1、有機氯類農藥殘留量測定法標準操作規程編制/修訂人：部門審核人：分管負責人：質量審核人：企業負責人：實施日期：日期：年月日日期：年月日日期：年_月_一日日期：年_月_一日日期：年_月_一日年月日文件類別：管理標準技術標準受控狀態生產部采購部商務部質量部1 物資部存檔1 V工作標準本文件由質量部頒布，根據需要分發于以下部門:行政人事部工程部計財部【目的】規范有機氯類農藥殘留量測定法檢驗的程序和方法，確保有機氯類農藥殘留量測定法檢驗結果準確可靠。【適用范圍】適用于本公司有機氯類農藥殘留量測定法的檢驗。【職責】1 QC 檢驗人員負責起草，按審批后的標準執行。2 質量部經理、質量負責人負責審核、監督執行

2、。3 總經理負責審批。【內容】1 簡述有機氯類農藥是農藥史中使用量最大，使用歷史最長的一類農藥，其化學性質穩定，脂溶性強，殘效期長（可達3050年之久），易在脂肪組織中蓄積，造成慢性中毒，嚴重危及人體健康。本法通過提取、凈化和富集等步驟制備供試品溶液，采用氣相色譜法，電子捕獲檢測器測定。2 儀器與用具2.1 氣相色譜儀，帶有63Ni-ECD電子捕獲檢測器，載氣為高純氮，必須安裝脫氧管。2.2 超聲波處理器。2.3 離心機。2.4 旋轉蒸發儀。2.5 色譜柱：SE-54或DB-1701彈性石英毛細管柱（30mX0.32mm 0.25 m）2.6 具塞刻度離心管（10ml）,刻度濃縮瓶，具塞錐形瓶

3、（100ml）,移液管等。3 試藥與試液3.1 丙酮、石油醴（6090C）和二氯甲烷均為分析純，且全部經過全玻璃蒸儲裝置重蒸餾，經氣相色譜法確認，符合農殘檢測的要求。3.2 無水硫酸鈉和氯化鈉均為分析純，硫酸為優級純。3.3 農藥對照品：六六六（BHC 包括a-BHC, B-BHC, 丫-BHC和6-BHC四種異構體,滴滴涕（DDT）包括pp-DDE, pp-DDD , op-DDT和pp-DDT四種異構體及五氯硝基苯（PCNB ,由中國計量科學研究院提供標示含量 （濃度）的農藥標準品，也可采用國 際認可的農藥標準品自行配制。4 9 種有機氯類農藥殘留量測定法4.1 色譜條件與系統適用性試驗以

4、 （ 14%-氰丙基-苯基） 甲基聚硅氧烷或（ 5%苯基）甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細管柱（30mX0.32mmX0.25um）6,3 Ni-ECD 電子捕獲檢測器。 進樣口溫度230，檢測器溫度300，不分流進樣。程序升溫：初始溫度100，每分鐘10升至220，再以每分鐘8升至250，保持10 分鐘。 按上述條件操作，理論板數以a -BHC峰計算應不低于1 X 10 6,兩個相鄰色譜峰白分離度應大于 1.5。4.2 操作方法4.2.1 對照品貯備液的制備 精密稱取六六六（BHC） （a-BHC 0 -BHC 丫-BHC, 6 -BH。、 滴滴涕（DDT）P, P-DDE, P, P-D

5、DD, O, P-DDT, P, P-DDT及五氯硝基苯 （PCNB/藥對照品溶液適量，用石油醴（6090C）分別制成每1ml約含45用 的溶液， 即得。4.2.2 混合對照品儲備液的制備精密量取上述各對照品貯備液 0.5ml,置10mI量瓶中，用石油醚60 90 ）稀釋至刻度，搖勻，即得。4.2.3 混合對照品溶液的制備精密量取上述混合對照品貯備液，用石油醚（6090C）制成每 1L 分別含 0ug, 1 g, 5g, 10Ng, 50仙 g, 100 仙 g 和 250 仙 g 的溶 液，即得。4.2.4 供試品溶液制備方法1（藥材或飲片）取供試品，粉碎成粉末（過三號篩），取約2 g,精密

6、稱定， 置100 ml具塞錐形瓶中，加水20 ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml, 稱定重量，超聲處理30 分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6 g,精密加二氯甲烷30 ml,稱定重量，超聲處理15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置（使分層），將有機相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 ml 具塞錐形瓶中，放置4小時。精密量取35ml,于40c水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油 醚 （6090 ） 如前反復操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（6090 ） 溶解并轉移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醴（6090C）精密稀釋至5ml,小心加入硫酸1 ml,振搖1

7、分鐘，離心（3000轉/分鐘）10分鐘，精密量取上精液2ml,置具刻度濃縮瓶中，連接旋 轉蒸發器，40c下（或用氮氣）將溶液濃縮至適量，精密稀釋至 1 ml,即得。同法制備空 白樣品。4.2.5 方法2（制劑）取供試品，研成細粉（蜜丸切碎，液體直接量取），精密稱取 適量（相當于藥材2g）,以下按方法1,制備供試品溶液。4.2.6 測定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對應濃度的混合對照品溶液各1仙1,注入氣象色譜儀，按外標法計算供試品中9種有機氯農藥殘留量。5 22種有機氯類農藥殘留量測定法5.1 色譜條件與系統適用性試驗 分析柱：以50%苯基50%C甲基聚硅氧烷為固定液 的彈性石英毛細管柱（3

8、0mX0.25mmX0.25um）O僉柱：以100萬甲基聚硅氧烷為固定液的 彈性石英毛細管柱（30mX0.25mmX0.25um） 63 Ni-ECD電子捕獲檢測器。進樣口溫度240 C ,檢測器溫度300 C,不分流進樣，流速為恒壓模式（初始流速為 1.3ml/min ）。 程序升溫：初始70 C,保持1分鐘，每分鐘10c升至180C,保持5分鐘，再以每分鐘 5c升至220C,最后以每分鐘100c升至280C,保持8分鐘。理論板數以a -BHC計算應 不低于1 X 10 6,兩個相鄰色譜峰的分離度應大于1.5。5.2 操作方法5.2.1 對照品儲備液的制備 精密稱取表1中農藥對照品適量，用異

9、辛烷分別制如表 1中濃度，即得。5.2.2 混合對照品儲備液的制備 精密量上述對照品貯備溶液各 1ml,置100ml量瓶 中，用異辛烷稀釋至刻度，搖勻，即得。5.2.3 混合對照品溶液的制備分別精密量取上述對照品備貯溶液，用異辛烷制成每1L分別含10 pg、20 pg、50 pg、100 pg、200仙g、500仙g的溶液，即得（其中B - 六六六，異狄氏劑、P, P-滴滴滴、O, P-滴滴涕每1L分別含20/、40/、100/、 200 pg、400仙 g、1000 p g）05.2.4 供試品溶液制備取供試品，粉碎成粉末（過三號篩），取約1.5 g ,精密稱定，置于50 ml聚苯乙烯具塞離

10、心管中，加水 10 ml,混勻，放置2小時，精密加入乙月青15ml,劇烈振搖提取1分鐘，再加人預先稱好的無水硫酸鎂4g與氯化鈉1 g的混合粉末，再次劇烈振搖1 分鐘后，離心(4000 轉 / 分鐘) 1 分鐘。精密吸取上清液10ml， 40減壓濃縮至近干，用環己烷- 乙酸乙酯(1:1) 混合溶液分次轉移至10ml 量瓶中，加環己烷 - 乙酸乙酯(1 :1) 混合溶液至刻度，搖勻，轉移至預先加入1g 無水硫酸鈉的離心管中，振搖， 放置 1 小時 ， 離心 (必要時濾過) ， 取上清液5ml 過凝膠滲透色譜柱( 400mmX25mm , 內裝 BIO-Beads S-X3 填料；以環己烷- 乙酸乙

11、酯(1 : 1 ) 混合溶液為流動相；流速為每分鐘5.0ml) 凈化， 收集 18? 30 分鐘的洗脫液， 于 40水浴減壓濃縮至近干，加少 量 正 己 烷 替 換 兩 次 ， 加 正 己 烷 1ml 使 溶 解 ， 轉 移 至 弗 羅 里 硅 土 固 相 萃 取 小 柱 1000mg/6ml, 用正己烷-丙酮( 95 : 5) 混合溶液10ml 和正己烷10ml 預洗 上 ，殘渣用正己烷洗滌3次，每次1ml,洗液轉移至同一弗羅里硅土固相萃取小柱上，再用正己烷 -丙 酮 ( 95： 5) 混合溶液10ml 洗脫，收集全部洗脫液, 置氮吹儀上吹至近干，加異辛烷定容至1ml,渦旋使溶解，即得。5.

12、2.5 測定法分別精密吸取供試品溶液和混合對照品溶液各1ul ，注入氣相色譜儀，按外標標準曲線法計算供試品中22種有機氯農藥殘留量。5.2.6 限度 除另有規定外，每1kg中藥材或飲片中含總六六六(a- BHC,B -BHC , 丫-BHC, 6 - BH和)不得過 0.2mg;總滴滴涕(P, P-DDE, P, P-DDD, O, P-DDT, P, P-DDT之 和)不得過 0. 2mg ；五氟硝基苯(Quintozene)不得過 0.1m g;六氯苯 ( Hexachlorobenzene) 不得過 0,1mg; 七氯( Heptachlor) 、順式環氧七氯(HeptachI orex

13、o-epoxide)和反式環氧七氯(Heptachlor*endo-epoxide) 之和不得過 0.05mg;艾氏劑(AIdrin) 和狄氏劑(Dieldrin)之和不得過0. 05mg;異狄氏劑(Endrin)不得過0.05mg;順式氯丹Chlordane) 、反式氯丹(trans-Chlordane) 和氧化氯丹(oxy-Chlordane) 之和不得過 0.05mg; a-硫丹(a-Endosulfan)伊硫丹(伊Endosulfan) 和硫丹 硫酸鹽 ( Endosulfan sulfate) 之和不得過3mg。【 附注】(1) 當供試品中有農藥檢出時, 可在驗證柱中確認檢出的結果，

14、再進行定量。必要時 ,可用氣相色譜一質譜法進行確證。(2) 加樣回收率應在70%? 120%之間表1 22種有機氯類農藥對照品貯備液濃度、相對保留時間及檢出限參考值序號中文名英文名對照品貯備液(ug/ml)相對保留時間（分析柱）檢出限（mg/kg）12345678910111213141516171819202122六氯苯Hexachlorobenzene1000. 5740. 001a- 六六六a- B H C1000. 6010. 004五硝基苯Quintozene1000. 6450. 007T-六六六y -B H C1000. 6670. 003，六六六,B H C2000. 7050

15、.七 MHeptachlor1000. 7130. 007A六六六8 - BHC1000. 750艾 氏 劑Aldrin1000. 7600. 006氧化氯丹Oxy-Chlordane1000.8160. 007順式環氧七氟 Heptachlor-exo-epoxide1000. 833反式環氧七氟 Heptachlor-endo-epoxide 1000. 844反式氯丹trans-Chlordane1000. 8540. 005順式氯丹cis-Chlordane1000. 8670, 008a-琉丹a-Endosulfan1000. 8720.01p,p /滴滴伊p,p/-DDE1000. 8920狄 氏 劑Dieldrin1000. 9010. 005異 狄氏劑Endrin2000. 9320. 009o,p /滴滴涕o , p / f-DDT2000.p,p /滴滴滴p , p / f-DDD2000.3-硫丹的Endosulfan1000. 9560p, /p -滴滴涕 p , p/-DDT1000. 9700.硫丹硫酸Endosulfan sulfate1001.0000. 0040