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文檔簡介

1、液相色譜基礎知識Waters LC School 培訓教材蒸餾離心電泳過濾超濾色譜常見的分離方式色譜法的分類HPLC分離的機理典型的儀器配置液相色譜的應用（一）“分析型液相色譜”定性及定量分析靈敏度的要求樣品的復雜性樣品量的要求精度及準確度的要求容易使用液相色譜的應用（二）“制備型液相色譜”分離及純化化合物的穩(wěn)定性樣品的復雜性制備量的要求純度的要求，及純度的鑒定方法的安全性開發(fā)液相色譜方法問題什么樣的分離結果是好的?分辨率?什么是色譜的分辨率？分辨率的公式：影響分辨率的因素：K，a，N分辨率的方程 k 是容量因子，表達了樣品與柱填料的作用強弱。 a 是選擇性系數(shù)，描述兩化合物分離的好壞程度。是

2、化學因素。 N 是理論塔板數(shù)，描述色譜峰的譜帶展寬程度。色譜柱的柱效 N理論塔板數(shù)計算公式：Ws 方法Wtan16切線法Wh5.54半峰高W3s9 3sW4s16 4sW5s25 5sInjectInject用“切線”法計算柱效 不好的色譜柱的柱效反而比好色譜柱的要高，因為其拖尾部分測不出來Good ColumnBad ColumnInjectInject用“5”法計算柱效提高柱效的方法色譜柱本身減小填料的顆粒度找到最佳的流速(根據(jù)不同內徑)合適的溫度降低溶劑的粘度增加柱長其他影響柱效的因素柱外效應 連接管路 進樣器、檢測器進樣體積進樣量容量因子 k改變k值的方法調節(jié)流動相的極性、pH、離子強度等梯度淋洗與峰高的關系與R的關系選擇性系數(shù) a定義 a =1 時兩組分分不開，改變a的途徑 改變固定相 改變流動相 改變溫度 改變樣品的本身性質a ，k，N如何控制分辨率?液相色譜的檢測模式靈敏度、選擇性、及適應能力色譜條件的優(yōu)化開發(fā)液相色譜方法分辨率是色譜分離中主要考慮的因素在開發(fā)色譜方法時，有很多因素是很重要的。除分辨率之

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