1、藥品衛生與微生物學培訓PEKING PHARM FIRST1什么是微生物微生物是廣泛存在于自然界的一群體形微小（直徑小于1mm）、結構簡單、肉眼看不見，必須藉助光學或電子顯微鏡放大數百至數萬倍才能觀察到的生物。 2微生物具有以下特點：1.體積小，面積大2.吸收多，轉化快（2000倍體重/h）3.生長旺，繁殖快（20min分裂一次）4.易變異，適應強5.分布廣，種類多（10萬種以上）3微生物如何分類？微生物按其生理結構及化學組成差異可分成三大類：1.真核細胞型細胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體；胞質內有完整的細胞器（如內質網、核糖體及線粒體等）。真菌屬于此類型微生物。4微生物如何分類？2

2、.原核細胞型細胞核分化程度低，僅有原始核質，沒有核膜與核仁；細胞器不很完善。這類微生物種類眾多，有細菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體和放線菌。5微生物如何分類？3.非細胞型沒有典型的細胞結構，亦無產生能量的酶系統，只能在活細胞內生長繁殖。體積微小，能通過除菌濾器。病毒屬于此類型微生物。6微生物的分布微生物在自然界里分布非常廣泛土壤：土壤具有保溫性，土壤環境適合微生物的生長水環境：水中溶解和懸浮有機、無機物，流動水有氧滲入可供微生物生長環境空氣：空氣不是微生物生長繁殖的主要場所，但是空氣中飄浮著許多微生物。7在一般空氣中，微生物達8003500個/m3，在土壤中達1500108個/g，在嚴重

3、污染的水中可達107個/ml。人的頭皮上有140萬個/cm2，兩手上約有440萬個，1g指甲污垢有38億個，1g糞便可達101000億個。可以說微生物是無處不在，無處不有。 微生物的分布8中等大小的細菌，1000個疊加在一起只有句號那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐敗的牛奶中約有5千萬個細菌。細菌繁殖速度之快是驚人的。大腸桿菌的代時為20分鐘，以此計算，在最佳條件下8小時后，1個細胞可繁殖到200萬上，10小時后可超過10億，微生物的大小與繁殖速度91細菌（原核單細胞生物）細菌按形狀可分為：球菌（0.52m）、桿菌（長15m，寬0.31m）和螺形菌（大小與桿菌相似）。按革蘭氏染色法染色的不同，

4、分為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。微生物的形態結構102霉菌（絲狀真菌的通稱，真核多細胞生物）霉菌是真菌的一部分。在培養基上長成絨毛狀或棉絮狀的菌絲體的真菌統稱為霉菌。霉菌細胞呈狹長的管狀，稱為菌絲。菌絲直徑比細菌、放線菌大，約210m。菌絲分枝連接，交錯集合在一起的總體稱為菌絲體。113酵母菌（真核單細胞生物，屬真菌）酵母菌以單細胞存在，呈圓形、卵圓形和香腸形，比細菌大，細胞長530m，寬15m。酵母菌是重要的工業微生物，用于釀酒，生產單細胞蛋白、B族維生素、核酸、輔酶A、細胞色素C等。一般對人體無害124放線菌（原核單細胞生物）放線菌有生長發育良好的菌絲體，呈分枝狀，菌絲寬為0.21.2m，

5、革蘭氏陽性。菌落常呈幅射狀，因此稱放線菌。135病毒病毒是一類體積十分微小，結構簡單，只含一種核酸（DNA或RNA），沒有產生能量的酶系統，只能在活細胞內以復制方式增殖的非細胞型微生物。病毒是最常見的致病微生物，人類傳染病中大約75%是由病毒引起的。141營養物2pH值：大多數細菌最適pH為6.87.43溫度：一般細菌最適溫度為3040，真菌為2030。細胞生長的溫度極限為-790微生物生長的影響因素 154氧氣：大多數細菌和所有霉菌都是需氧菌，少數細菌是厭氧菌，有些細菌和酵母菌是兼性需氧厭氧的5滲透壓：微生物細胞膜和所有生物膜一樣是一種半透膜，可讓水自由通過，對溶質則有選擇性。6表面張力：表

6、面活性劑可降低表面張力，它是影響細菌生長的因素之一161熱原質（Pyrogen）:熱原質即菌體中的脂多糖，大多是革蘭氏陰性菌產生的。注入人或動物體內能引起發熱反應，故名熱原質。熱原質耐高熱，高壓蒸汽滅菌（121，20）不能使其破壞，加熱（1804h;25045;6501）才使熱原質失去作用。熱原質可通過一般細菌濾器，但沒有揮發性，所以，除去熱原質最好的方法是蒸餾。微生物的產物：172毒素：細菌可產生內、外毒素，與細菌的致病性密切相關。內毒素（Endotoxin）即革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖，其毒性成分為類脂A。菌體死亡崩解后釋放出來。外毒素(Exotoxin)是由革蘭氏陽性菌及少數革蘭氏陰性菌

7、在生長代謝過程中釋放至菌體外的蛋白質。具有抗原性強、毒性強、作用特異性強的突出特點。3.抗生素18人是潔凈室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分鐘向周圍排放1000個以上的含菌粒子，女性為750個以上。穿無菌服時，靜止時的發菌量為10300個/min，一般活動時發菌量為1501000個/min，行走時發菌量為9002500個/min。咳嗽一次發菌量為70700個/min，噴嚏一次為400060000個/min。所以在潔凈室中，人的數量和活動應有特別嚴格的限制。人是最大的污染源？19為什么GMP中要控制微生物？微生物種類繁多，有的對人有益，有的有害，有的無益也無害。但在藥品生產過程中，不

8、可能對環境中的各種微生物加以區別對待，為保證藥品的安全有效，需要對其進行控制。空氣中的微生物多數附著在灰塵上，或以芽孢形式懸浮于空氣中，1m以下者處于懸浮狀態，10m以上者會逐漸沉下來而形成菌塵。所以也要對塵粒進行控制。20大量臨床資料表明，注射劑（尤其是靜脈注射劑）如污染了712m的塵粒，可導致熱原反應、肺動脈炎、微血栓或異物肉芽腫等，嚴重的還會致人死命。而如果污染了細菌，輕則局部紅腫化膿，重則引起全身細菌性感染。21“欣弗事件” 反映了我國一些企業在微生物控制方面存在的嚴重問題；而更為嚴重的是一些企業普遍存在的無菌檢查認識誤區 ！22藥品生產潔凈室（區）空氣潔凈度等級藥品生產質量管理規范（

9、2010年修訂)23水和一些物料的衛生學（法定）標準注：#：包括有乳糖、藥用炭、淀粉、葡萄糖、糊精。%：XX膠囊屬中藥制劑，含胎盤粉，按中國藥典2005版一部規定，還不得檢出沙門菌。*：XX霜屬中藥制劑，用于創傷、燒傷，故要求細菌總數100個/g、霉菌數10個/g。說明：表示每1g或每1ml不得檢出。 NC：表示無規定。可不檢查。24Disinfection殺死物體上病原微生物的方法,并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物殺滅物體上所有微生物的方法。 不存在活菌的意思。 防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法。消毒：滅菌：無菌：防腐：AsepsisSterilizationAntisepsis消毒

10、與滅菌的基本概念25無菌制劑不存在活的微生物的制劑（GMP指南）。非無菌制劑所含活的微生物量符合衛生學標準的制劑（GMP指南）。26熱力滅菌法 常用滅菌方法高溫殺滅細菌焚燒-最徹底的滅菌方法燒灼-直接用火焰滅菌方法干烤-加熱160-180 2小時干熱滅菌法27濕熱滅菌法加壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法121，20-30分鐘煮沸消毒法水煮100 5分鐘(繁殖體)-2小時(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100，15-30分鐘(繁殖體)反復多次流動蒸汽間歇加熱滅菌較低的溫度（61 30分鐘）殺滅致病菌28濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好1、濕熱中細菌菌體

11、蛋白較易凝固2、濕熱的穿透力比干熱大3、濕熱的蒸汽有潛熱29化學消毒滅菌法 利用化學試劑殺滅微生物的方法類別作用機制常用種類酚類蛋白變性，細胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸甲、過氧乙酸、碘酒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞表面活性劑蛋白變性，細胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫常用消毒劑種類30消毒劑常 用 量用途乙醇 70%75%水溶液 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油用于皮膚、器具等消毒供洗手用消毒異丙醇75%水溶液用于皮膚、器具等消毒甲醛37%40%甲醛液89ml，再加入45g高錳酸鉀每m3熏蒸量，密閉1224h。刺激性強戊二醛2%水溶液

12、用于空氣、器具等消毒。廣譜、高效、低毒，可殺芽孢和病毒。刺激性較輕。常用消毒劑用量及用途31 新潔爾滅（苯扎溴銨）0.1%水溶液用于皮膚、粘膜、器具等消毒，有清潔和消毒雙重功效。抗菌譜較窄。 杜滅芬（消毒寧）0.05%0.1%水溶液用于皮膚、器具等消毒 過氧乙酸 0.2%0.5%水溶液 新配0.5%水溶液 1g/m3用于器具等消毒抗菌譜廣，可用于皮膚消毒殺滅某些病毒熏蒸，但性質不穩定 乳酸 0.331mol/L 11.5ml/m3熏蒸或與等量苯酚合用熏蒸噴霧，用于空氣消毒，有強殺菌作用熏蒸，密閉12h以上 麝香草酚5%麝香草酚溶于50%乙醇噴灑墻面、地面，殺霉菌32消毒劑使用注意 長期使用同一

13、種消毒劑，往往會使細菌產生耐藥性，達不到應有的效果所以，在實際生產使用中， 應定期更換不同的消毒劑。 33輻射有兩種類型：一種是電磁波輻射，如紫外線、紅外線、微波；一種是電離輻射，如可引起被照射物電離的X射線、射線。輻射滅菌法34輻射滅菌法紫外線 紫外光波長在136390nm之間，其中260nm左右能破壞核酸，殺菌作用最強。紫外線消毒的效果與光源的功率、光源與被照射物的距離、照射時間、溫度和濕度等因素有關。紫外燈的輸出功率隨使用時間增加而降低。國產紫外燈的平均壽命一般為2000h，超過平均壽命時必須更換。紫外線的穿透力很弱，不能穿透一般包裝材料，如玻璃、塑料薄膜、紙等。35紅外線 通過加熱碳化

14、硅板產生的輻射熱能，由空氣傳導加熱滅菌。如紅外線烤箱，溫度可達180左右。熱效應特點是由表及里。微波 微波滅菌主要是因其熱效應。微波加熱升溫快，溫度高且均勻，殺菌作用強。熱效應特點是由里及表。不同性質的物品吸收微波的能力不同，其熱效應和消毒效果也不同。3660Co滅菌 放射性同位素60Co（或137Cs）衰變時可放射出射線，射線的能量高、穿透力強，可使細胞內各種活性物質發生化學變化，從而使細菌損傷或死亡。經60Co輻射滅菌的物品溫度升高很少，一般僅約5，故又稱“冷滅菌”。37濾過除菌法 用物理阻留的方法將液體或空氣中的 細菌除去,以達到除菌目的。濾菌器含有微細小孔0.22微米,只允許液體或氣體

15、通過,而大于孔徑的細菌等顆粒不能通過 。適用范圍血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌 38濾菌過程39臭氧是一種高效廣譜殺菌劑，對細菌、病毒、霉菌、芽孢、真菌和微生物等都具有極強的殺滅力。臭氧的殺菌能力比紫外線高20%，且在空氣中自行擴散，殺菌無死角，在水中的殺菌速度比氯快600倍。它滅活病毒機理是通過直接破壞其RNA或DNA物質來完成的，而殺滅細菌、霉菌類微生物，則是臭氧首先作用于細胞核，繼而破壞膜內組織，直至殺死。由于臭氧最終還原為氧氣，所以它對人體和環境沒有任何副作用，沒有二次污染。它不但對大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等有消毒能力，而且對霉菌也很有效。臭氧滅菌40 GMP所制定的條款主要是針對

16、消滅任何藥品生產中的隱患，這種隱患是無法靠對成品檢驗完全預防的。這里指的隱患基本上有兩個方面：即生產過程中的交叉污染和混藥差錯 進入潔凈室(區)的空氣必須凈化，并根據生產工藝要求劃分空氣潔凈級別。潔凈室(區)內空氣的微生物數和塵粒數應定期監測，監測結果應記錄存檔。GMP相關預防微生物污染措施41 潔凈室(區)的窗戶、天棚及進入室內的管道、風口、燈具與墻壁或天棚的連接部位均應密封。 潔凈室(區)內安裝的水池、地漏不得對藥品產生污染。 不同空氣潔凈度級別的潔凈室(區)之間的人員及物料出入，應有防止交叉污染的措施。 廠房必要時應有防塵及捕塵設施。GMP相關預防微生物污染措施42與藥品直接接觸的設備表面應光潔、平整、易清洗或消毒、耐腐蝕，不與藥品發生化學變化或吸附藥品。設備所用的潤滑劑、冷卻劑等不得對藥品或容器造成污染。潔凈工作服的質地應光滑、不產生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質