1、食品安全國家標準 植物源性食品中四聚乙醛殘留量的測定 液相色譜-質譜聯用法范圍本標準規定了植物源性食品中四聚乙醛殘留量的液相色譜-質譜聯用測定方法。本標準適用于植物源性食品中四聚乙醛農藥殘留量的測定。規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB 2763 食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法原理試樣中的四聚乙醛用乙腈提取，提取液經分散介質吸附凈化，用液相色譜-質譜聯用儀測定，外標法定量。材料與試劑除另有說明外，在分

2、析中僅使用分析純試劑和GB/T 6682中規定的一級水。試劑乙腈（CH3CN， CAS號：75-05-8）：色譜純。甲醇（CH3OH，CAS號：67-56-1）：色譜純。甲酸（HCOOH，CAS號：64-18-6）：色譜純。乙酸銨（CH3COONH4，CAS號：631-61-8）：色譜純。氯化鈉（NaCl，CAS號：12125-02-9）。無水硫酸鎂（MgSO4，CAS號：7487-88-9）。溶液配制乙酸銨溶液（5 mol/L）：準確稱取385.4 g乙酸銨溶解于適量水中，用水定容至1000 mL，搖勻。甲酸/乙酸銨溶液（1+0.05+998.95）：量取1 mL甲酸和0.05 mL乙酸銨溶

3、液（4.2.1）加入998.95mL水中，搖勻。標準品四聚乙醛（C8H16O4，CAS號：108-62-3）標準品，純度95%。標準溶液配制四聚乙醛標準儲備溶液（1000 mg/L）：準確稱取四聚乙醛標準品10.0mg于50 mL燒杯中，用乙腈溶解后轉移到10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，放置于-18避光保存，有效期6個月。四聚乙醛標準中間溶液（10 mg/L）：準確吸取1 mL四聚乙醛標準儲備溶液于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，放置于04冰箱，有效期1個月。材料N-丙基乙二胺（PSA）：40m 60 m。石墨化炭黑（GCB）：120m 400m。十八烷基鍵合硅膠（C

4、18）：50m。濾膜：0.22 m，有機系。儀器和設備液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。電子天平：感量 0.000 1 g、感量 0.0 1 g。組織搗碎機。小型粉碎機。高速均質器：轉速不低于15000 r/min。離心機：轉速不低于15000 r/min。渦旋振蕩器。離心管（聚四氟乙烯）：10 mL、50 mL和100 mL。試樣制備蔬菜、水果和食用菌樣品按相關標準取一定量，取樣部位按GB 2763規定執行。對于個體較小的樣品，取樣后全部處理；對于個體較大的基本均勻樣品，可在對稱軸或對稱面上分割或切成小塊后處理；對于細長、扁平或組分含量在各部分有差異的樣品，可在不同部位切取小

5、片或截成小段或處理；取后的樣品將其切碎，充分混勻，用四分法取樣或直接放入組織搗碎機中搗碎成勻漿。勻漿放入聚乙烯容器中。取谷類樣品500g，粉碎后使其全部可通過425m的標準網篩，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶葉、堅果和香辛料樣品各500g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中。 植物油類樣品攪拌均勻。試樣于-16-20條件下保存。分析步驟提取蔬菜、水果、食用菌類稱取10 g（精確至0.01 g）試樣于100 mL離心管中，參見附錄A補水，靜置10 min，然后加入10 mL乙腈（4.1.1），用高速均質器以15 000 r/min勻漿提取2min后，加入2 g氯化鈉（4.1.4），渦旋振蕩1

6、 min，以5000 r/min離心5 min，待凈化。谷物、油料、堅果、植物油類稱取5 g（精確至0.01 g）試樣于100 mL離心管中，參見附錄A補水，靜置10min，然后加入10 mL乙腈（4.1.1），渦旋振蕩2 min后，加入2 g氯化鈉（4.1.4），渦旋振蕩1 min，以5000 r/min離心5 min，待凈化。茶葉、香辛料類稱取2 g（精確至0.01g）試樣于100 mL離心管中，參見附錄A補水，靜置10 min，然后加入10 mL乙腈（4.1.1），冰浴超聲15 min后，以5000 r/min離心5 min，上清液全部轉入另一只預先裝有2 g氯化鈉（4.1.4）的50

7、mL離心管中，殘渣用10 mL乙腈（4.1.1）再提取一次，合并兩次提取的上清液，渦旋振蕩1 min，以5000 r/min離心5 min，待凈化。凈化淺色蔬菜、水果、食用菌、谷物、油料、堅果、植物油、香辛料準確吸取2 mL提取液于稱有100 mg PSA（4.5.1）、100 mg C18（4.5.3）和300 mg無水硫酸鎂（4.1.5）的10 mL離心管中，蓋上蓋子，渦旋1 min，以5000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 m有機系濾膜（4.5.4），待測。深色蔬菜、茶葉準確吸取2mL提取液于稱有100 mg PSA（4.5.1）、100 mg GCB（4.5.2）、10

8、0 mg C18（4.5.3）和300 mg無水硫酸鎂（4.1.5）的10 mL離心管中，蓋上蓋子，渦旋1 min，以5000 r/min離心5 min，取上清液過0.22 m有機系濾膜（4.5.4），待測。儀器參考條件液相色譜參考條件a) 色譜柱：C18，50 mm3.0 mm，粒徑1.8 m，或相當者；b) 流動相：A為0.1%甲酸-0.25mM乙酸銨溶液，B為乙腈，梯度洗脫程序見表1； c) 流速：0.4 mL/min；d) 柱溫：40C；e) 進樣體積：2 L。表1 流動相及梯度洗脫條件（VA+VB）時間minVAVB090102802034060510907010099010質譜參考

9、條件a) 離子源類型：ESI；b) 毛細管電壓：2.5 kv；c) 干燥氣：氮氣，流速：660 L/h，溫度350 ；d) 碰撞氣類型：氮氣；e) 掃描方式：正離子掃描；f) 檢測方式：多反應監測（MRM），監測條件見表2。表2 四聚乙醛的保留時間和多反應監測（MRM）的條件化合物保留時間min定性離子對定量離子對錐孔電壓V碰撞能量V四聚乙醛3.1194/62；194/45194/62702；30標準工作曲線將四聚乙醛標準中間溶液用空白提取液稀釋成質量濃度為0.001mg/L、0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L的系列基質匹配標準溶液

10、，供液相色譜-質譜聯用儀測定。以四聚乙醛質量濃度為橫坐標，其相應的峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，求回歸方程和相關系數。基質匹配標準溶液應現配現用。定性及定量保留時間被測試樣品中四聚乙醛色譜峰的保留時間與相應標準色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應在2.5%之內。定量離子、定性離子及子離子豐度比在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰的保留時間與標準樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，目標化合物的質譜定性離子必須出現，至少應包括一個母離子和一個子離子，而且同一檢測批次，對同一化合物，樣品中目標化合物的子離子的相對豐度比與濃度相當的標準溶液相比，其相對偏差不超過表3規定的范圍，

11、則可判斷樣品中存在四聚乙醛。表3 定性時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度50%20%至50%10%至20%10%允許相對偏差20%25%30%50%測定將基質匹配標準工作溶液和待測溶液分別注入液相色譜-質譜聯用儀中，以保留時間和定性離子定性，試樣中四聚乙醛質量濃度應在標準工作曲線質量濃度范圍內，采用外標法定量。空白試驗除不加試樣外，采用完全相同的步驟進行平行操作。結果計算試樣中四聚乙醛殘留量以質量分數計，單位以毫克每千克(mg/kg)表示，按公式（1）計算：（1）式中：試樣中四聚乙醛的殘留量，單位為毫克每千克（mg/ kg）；A樣溶液中四聚乙醛的峰面積；As農藥標準溶液中四聚乙醛的峰面積

12、；標準溶液中四聚乙醛的質量濃度，單位為毫克每升（mg/ L）；V提取液的總體積，單位為毫升（mL）；m試樣的質量，單位為克（g）；計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留兩位有效數字，當結果大于1 mg/kg時保留三位有效數字。精密度在重復性條件下，兩次獨立測定的結果差不大于重復性限（r），重復性限（r）的數據為：含量為0.01 mg/kg時，重復性限（r）為0.00236；含量為0.1 mg/kg時，重復性限（r）為0.0231；含量為1.0 mg/kg時，重復性限（r）為0.185。在再現性條件下，兩次獨立測定的結果差不大于再現性限（R），再現性限（R）的數據為：

13、含量為0.01 mg/kg時，再現性限（R）為0.00306；含量為0.1 mg/kg時，再現性限（R）為0.0473；含量為1.0 mg/kg時，再現性限（R）為0.375。其他本方法定量限為0.01 mg/kg。圖譜圖1 0.01mg/L四聚乙醛標準溶液色譜圖附錄A（資料性附錄）所選基質含水量、稱樣量及提取前補水量信息表表A.1 所選基質含水量、稱樣量及提取前補水量信息表基質名稱含水量%稱樣量g提取前補水量g桃90101.0梨85101.5蘋果85101.5草莓90101.5葡萄80102.0柑橘85101.5菜豆75102.5黃瓜95100.5花椰菜75102.5西蘭花75102.5大白菜95100.5茄子9010