1、關于病毒感染的檢查方法與防治原則1第一張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第一節 病毒感染的檢查方法檢測內容查病毒查特異性抗體 病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉錄酶 電鏡直接觀察 光鏡檢查包涵體 分離培養第二張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，還特別注意以下原則：采集急性期標本使用抗生素：標本用“雙抗”或兩性霉素B處理 冷藏保存、快速送檢采集雙份血清第三張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養細胞培養（cell culture）雞胚接種（egg inoculation）動物接種（anim

2、al inoculation）第四張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月二、病毒的分離與鑒定一般程序：標本無菌處理動物接種雞胚培養細胞培養指標陽性指標陰性 病毒鑒定 盲傳23代指標陰性病毒陰性第五張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月1. 細胞培養根據生長方式分類： 單層細胞培養（monolayer cell culture） 懸浮細胞培養（suspended cell culture）從細胞來源、染色體特征及傳代次數分類： 原代細胞（primary cell） 二倍體細胞（diploid cell） 傳代細胞系（continuous cell line）（一）病毒的分離培養第六張，P

3、PT共三十五頁，創作于2022年6月病毒的細胞培養細胞培養瓶單層細胞第七張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月1.細胞培養（1）原代和次代細胞培養組織 組織塊 分散的單個細胞 單層細胞 剪碎 培養基(原代細胞)單層細胞(次代細胞)傳代培養蛋白酶 特點：對多種病毒敏感 生長能力有限, 獲取成本高 可攜帶潛伏病毒第八張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月（2）二倍體細胞培養 體外分裂50100代仍保持二倍體染色體數目，可用于病毒分離和疫苗生產。特點：對多種病毒敏感 不帶異種蛋白(人源性) 不帶病毒，無致瘤潛能 可傳50代左右1.細胞培養第九張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月（3）

4、傳代細胞培養特點：對多種病毒敏感性高 繁殖能力高，傳代時間長 有致癌危險，不能用于疫苗生產1.細胞培養第十張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月病毒在培養細胞中增殖的指征：致細胞病變效應（cytopathic effect, CPE ）紅細胞吸附（hemadsorption） 病毒干擾作用（viral interference）細胞代謝改變（一）病毒的分離培養第十一張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第十二張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落（1）致細胞病變效應（CPE）第十三張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月麻疹病毒感染細胞呼吸道合胞病

5、毒感染細胞形成多核巨細胞或稱融合細胞（1）致細胞病變效應（ CPE）第十四張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月形成包涵體(inclusion body)（1）致細胞病變效應（CPE）第十五張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月腮腺炎病毒感染細胞（2）紅細胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)紅細胞表面HA受體第十六張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月（3）干擾現象（interference）風疹病毒猴腎細胞 病毒增殖，CPE()?？刹《竞锬I細胞 病毒增殖，CPE()猴腎細胞風疹病毒埃可病毒?？刹《颈灰种?，CPE()（4）細胞代謝改變第十七張，PPT共三十

6、五頁，創作于2022年6月2. 雞胚培養 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人類皰疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分離 卵黃囊（yolk sac） 嗜神經病毒 第十八張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第十九張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月2. 雞胚培養優點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復雜第二十張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第二十一張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月3.動物接種應用：尚無敏感細胞

7、的病毒培養動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等優點：結果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養條件要求，費用高，動物 體內常帶有潛伏病毒第二十二張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月（二）病毒的鑒定1.形態學鑒定：電子顯微鏡2.血清學鑒定：鑒定病毒種、型、亞型，免疫標記法、血凝抑制試驗等。血凝抑制試驗 正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細胞凝集（血凝試驗） 病毒特異性抗體雞紅細胞不凝集 （血凝抑制試驗）第二十三張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月（二）病毒的鑒定3.分子生物學鑒定：抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴增核酸雜交基因芯片基因測序第二十四張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月1.血凝試驗：病毒

8、總量（活病毒死病毒）2.50%組織細胞感染量（50 tissue culture infectious dose, TCID50）測定3.空斑形成試驗（plaque formation test）：空斑形成單位（ plaque formation unit，PFU） （三）病毒數量與感染性測定感染性病毒量第二十五張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月三、病毒感染的診斷（一）形態學檢查電鏡和免疫電鏡檢查 普通光學顯微鏡檢查：包涵體第二十六張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月三、病毒感染的診斷（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測：免疫標記技術2.病毒核酸檢測：核酸擴增技術、 核酸雜交技

9、術 、基因芯片技術、基因測序第二十七張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月三、病毒感染的診斷（三）病毒感染的血清學診斷中和試驗血凝抑制試驗特異性IgM抗體檢測其他：早期抗原的抗體檢測第二十八張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第二節 病毒感染的特異性預防生物制品：微生物及其代謝產物、 動物免疫血清、 免疫細胞、 細胞因子。防治和診斷感染性疾病。第二十九張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第二節 病毒感染的特異性預防一、人工主動免疫常用生物制品滅活疫苗（inactivated vaccine）減毒活疫苗（attenuated vaccine）重組載體疫苗（recombinant

10、carrier vaccine）亞單位疫苗（subunit vaccine）基因工程疫苗（genetically engineering vaccine）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）第三十張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第二節 病毒感染的特異性預防二、人工被動免疫常用生物制品免疫球蛋白：血清丙種球蛋白細胞免疫制劑： IFN-、 細胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 第三十一張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月第三節 病毒感染的治療（一）抗病毒化學制劑核苷類藥物：阿昔洛韋、阿糖腺苷、齊多夫定（AZT）非核苷類反轉錄酶抑制劑：奈韋拉平、吡啶酮蛋白酶抑制劑：沙奎那韋其他抗病毒藥物：金剛烷胺（二）干擾素和干擾素誘生劑（三）中草藥防治病毒感染（四）新抗生素類（五）治療性疫苗（六）治療性抗體：帕利珠（七）基因治療劑：反義寡核苷酸、干擾RNA、核酶第三十二張，PPT共三十五頁，創作于2022年6月思考題分離病毒的標本和作血清學診斷的標本各有何要求？常用組織培養法有幾種？各有何應用？病毒在組織細胞中增殖的指標是什么？病毒性