度，和mtDN

19、A一樣，Y-STR分型結果不具有唯一性，其法醫學應用價值在于排除，而不能認定。X-STR基因座具有伴性遺傳的特征，X-STR的遺傳特征既不同于常染色體，也不同于Y染色體，表現為性連鎖特征。進行分型檢測時，男性個體X-STR顯現一條片段，女性雜合子則顯示兩條等位基因片段。低拷貝DNA（low copy number，LCN）：是指基因組含量小于100pg的樣本。PCR循環測序的基本原理：PCR技術能夠快速、特異性地擴增靶DNA，應用PCR技術測定DNA序列分為兩個步驟：先利用PCR擴增靶序列片段，制備測序模板，然后再利用PCR直接測定序列。PCR測序采用了熱循環高效合成DNA的特性并結合雙脫氧核

20、苷酸終止法，使引物鏈終止的延伸產物數量在熱循環過程中得到增加，因此稱為循環測序。每個測序循環包括：PCR擴增制備的模板DNA變性成單鏈形式；標記引物與其中的一條鏈上的互補序列退火；退火后的引物在耐熱DNA聚合酶催化下發生鏈延伸終止反應。本次循環產生的模板鏈與延伸終止鏈形成的雙鏈的產物，在下一輪測序循環中，再次被變性，釋放出模板鏈，作為又一輪引發反應的模板，同時積累下一輪循環產生的鏈終止產物。上述循環步驟重復2040次，使鏈終止產物以線性方式獲得擴增。DNA自動測序技術：DNA自動測序技術是以4種熒光染料基團分別作為4種ddNTP終止鏈的標記物，于20世紀80年代末期建立的一種高效、快速、自動化

21、的序列測定技術。4種熒光染料分別作為測序反應中4種ddNTP終止鏈的標記物，即4種被雙脫氧核苷酸終止的DNA片段分別帶上4種不同的顏色。這些DNA片段的混合物同時加在一個樣品槽中電泳展開，相互間僅差1個堿基的DNA片段形成一條具有4種顏色的階梯分布圖像。階梯中的每- DNA片段由標記在該片段上的特征性熒光基團發出的熒光所指示。熒光染料基團作為標記物的基本要求是經過激光誘發的吸收光譜波長在可見光波長范圍內，不影響延伸反應，不影響標記后DNA片段的電泳性質。其次要求4種熒光的吸收和激發光波長要有足夠的差異，便于檢測。熒光染料的摻入的方式有兩種：一種是將熒光染料預先標記在測序反應通用引物的5自動測序

22、儀器無論是變性PAG平板凝膠電泳還是毛細管電泳，都配置有激光束激發系統和熒光信號收集檢測系統。當DNA片段電泳通過檢測窗口時，在激光束的激發下，片段的電泳時間和被激發熒光的波長、強度等信號都被記錄，由計算機自動作數據處理，最后在屏幕上顯示每一樣品的各終止片段電泳分離的模擬圖像。不同顏色的峰標示各自標記的堿基及其排列順序(如圖所示)：MVP（minisatellite variant repeat）序列：稱為具有變異核心序列的小衛星DNA，是一類既有長度多態性又有序列差異的DNA重復序列。第七章 線粒體DNA多態性人類核DNA與mtDNA的比較（P179）mtDNA的特點？唯一的核外DNA來源拷

23、貝數多和異質性（當兩種不同的mtDNA序列存在同一個細胞、組織或者個體時稱之為異質性）母系遺傳抗外切酶的環狀結構有助于分子穩定性，對高度降解檢材奏效瓶頸效應和復制分離閾值效應mtDNA分型的優點？高變區作為遺傳標記用于法醫鑒定，高變區又稱D-環區當細胞核DNA量不足而無法進行分型時，線粒體DNA技術分析是唯一可以利用的技術生物檢材中的毛發、骨干、牙齒和其他嚴重降解的檢材也依賴線粒體分析簡單易操作、檢材靈敏度高所需模板DNA減少減少DNA二級結構干擾mtDNA分型的主要方法？mtDNA提取（抽提）PCR純化PCR產物循環測序反應原理ddNTPcore，only 1 primer mtDNA分型的

24、特殊問題？mtDNA屬于母系遺傳，凡屬同一母系的后代，mtDNA序列都是相同的。序列一致只能說明不排除同一個體的可能；mtDNA能夠提供的信息量有限（單倍型）排除同一性（真正價值）mtDNA的異質性違背同一個體mtDNA序列必然是一致的前提條件，給個體識別鑒定增加了變數；（如果多份檢材異質性出現在同一位置的同一堿基貶義，反而對認定同一個體檢材有利）mtDNA分型的法醫學應用局限性分型技術要求高，耗時耗力耗錢識別力相對較低：非個體唯一，共有單倍體（母系遺傳）異質性數據庫規模：易高估其識別能力無法進行混合斑的檢測第八章 紅細胞血型何謂ABO血型的正反定型？正定性試驗：根據RBC與特異性抗體的反應來

25、分型，即用抗A抗體判定A抗原，用抗B抗體判定B抗原。反定型試驗：依據血清中的凝集素與標準型RBC膜上的凝集原反應的性質，即用標準的A型RBC判定抗A抗體，用標準的B型RBC判定抗B抗體，同時也應用抗H抗體判定H抗原。試述ABO血型的DNA分型方法PCR-SSP序列特異性引物PCR技術：特異性強、重復性好 2）PCR-RFLP中和試驗的基本原理？不完全Ab遮斷作用判斷不完全Ab是否與Ag凝集Oh型血清學特點？在RBC上及唾液中均無ABH抗原，即不被抗A、抗B及抗H所凝集血清中有抗A、抗B及抗H凝集素，可分別凝集A、B、O型RBC第九章 白細胞血型HLA抗原的分布HLA-I類抗原：分布廣發，幾乎存

26、在于所有的有核細胞表面，以淋巴細胞上的密度最高。成熟RBC上沒有HLA-A、B、和DR抗原，幼稚RBC卻有。HLA-II類抗原：密度最高者為DC、單核細胞，一些吞噬細胞亞群及B細胞；II類抗原作為一種分化抗原在不同細胞上表達，大多數骨髓分化細胞具有HLA-II類抗原。HLA命名原則以大寫字母A、D、C.表示HLA遺傳區域中的座位HLA抗原特異性用數字表示為防止與補體組分命名相混淆，HLA-C抗原特異性以Cw為字首命名HLA基因命名一般以4位數字表示，其中前2位數字表示對應最相近的HLA抗原特異性，后2位數字則用于表示亞型的等位基因，如A*0101如果出現第五位數字，則代表“沉默取代”，即該基因

27、雖發生了個別堿基的替換，但新密碼子與原密碼子屬簡并密碼，不影響所編碼的氨基酸序列第6、7位數字代表相應的啟動子序列的多態性末尾加英文字母N表示無效基因或不表達基因在不能區分等位基因時，可允許最前面的2位或4位數字表示該HLA的特異性HLA遺傳特征共顯性遺傳：每個HLA基因座表達一對抗原，人類HLA每個基因座上有眾多等位基因。故如果血清學方法分型時，個體只檢測出了一個抗原則有三種可能：該抗原的純合子、HLA血清板不完全、存在一種至今尚未發現的抗原。單倍型遺傳：單倍體是指一條染色體上HLA各基因座的基因緊密連鎖組成的基因遺傳單位。連鎖不平衡：HLA在實際群體調查發現，各基因座的基因并非完全隨機組成

28、單倍型，有些單倍型觀察頻率高于期望頻率或低于期望頻率，這種現象稱為連鎖不平衡。處于連鎖部平衡狀態說明HLA不同基因座的基因之間存在關聯，具有一同遺傳的趨向。HLA高多態性微量淋巴細胞毒性試驗原理（血清學分型）微量淋巴細胞毒性試驗或稱補體依賴的細胞毒性試驗，其分型原理為Ag-Ab-C：淋巴細胞膜上的HLA抗原與已知HLA血清中相應抗體結合后，形成抗原抗體復合物，再結合補體。C激活、破壞Lc：被激活的補體系統產生細胞毒性，攻擊淋巴細胞，淋巴細胞膜破壞。死細胞著色：經過染色，染料進入破損細胞內著色，為陽性結果。計數：在倒置相差顯微鏡下觀察，計數著色細胞所占細胞數目的百分比。HLA抗血清與交叉反應成功

29、的關鍵是HLA抗血清的質量根據與抗原決定鏃的反應，可把HLA抗體分為2組：抗體僅與一種HLA基因產物反應抗體能與不止一種HLA基因產物結合斑點雜交（PCR-SSO分型方法）將PCR擴增片段制成斑點，用等位基因特異性寡核苷酸探針（ASO）雜交，通過探針放射自顯影結果進行HLA分型。反向斑點雜交（RDB）：把探針預先固定在膜上，標記PCR引物。比較HLA血清學分型和DNA分型方法的可靠性HLA個體遺傳差異的本質不是在于血清學方法所檢測的抗原，而是在編碼基因產物的DNA分子上。DNA分型優于血清學方法在于：試劑由化學合成，便于標準化和實驗室間相互比較結果對檢材要求不高（血清學方法因需要活細胞而難以用

30、于斑痕HLA分型）血清學與DNA分型不完全相同的分型誤差得以解決血清學方法發生的錯誤主要集中在：交叉反應抗原能否正確指定屬于A9和A19的亞型，這些抗原多在交叉組內或是寬特異性抗原的裂解產物未能檢出WHO命名的全部基因純合子細胞中存在假陽性反應HLA-C大量“空白”基因，沒有相應的抗血清檢測它們的產物（DNA分型技術促進和改善了對HLA多態性的分辨率）HLA在法醫學上的意義高度多態性出生時已完全發育，終身不變For 同一認定、個人識別第十章 血清型等電聚焦技術for 亞型Hp分型原理、方法及法醫學應用評價Hp：結合珠蛋白，血清中，能與Hb結合使Hb過氧化物酶樣活性顯著的糖蛋白分型：HP1-1、

31、Hp2-1及Hp2-2遺傳變異，Hp0（無結合珠蛋白血癥）:不能用于流產胚胎或4mon的新生兒的親子鑒定。原因： 1）溶血性貧血，特發性貧血，白血病，尿毒癥等，患者的血漿Hp含量明顯下降； 2）嚴重肝臟疾病如急性肝炎、肝硬化，Hp合成障礙； 3）胎兒及部分新生兒（4個月后大部分能檢出）； 4）少數正常個體（注意假陰性）。分型原理：型別分離：PAG圓盤電泳：利用PAG的分子篩作用和電場作用，在柱狀凝膠中分離不同型別的Hp蛋白。Hp-Hb，Hb過氧化物酶樣活性使聯苯胺氧化為聯苯胺藍顯色；（just for新鮮血清中Hp型別）Hp亞型等電聚焦電泳分型DNA分型：利用基因特異性探針進行雜交分型、PCR

32、擴增Gc分型原理、方法及法醫學應用評價Gc：維生素D結合蛋白DPB，也成型特異性成分，電泳屬a2球蛋白，主要生物學功能是結合和轉運維生素D分型原理：免疫電泳PAG圓盤電泳等電聚焦技術DNA分型Gc法醫學應用評價個人識別率為0.799非父排除率為34.8%室溫保存4個月的血痕可檢出Gc型 4在血痕檢測中，優于Hp試述免疫球蛋白同種異型分型原理、方法及法醫學應用評價同種異型：是指免疫球蛋白上具有表達個體差異的抗原決定簇，由編碼免疫球蛋白多肽鏈基因的等位基因所表達產生，表現為同一種屬不同個體的免疫球蛋白抗原性不同，具有遺傳多態性。人類免疫球蛋白同種異型的命名是根據抗原決定簇位于重鏈或是輕鏈。分型方法

33、：血凝抑制試驗酶聯免疫試驗膠體金免疫層析技術PCR擴增法醫學應用評價：Gm及Km系統DP及PE均高于已知的RBC血型、RBC酶型及其他血清型Gm及Km抗原在常溫下或堿性環境中頗為穩定，溶血對抗原性無大影響等位基因排斥現象：免疫球蛋白同種異型的遺傳，在重鏈或輕鏈的同一位置上氨基酸不相同的同種異型是由常染色體共顯性基因遺傳的。但基因的表達具有等位基因排斥現象。雖然雜合子的兩個等位基因同時表達，但任何一個免疫球蛋白分子只有一個同種異型。因為一個B細胞只能表達一種等位基因，稱為等位基因排斥現象。Gm系統：免疫球蛋白同種異型兩個相互獨立的連鎖群基因的其中重鏈標記，決定IgG同種異型。第十一章 酶型同工酶

34、的分型方法同工酶的多態性采用凝膠電泳方法進行分型區帶電泳：利用酶蛋白分子的大小和所攜帶電荷數量（酶蛋白的電荷密度的差異）Rf等電聚焦技術：根據酶蛋白分子的等電點不同，在pH梯度介質中，酶蛋白分子聚焦在相應的等電點pH位置上，形成狹窄而清晰的區帶凝膠介質上酶區帶的顯現及鑒定直接底物顯色法：常用于測定水解酶，無色底物被酶催化反應轉變成有色產物熒光染色法：酶催化下，非熒光底物生成高度熒光的產物或使熒光底物轉化成非熒光產物（負熒光染色）電子轉移染料染色：酶催化下，同時NAD+或NADP+還原成NADH或NADPH，同時提供電子。染料還原成暗藍紫色的不溶性甲月替。PGM1分型原理、方法及法醫學應用評價P

35、GM：磷酸葡萄糖變位酶（Mg2+（+），Zn2+（-）PGM1同工酶活性很高，廣泛存在于人體和動物體內各種組織中，esp心、肝。分型：淀粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳，pH7.4的緩沖系統：從（-）（+），譜帶順序為a、b、c、d（PGM1基因產物，具有個體差異）、e、f、g（PGM2基因座產物，多態性較低）。PGM1-1=ac，PGM12-1=abcd，PGM1=ac，PGM2=bd亞型使用PAG等電聚焦技術DNA-RFLP分型：在PGM1的exon4和exon8中多態性堿基均涉及限制性內切酶識別序列的改變檢出時限：室溫保存的血痕樣品4-6w內可以準確分型條件較好、保存得當：3-4mon低溫保存

36、：更長時間陳舊血痕：可能在d帶區域出現一條擴散的譜帶，干擾正常判型EsD分型原理、方法及法醫學應用評價EsD：酯酶D，存在于RBC和組織中的水解酶EsD表型：3種表型，EsD1-1=12，EsD2-2=23，EsD2-1=123（其中1帶活性最高）分型方法：淀粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳法：分辨率較好、方法簡便、較常用醋酸纖維素膜電泳法PAG等電聚焦法檢出時限：室溫3-4mon，低溫0.5yr；組織檢材EsD分型的檢出時限較血痕短。EAP分型原理、方法及法醫學應用評價EAP：紅細胞酸性磷酸酶，酶活性以前列腺最好，RBC次之。分型：淀粉凝膠電泳或瓊脂糖凝膠電泳醋酸纖維素膜電泳PAG等電聚焦電泳檢出

37、時限：室溫9w早孕絨毛組織EAP表型能代表胎兒表型，可用于妊娠早期的親自鑒定作為個人識別和親自鑒定的同工酶的條件：酶型多態性程度高，鑒別能力及PE高酶的催化活性易于測定酶活性高而穩定，不易受干燥和其他理化因素影響電泳檢測操作簡便，結果重復性好除血液外，在其他人體組織及細胞也可檢出相同的型別第十二章 親子鑒定何謂PEPE：非父排除概率，是指不是小孩生父的男子（簡稱非父）能被遺傳標記排除的概率。是衡量遺傳標記系統在親子鑒定中實用價值大小的指標。不同遺傳標記有不同PE值。試述父權指數與父權相對機會父權指數：是親子關系鑒定中判斷遺傳證據強度的指標，它是判斷親子關系所需要的兩個條件概率的似然比，即具有A

38、F遺傳表型的男子是孩子生物學父的概率（X）與隨機男子是孩子生物學父親的概率（Y）的比值，PI=X/Y。父權相對機會：是兩個條件概率的比值，它的一個條件概率可以按Bayes定理換算成為另外一個條件概率，從而引出另一個參數，稱之為父權相對機會（RCP）或父權概率（W=PI/（PI+1），何謂排除父權的標準否定父權不僅需要考慮遺傳標記在兩代人之間是否符合遺傳規律也要考慮遺傳標記在親子鑒定中的系統效能（DP）遺傳標記數，CPE，鑒定能力；由于是的遺傳標記，遇到遺傳變異的可能性；P285為了避免潛在遺傳變異的影響，排除父權至少應根據兩個以上遺傳標記。何謂認定父權的標準父權指數：父權相對機會：實驗用遺傳標

39、記累計排除概率大于等于0.9999.CPI104第十三章 法醫物證檢材的提取、包裝和送檢怎么提取、包裝和保存血痕提取：較小整件、較大刮拭；少量轉移、注意干燥；泥土避震、兇器整取。禁止裸觸、標記錄好。當血痕附著在較小的物品或易于移動、包裝、運輸、送檢的物品上整體采取可剪切或易于拆卸的大件物品上血痕部位+周邊無血痕部位的一部分/拆卸有血痕部件堅硬、固定、沉重等不易攜帶搬運的大件物品上且表面光滑、血痕成痂手術刀片刮取血痕稀薄紗布+蒸餾水折角，于血痕處反復擦拭轉移到紗線上，晾干表面松軟的血痕+血痕周圍的相同附著物表面基質（作為基質對照），eg泥土（注意避震）各種紡織物品小件的整件提取、不便整件提取的剪

40、下血痕&血痕附近空白織物+記錄器所在部位較大的木質類載體切削薄片狀部分/鋸掉端、角兇器：整體，but較大的話轉移血痕包裝：獨立、紙袋（結實、牢固、潔凈）包裝、標注案件編號+提取地點&時間+提取方法+樣品名稱+數量+保存方法+采集人 保存：陰涼干燥或冰箱，檢材提取的三大原則和八大注意三大原則：不損失、不污染、不破壞八大注意：翻動物件或是提取物證前，要先拍照、錄像、繪圖、記錄和測量，以顯示物證原始狀態和位置必須戴手套持潔凈器具提取，禁止用手直接觸摸檢材提取的檢材寧多勿少，盡量保持其原狀不受損傷根據檢材的種類采用適當的方法提取不同部位的檢材應分別提取、分別包裝，并貼有唯一獨特標記根據案件的情況，應盡

41、量采集相關的對照樣本提取的檢材必須詳細登記嚴格遵守有關法律法規的規定第十四章 血痕檢驗聯苯胺實驗血痕預試驗，靈敏度高，操作簡便快速，特異性不好意義在于陰性結果可以否定血痕原理：利用血痕中的Hb或正鐵血紅素具有的過氧化物酶活性，使過氧化氫釋放出新生態氧，將無色聯苯胺氧化為聯苯胺藍。取材注意：刮取微量，節約檢材血色原結晶實驗（高山結晶試驗）確證試驗，特異性好，靈敏度不高意義在于陽性結果可確證檢材為血痕原理：Hb在堿性溶液中分解為正鐵血紅素和變性珠蛋白。在還原劑作用下，正鐵血紅素還原為血紅素，同變性珠蛋白和其他含氮化合物（如吡啶、氨基酸等）結合形成血色原結晶。吸收-解離實驗血痕的血型測定要求Ab效價

42、高一點好原理：可逆的結合反應血痕中的A、B、H抗原能與相應的抗-A、抗-B、抗-H抗體發生特異性的結合反應；加熱解離56指示RBC檢測解離液中Ab用已知A、B和O指示紅細胞檢測解離液中抗體。結果判定凝集（+），不凝集（-）血痕檢驗一般遵循的基本程序是什么？肉眼檢查預試驗確證試驗種屬鑒定遺傳標記測定其他試驗等：出血部位（混有組織細胞）、出血量（重量、分光光度）、出血時間第十五章 精液斑檢驗如何進行精液斑的個體識別ABO血型測定：中和試驗（分泌型）、酶標抗體免疫測定法（非分泌型）、DNA分型（PCR、PCR-RFLP）DNA分析：DNA提取（需要加入DTT）試述精液斑與血痕ABO血型分型方法的區別

43、精液斑：中和試驗（分泌型）酶標抗體免疫測定法（非分泌型）血痕：吸收試驗（吸收-抑制試驗）解離試驗（吸收-解離試驗）試述精液斑與血痕DNA提取方法的異同異：精液斑：必須要切斷二硫鍵以消化蛋白（膜）DTT（二硫蘇糖醇）血痕：有機溶劑or Chelex-100同：PK、SDS試述Y-STR分型技術在精液斑個人識別中的優缺點Y-STR呈男性伴性遺傳，不與其他染色體重組，除突變外，在父系的所有男性個體都具有相同的Y-STR單倍型，因此可利用父系親屬的參考樣本進行犯罪嫌疑人的排除推測；只具有排除同一性意義，不能認定同一性。精液斑檢驗的一般程序肉眼觀察：UV（銀白色）；白、痂、鱗、硬、腥；預實驗：酸性磷酸酶試驗AP（紅色醌類化合物）/預實驗陰性的檢材仍要進行確證試驗；確證實驗：精子檢出法（染色）種屬鑒定：抗人精液血清沉淀反應個體識別：ABO血型（中和試驗、酶標抗體免疫測定法、DNA分型）、DNA分析第十六章 唾液及唾液斑檢驗如何進行唾液斑的個體識別（just like 精液）ABO血型測定：中和試驗（分泌型）、酶標抗體免疫測定法（非分泌型）、ABO基因分型/腦脊液無ABH抗原DNA分析：口腔黏膜脫落上皮細胞（nDNA and mtDNA）PCR-STR第十七章 混合斑檢驗差異提取法及其優缺點輪奸案混合斑檢驗注意提取多處檢材或一份檢