1、第三節動物的克隆第1頁，共15頁。1、動物細胞培養（一）動物細胞、組織培養 動物組織分散成單個細胞培養細胞得以生存并保持生命活動現象生長、分裂乃至接觸抑制和有規律的衰老、死亡性能等一、動物克隆的技術基礎機械消化或胰酶消化（1）定義第2頁，共15頁。 動物組織在體外及人工條件下維持生活狀態或生長特性。2、動物組織培養3.動物組織培養與動物細胞培養的關系第3頁，共15頁。單個細胞轉入特殊培養液中進行原代培養細胞形成生長暈并增大分裝到多個卡氏瓶中進行傳代培養?第4頁，共15頁。細胞系有關概念:（2）連續細胞系:（1）有限細胞系：連續細胞株有限細胞株細胞株-可連續傳代的細胞不能連續培養下去的細胞系能連

2、續培養下去的細胞系發生了轉化：大多數具有異倍體核型，有的是惡性細胞系，具有異體致瘤性，有的獲得不死性（保留接觸抑制，不致癌）例：二倍體細胞通過一定的選擇或純化方法，從原代培養或細胞系中獲得的具有特殊性質的細胞具有恒定的染色體組型、同工酶類型、病毒敏感性和生化特性。第5頁，共15頁。細胞系泛指可傳代的細胞細胞株是具有特殊性質的細胞系細胞系與細胞株的關系第6頁，共15頁。（3）動物組織培養的條件:1.無菌無毒的環境2.營養3.溫度和pH4.氣體環境第7頁，共15頁。植物組織培養和動物組織培養的比較比較項目植物組織培養動物細胞培養原理培養基性質培養基特有成分培養結果細胞的全能性細胞增殖固體培養基液體

3、培養基蔗糖 植物激素葡萄糖 動物血清植物體細胞株、細胞系第8頁，共15頁。（三）克隆培養法把一個單細胞從群體中分離出來單獨培養，使之繁衍成一個新的細胞群體的技術1、定義：未經克隆的異質性細胞系純系：分離 克隆經克隆以后的細胞的后裔細胞群，來源于一個共同的祖細胞。2、產物:遺傳性狀均一、表現的性狀相似的純系3、細胞克隆的基本要求:必須保證所建成的克隆來源于單個細胞第9頁，共15頁。單細胞不如群體細胞原代培養細胞和有限細胞系不如無限細胞系、轉化細胞系和腫瘤細胞4、克隆對象的選擇依據：選擇對培養環境具有較大適應范圍和具有較強獨立生存能力的細胞。5、提高細胞克隆形成率的措施選擇適宜的培養基、添加血清、

4、以滋養細胞支持生長、激素刺激、使用CO2培養箱調節PH6、細胞克隆的用途從普通細胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細胞系，方便科學研究第10頁，共15頁。1.動物細胞全能性的表現程度二、動物的克隆繁殖全能干細胞多能干細胞專能干細胞：低等動物細胞的全能性一般比較容易體現。無論分化或癌變，變化的都是表現型，基因組完整性可以保留第11頁，共15頁。2.動物難以克隆的原因細胞的分化使得細胞發生了基因的差異表達，有的基因開放，有的基因關閉已分化的體細胞，基因組中基因的活動很不完全，不能像受精卵那樣發揮細胞的全能性第12頁，共15頁。3.動物核移植實驗和克隆繁殖利用一個細胞的細胞核（核供體）來取代另一細胞中的細胞核，形成重建的“合子”。 核移植：實踐證明：胚胎細胞核的移植成功率遠高于成體細胞。第13頁，共15頁。克隆羊培育過程黑面綿羊去核卵細胞白面綿羊乳腺細胞核細胞核移植重組細胞電脈沖刺激8細胞胚胎胚胎移植另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利體細胞核移植技術實例第14頁，共15頁。討論（閱讀P