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文檔簡(jiǎn)介
1、放射化學(xué)在生物技術(shù)中的應(yīng)用2013放射化學(xué)張龍飛 王渝目錄放射性簡(jiǎn)介A放射性示蹤技術(shù)B放射性免疫分析法C放射性簡(jiǎn)介原子核衰變不穩(wěn)定的原子核不斷地自發(fā)地產(chǎn)生原子核結(jié)構(gòu)的改變,使自己轉(zhuǎn)變成另一種核素,這種過程稱核衰變。不穩(wěn)定核自發(fā)放射各種射線的現(xiàn)象,稱為放射性。核衰變類型是根據(jù)其發(fā)射核射線種類進(jìn)行命名的。如最常見的有:衰變、衰變和衰變。反應(yīng)能力較弱,但有較強(qiáng)的穿透能力。因此比較適用于生物檢測(cè)。EYYm放射性示蹤法放射性示蹤法(radioactive tracer method) 由于放射性核素不斷發(fā)出輻射,無論它運(yùn)動(dòng)到哪里,都很容易用探測(cè)器探知它的下落,因此可以用作示蹤物來辨別其他物質(zhì)的運(yùn)動(dòng)情況和
2、變化規(guī)律。這種放射性示蹤物稱為示蹤原子或標(biāo)記原子。14C、3H、32P、35S和125I等作示蹤原子,并且要把它們做成與體內(nèi)物質(zhì)相應(yīng)的有機(jī)化合物而開展示蹤研究。 凡是分子(例如基因分子)中某一原子或某些原子被放射性核素或穩(wěn)定核素所取代,而成為一類易被識(shí)別的化合物,則稱之為標(biāo)記化合物。 例如:P是通過S的中子撞擊而得:S + n P + p它的衰變是經(jīng)由衰變而成。它通常用于生物化學(xué)上,研究蛋白質(zhì)磷酸化激酶。P在P之間的中子撞擊中相對(duì)產(chǎn)率較低。這其實(shí)也是一種發(fā)射,其半衰期為25.4天。其所發(fā)射的電子能量較低,因而可以擁有更高的辨識(shí)率,例如DNA定序。DNA探針是利用同位素、生物素等標(biāo)記的特定DNA
3、片斷,該片斷可大至寄生蟲基因組DNA,小至20個(gè)堿基。原理:當(dāng)DNA探針與待測(cè)的非標(biāo)記單鏈DNA(或RNA)按堿基順序互補(bǔ)結(jié)合時(shí),以氫健將2條單鏈連接而形成標(biāo)記DNA-DNA(或標(biāo)記DNA-RNA)的雙鏈雜交分子。將未配對(duì)結(jié)合的核苷酸溶解后用檢測(cè)系統(tǒng)(放射自顯影或酶檢測(cè)等)檢測(cè)雜交反應(yīng)結(jié)果。DNA分子探針ZFY基因PCR產(chǎn)物純化后直接核酸序列分析的放射自顯影圖這類探針多克隆在質(zhì)粒載體中,可以無限繁殖,取之不盡,制備方法簡(jiǎn)便。DNA探針不易降解(相對(duì)RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。DNA探針的標(biāo)記方法較成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移法、隨機(jī)引物法、PCR標(biāo)記法等,能用于同位素和非同位素標(biāo)記。DNA分子探針放射性免疫分析法放射性免疫分析法是利用同位素標(biāo)記的與未標(biāo)記的抗原同抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制反應(yīng)的放射性同位素體外微量分析方法。1960年美國化學(xué)家R.S.耶洛和S.A.貝爾森提出此法,耶洛因此于1977年獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。基本原理:是根據(jù)被測(cè)定的抗原物質(zhì)和其標(biāo)記物(標(biāo)記抗原)同特異性抗體之間存在著競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合。主要特點(diǎn):標(biāo)記的是抗原。其原理:未知抗原Ag+標(biāo)記抗原Ag +已知定量抗體Ab標(biāo)記抗原與抗體復(fù)合物AgAb+未知抗原與抗體
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