1、選修3：專題2 細胞工程動物細胞融合與單克隆抗體 生物種間雜交想像圖 已成功的動物細胞融合實例有很多，如人小鼠、人兔、人雞、鼠兔、雞鼠等上百種融合細胞。甚至已成功完成了酵母菌雞 、人胡蘿卜 等細胞的融合。想了解更多信息，可通過網絡、電視、雜志等途徑關注細胞融合和單克隆抗體的最新信息。有夢想，才會有創造！一、動物細胞融合請同學們閱讀課本P52動物融合1.概念： 動物細胞融合（cell fusion）也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程。 融合和形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳物質的單核細胞，稱為雜交細胞。2、原理：細胞膜的流動性一、動物細胞融合3、動物細胞融合過程 為什么滅

2、活的病毒能作誘導劑？滅活喪失感染性保留融合活性 二.動物細胞融合誘導融合的方法物理法：化學法：生物法：電激、離心、振動聚乙二醇（PEG)滅活的病毒4.意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。5.應用：最重要的用途是制備單克隆抗體總結：比較植物體細胞雜交和動物細胞融合比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原 理融合前處理誘 導 方 法用 途細胞膜的流動性、植物細胞的全能性細胞膜的流動性用纖維素酶、果膠酶去壁用胰蛋白酶使細胞分散物理、化學方法物理、化學、生物方法獲得部分或完整植株主要用于制備單克隆抗體二、單克隆抗體 什么是單克隆抗體單：克隆：抗體：單個細胞

3、？無性繁殖抗原 抗體特異性結合 抗體是由何種細胞產生的？2 . 抗體是如何產生的？單克隆抗體抗原 動物體內刺激漿細胞 抗體抗體不純篩選單一漿細胞不能增殖產生大量抗體產量少、純度低、特異性差單克隆抗體4、傳統制備抗體的缺點是？3、傳統制備抗體的方法是？如何獲得化學性質單一、特異性強的抗體？單克隆抗體問題討論提示：1 . 什么樣的細胞可以產生抗體？2 . 什么樣的細胞可以無限增殖？ 設計方案：一個B淋巴細胞:只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞:能無限增殖雜交瘤細胞單克隆抗體既能無限增值又能產生特異性抗體特點雜交 細胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞經免疫的小鼠提取雜交瘤細胞第一次篩選用特定

4、的選擇性培養基第二次篩選能產生特定抗體、培養條件下能無限增殖的雜交瘤細胞體外培養注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體B BB B瘤 瘤瘤 瘤細胞融合后培養液中有幾種細胞？篩選雜種細胞 已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加PEG促融，獲得雜種細胞。單克隆抗體思考：單克隆抗體思考：1. 小鼠骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合？2. 制備過程中應用哪些細胞工程技術手段？細胞的同源性越近，融合形成的雜種細胞越易成活細胞融合技術、細胞培養技術單克隆抗體 在基礎理論

5、研究中具有重要意義 在疾病診斷、治療和預防方面，具有特異性強、靈敏度高等優越性。 生物導彈（作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”治療腫瘤） 單克隆抗體的應用動物特異性免疫分離B淋巴細胞（B）；找到骨髓瘤細胞（G）。注意B淋巴細胞是一個系列。（B1,B2,B3,-Bn）細胞融合三種融合方式:（BB;BG;GG）第一次篩選：在“選擇培養基培養”上培養篩選雜交瘤細胞（只有BG雜交瘤細胞存活。但BG雜交瘤細胞也是一個系列：如B1G,B2G-BnG。而BB,GG在此培養基上不能存活。）第二次篩選：在“多孔培養板上”培養雜交瘤細胞系列 ，每孔只放一個雜交瘤細胞。“克隆化培養”每個雜交瘤細胞，并進行“單一抗體檢測”，“檢測陽性”的孔內即是所需要的雜交瘤細胞。選擇所需要的雜交瘤克隆細胞群，體外培養或注射到小鼠腹腔內增殖。提取單克隆抗體。單抗的制備過程要點： 下圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌的實驗方案3、圖中B為_過程，常用_作為誘導劑，該細胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。1、該實驗方案的目的是_2、A是從小鼠的脾臟中取得_,該細胞能夠產生_ 4、C過程指細