1、高效液相色譜儀的使用及運行性能測試實驗目的. 了解高效液相色譜儀的基本原理和結構。？.掌握高效液相色譜儀的基本操作方法。.掌握測試高效液相色譜儀運行性能的指標和方法，驗證各部件及整機的性能。實驗器材？高效液相色譜儀，LC-ATvp高壓泵、SCL-10Avp程序控制器、SPD-M10Avp 二極管陣列檢測器、CTO-10Asvp 溫度控制器。Shim-packVP- ODS C18 150別析柱、20川進樣器、AS3210型超聲波發生器。無水甲醇和雙蒸水各500ml （脫氣處理）、蔡、咖啡因（均為色譜純或分析純）。實驗原理高效液相色譜法是一種現代液相色譜法，其基本方法是用高壓輸液泵將流動相泵入裝

2、有填充劑的色 譜柱，注入的供試品被流動相帶入柱內進行分離后，各成分先后進入檢測器，用記錄儀或數據處理裝置 記錄色譜圖并進行數據處理，得到測定結果。由于應用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動相，本 法具有分離性能高、分析速度快的特點。描述高效液相色譜儀由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和色譜數據處理系統組成。LC-2010和Agilent1100 型為單泵型，適于單一流動相的洗脫；LC-10Avp 型為雙泵型高效液相色譜儀，適于程序洗脫。單泵型高效液相色譜儀的結構示意見圖9-1L壓力般曲II怖器自朝就編5實驗步驟？（一）高效液相色譜儀的基本操作步驟（以島津 LC-10A為例）.依照順序開機，自檢

3、完畢后進入操作模板；.設定洗脫程序、檢測器的條件及測定報告；.完成實驗過程，打印試驗結果，依照順序關機。（二）性能測試高效液相色譜儀的性能檢查分為單個部件的驗證和整機驗證。驗證時一般先驗證 ,、柱溫箱、自動進樣器的性能，接著是檢測器的性能，最后是整機的性能驗證。驗證 |目的是檢查并確認高效液相色譜儀運行性能是否符合要求。.驗證標準按照中華人民共和國國家計量檢定規程，高效液相色譜儀各驗證部件的驗證項目的 合格標準見表9-1。表9-1高效液相色譜儀各驗證部件的驗證項目的合格標準驗證部件驗證項目合格標準流量設定值誤差Ss輸液泵流量穩定性誤差SR柱溫箱設定值誤差ATs 2C柱溫箱rc2%2X +0AU

4、1避的甲酉!溶液）5XRSD0%SS、流量穩定性誤差SR的檢定柱溫箱控溫穩定性Tc自動進樣器進樣量準確度誤差基線噪聲檢測器最小檢測濃度基線漂移整機性能定性測量重復性誤差.驗證步驟（1）輸液泵泵流量設定值誤差將表9-2流量、次數、收集時間表流量設定值（mL/min ）測量次數3 3 3流動相收集時間（min ） 10 55區=卬.一艮)井，100臀(1).式在3sl流量設定值誤差();也 流量設定值(mL垃小)；S.流量穩定性誤差(%); F：同一組測量值的算術平均值區.miniEim；同一組測量中流量最大值GnL. mirT”加；同一組測量中流量最小值(mL. min L) F F為流量實測值

5、(通mi-%其值由下式計臬 F=(MT*(3).其軋 帖；容量瓶+流動相的重量(g)i Wn容量瓶的重量(g)*jt：實驗溫度下流動相的密度(盛5”卜h收集流動相的時間(ininh(2)柱溫箱拄箱溫度設定值誤爰工和拄溫穩定性工的檢定+，將數字溫度計探頭固定前璇箱內，選擇35c和行C進行檢定，按儀器說 明節操作，通電升溫，待溫度稔定后，記下溫度計讀數并開立凱1時，以后每隔 10血口記錄一次讀數，共計7次，求出平均值1平均值與設定值之差為7 次堞數中最大值與最小值之差為控溫穩定性Tc，結|工_ . -中?(3)自動進樣器進樣量準確度誤差的檢定取進樣瓶裝入1ml水，用天平精密稱定其重量，然后置于自動

6、進樣器上讓其進樣 10次，每次50M。進樣完成后再精密稱定其重量，由重量差計算進樣量準確度，結果 填入數據記錄與處理的表16-5中。(4)檢測器的檢定的蔡/甲醇溶液進樣20 M,記錄色譜圖，由色譜峰峰高和基線噪聲峰峰高算按照下列公式計最小檢測濃度CL。CL=(2X NdX C)/Hmm ；式中：CL:最小檢測濃度，；Nd:基線噪聲峰峰高，C:標準溶液濃度，；H:標準溶液峰峰高,mm o實驗結果填入數據記錄與處理的表 16-6中。(5)整機性能的檢定C數據記錄與處理將上述的實驗數據記錄于下列各表，并進行相應的數據處理，得出檢定結論(1)輸液泵泵流量設定值誤差 SS、流量穩定性誤差SR的檢定表9-

7、3輸液泵泵流量設定值誤差SS、流量穩定性誤差SR的檢定結果儀型號：泵型號：流動相：色譜柱：鑒定日期：檢定人：復核人：Fs1次 2次 3次 1次 2次 3次 1次 2次 3次W1W2tTpTFm=(W2- W1)/ p T tSS= (Fm - FS)/FS 乂 100%平均SSF=(Fm1+Fm2+Fm3)/3FmaxFminSR= (Fmax Fmin)/F x 100%此項檢定結論:(2)柱溫箱柱箱溫度設定值誤差 ATS和控溫穩定性TC的檢定表9-4柱溫箱柱箱溫度設定值誤差 ATS和控溫穩定性TC的檢定結果儀型號：柱溫箱型號：數字溫度儀型號：T 設定35 C 45 C時間讀數時間讀數穩定時

8、第1次第2次第3次第4次第5次第6次第7次T平均T最大T最小A Ts=T均-T設定Tc =T最大-T最小此項檢定結論：(3)自動進樣量準確度誤差的檢定表9-5自動進樣量準確度誤差的檢定結果液相色譜儀型號:自動進樣器型號:檢定溫度:進樣后進樣瓶加水的總重水的密度P進樣量準確度誤(g)W2(g)(g/ml)差(%)進樣量準確度誤差=(W1-W2)- (50X10X 10-3X p)/ (50X 10Xl0-3Xp) X100%此項檢定結論：(4)檢測器的檢定表9-6檢測器的檢定結果液相色譜儀型號：檢測器型號：色譜柱：流動相：流速：蔡甲醇標準溶液濃度C:配制人：配制日期：基線噪聲Nd基線漂移H最小檢測濃度CL最小檢測濃度的計算：CL=(2 X NdX C)/H此項檢定結論：(5)高效液相色譜儀整機性能的檢定表9-7整機性能的檢定結果液相色譜儀型號：檢測器型號：色譜柱：檢測波長： nm流動相:流速：標準溶液類型：濃度：配