1、南方醫科丈拷生物化學實驗報告姓名：吳瑞學號：3120016004專業年級：2012級臨床醫學（婦幼保健）組另1：U 'r第四實驗室生物化學與分子生物學實驗教學中心實驗室規則1. 實驗前應認真預習實驗指導，明確實驗目的和要求，寫出預實驗報告。2. 進入實驗室必須穿白大衣。嚴格遵守實驗課紀律，不得無故遲到或早退。不得高聲說話。嚴禁拿實驗器具開玩笑。實驗室內禁止吸煙、用餐。3. 嚴格按操作規程進行實驗。實驗過程中自己不能解決或決定的問題，切 勿盲目處理，應及時請教指導老師。4嚴格按操作規程使用儀器，凡不熟悉操作方法的儀器不得隨意動用，對 貴重的精密儀器必須先熟知使用方法， 才能開始使用；儀器

2、發生故障，應立即關 閉電源并報告老師，不得擅自拆修。5取用試劑時必須“隨開隨蓋”，“蓋隨瓶走”，即用畢立即蓋好放回原處,切忌“張冠李戴”，避免污染。6. 愛護公物，節約水、電、試劑，遵守損壞儀器報告、登記、賠償制度。7. 注意水、電、試劑的使用安全。使用易燃易爆物品時應遠離火源。用試管加熱時，管口不準對人。嚴防強酸強堿及有毒物質吸入口內或濺到別人身上。任何時候不得將強酸、強堿、高溫、有毒物質拋灑在實驗臺上。8廢紙及其它固體廢物嚴禁倒入水槽，應倒到垃圾桶內。廢棄液體如為強 酸強堿，必須事先用水稀釋，方可倒入水槽內，并放水沖走。9.以實事求是的科學態度如實記錄實驗結果，仔細分析，做出客觀結論。 實

3、驗失敗，須認真查找原因，而不能任意涂改實驗結果。實驗完畢，認真書寫實 驗報告，按時上交。10.實驗完畢，個人應將試劑、儀器器材擺放整齊，用過的玻璃器皿應刷洗干凈歸置好，方可離開實驗室。值日生則要認真負責整個實驗室的清潔和整理, 保持實驗整潔衛生。離開實驗室前檢查電源、水源和門窗的安全等，并嚴格執行 值日生登記制度。二、實驗報告的基本要求實驗報告通過分析總結實驗的結果和問題， 加深對有關理論和技術的理解與掌握，提高分析、綜合、概括問題的能力，同時也是學習撰寫研究論文的過程。1. 實驗報告應該在專用的生化實驗報告本上、按上述格式要求書寫。2. 實驗報告的前三部分實驗原理、實驗材料(包括實驗樣品、主

4、要試劑、主要儀器與器材)、實驗步驟(包括實驗流程與操作步驟)要求在實驗課前預習后撰寫，作為實驗預習報告的內容。預習時也要考慮并設計好相應實驗記錄的表格。3. 每項內容的基本要求(1) 實驗原理：簡明扼要地寫出實驗的原理，涉及化學反應時用化學反應方程式表示。(2) 實驗材料：應包括各種來源的生物樣品及試劑和主要儀器。說明化學試劑時要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。試劑要標清所用的濃度。(3) 實驗步驟：描述要簡潔，不能照抄實驗講義，可以采用工藝流程圖的方式或自行設計的表格來表示，但對實驗條件和操作的關鍵環節應寫清楚， 以便他人重復。(4) 實驗記錄：包括主要實驗條件、實驗中觀察到的現象及實驗

5、中的原始數據。(5) 結果(定量實驗包括計算)：應把所得的實驗結果(如觀察現象)和數據進行整理、歸納、分析、對比，盡量用圖表的形式概括實驗的結果，如實驗組與對照組實驗結果的比較表等(有時對實驗結果還可附以必要的說明)。(6) 討論：不應是實驗結果的重述，而是以結果為基礎的邏輯推論。如對定性實驗，在分析實驗結果的基礎上應有中肯的結論。 還可以包括關于實驗方法、操作技術和有關實驗的一些問題， 對實驗異常結果的分析和評論，對于實驗設計的認識、體會和建議，對實驗課的改進意見等。(7) 結論：一般實驗要有結論，結論要簡單扼要，說明本次實驗所獲得的結果。三、實驗報告的評分標準（百分制）1實驗預習報告內容（

6、30 分）實驗學生進入實驗室前應預習實驗，并書寫預習報告。實驗預習報告應包括以下三部分:原理（10分）：要求以自己的語言歸納要點；實驗材料（5分）：包括樣品、試劑及儀器。只列出 主要儀器、試劑（常規材料不列）；實驗方法（15分）：包括流程或路線、操作步驟，要以流程圖、 表格式給出要點，簡明扼要。依據各部分內容是否完整、清楚、簡明等，分以下三個等級給分。優秀合格不合格30252418 分170 分優秀：項目完整，能反映實驗者的加工、整理、提煉。合格：較完整，有一定整理，但不夠精煉。不合格：不完整、缺項，大段文字，完全照抄教材，記流水賬。實驗預習報告不合格者，不允許進行實驗。該實驗應重新預約，待實

7、驗室安排時間后方可進行 實驗。2.實驗記錄內容（20 分）實驗記錄是實驗教學、科學研究的重要環節之一，必須培養嚴謹的科學作風。實驗記錄的主要內容包括以下三方面：主要實驗條件（如材料的來源、質量；試劑的規格、 用量、濃度；實驗時間、操作要點中的技巧、失誤等，以便總結實驗時進行核對和作為查找成敗原:原始實驗數據：設計因的參考依據）：實驗中觀察到的現象（如加入試劑后溶液顏色的變化） 實驗數據表格（注意三線表格式），準確記錄實驗中測得的原始數據。記錄測量值時，要根據儀器的精確度準確記錄有效數字（如吸光值為0.050,不應寫成0.05）,注意有效數字的位數。實驗記錄應在實驗過程中書寫；應該用鋼筆或者圓珠

8、筆記錄，不能用鉛筆。記錄不可擦抹和涂 改，寫錯時可以準確劃去重記。記錄數據時請教師審核并簽名。實驗記錄分以下三個等級給分。優秀合格不合格20171613 分120 分優秀：如實詳細地記錄了實驗條件、實驗中觀察到的現象、結果及實驗中的原始數據（如三次 測定的吸光度值）等；實驗記錄用鋼筆或者圓珠筆記錄，沒有抹擦和涂改跡象。書寫準確，表格規 范（三線表）。有教師的簽字審核。合格：記錄了主要實驗條件，但不詳細、凌亂；實驗中觀察到的現象不細致；原始數據無涂改 跡象，但不規范。有教師的簽字審核。不合格：記錄不完整，有遺漏；原始數據有抹擦和涂改跡象、捏造數據（以0分計）；圖、表格形式錯誤；用鉛筆記錄原始數據

9、；無教師的簽字審核。若記錄的結果有懷疑、遺漏、丟失，必須重做實驗，培養嚴謹的科學作風。3. 結果與討論（45分）（1）數據處理（5分）對實驗中所測得的一系列數值，要選擇合適的處理方法進行整理和分析。數據處理時，要根據 計算公式正確書寫中間計算過程或推導過程及結果，得出最終實驗結果。要注意有效數字的位數、 單位（國際單位制）。經過統計處理的數據要以 X ± SD表示。可分成以下三個等級給分。優秀合格不合格5分4分30分優秀：處理方法合理，中間過程清楚，數據格式單位規范。合格：處理方法較合理，有中間計算過程；數據格式單位較規范。不合格：處理方法不當；無中間過程；有效數字的位數、單位不規范

10、。（2）結果（20分）實驗結果部分應把所觀察到的現象和處理的最終數據進行歸納、分析、比對，以列表法或作圖 法來表示。同時對結果還可附以必要的說明。要注意圖表的規范：表格要有編號、標題；表格中數據要有單位（通常列在每一列頂端的第一 行或每一行左端的第一列）。圖也要有編號、標題，標注在圖的下方；直角坐標圖的縱軸和橫軸要標 出方向、名稱、單位和長度單位；電泳圖譜和層析圖譜等要標明正、負極方向及分離出的區帶、色 帶或色斑的組分或成分。電泳結果還要標記泳道，并在圖題下給出泳道的注釋；要標出分子量標準 的各條帶的大小。并且注意需要結合圖表對結果進行較詳細的解釋說明。可分成以下三個等級給分。優秀合格不合格2

11、0171613 分120 分優秀：實驗結果有歸納、解釋說明，結果準確，格式規范。合格：堆砌實驗現象、數據，解釋說明少。不合格：最終實驗結果錯誤且無解釋說明，圖表、數字不規范。（3）討論（20分）討論應圍繞實驗結果進行，不是實驗結果的重述，而是以實驗結果為基礎的邏輯推論，基本內 容包括：用已有的專業知識理論對實驗結果進行討論，從理論上對實驗結果的各種資料、數據、 現象等進行綜合分析、解釋，說明實驗結果，重點闡述實驗中出現的一般規律與特殊性規律之間的關系；實驗結果提示了哪些新問題，指出結果與結論的理論意義及其大小;對實踐的指導與應用價值；實驗中遇到的問題、差錯和教訓，與預想不一致的原因，有何待解決

12、的方法，提出在今后的實驗中需要注意和改進的地方；實驗目的是否達到。同時能結合查閱的其他文獻等資料進行討論,有獨到的見解。在實驗結果和理論分析的基礎上,經過推理，歸納規律得出結論。結論要嚴謹、精煉，表達要準確，與實驗目的呼應。也分三個等級 給分。優秀合格不合格20171613 分120 分優秀：分析實驗結果的問題與經驗；分析實驗設計的優劣；能提出實驗技術、方法的改進意見;能結合自己查閱的其他資料來討論，有自己獨到的見解；有結論。合格：僅針對實驗結果進行討論，有一定自己的見解。不合格：將討論寫成注意事項分析或回答思考題等，與實驗結果無關。4. 格式與版面（5分）按照實驗報告的書寫格式、版面是否整潔

13、、工整，分三個等級給分。優秀合格不合格5分4分30分優秀：實驗報告字體工整，版面整潔。合格：實驗報告字體較工整，版面較整潔。不合格：實驗報告字體潦草，版面凌亂。5.加分（510分）:以全英文書寫實驗報告視情況加510分。In troducti on to Biochemistry Exp erime ntBiochemistry exp erime nt is a p recli ni cal curriculum of omn i-s pecialties in biomedici ne and an exp erime ntal curriculum for going with bioc

14、hemistry teach ing. Its task is to hel p stude nts to understand and master the basic technical principles and methods in biochemistry, to possessthe abilities of analyzing problems and working out solutions independently. By learning this curriculum, the stude nts should un dersta nd the basic exp

15、erime ntal princip les of spectrophotometry, chromatography, electrophoresis and centrifugeet al., master the basic technical skills commonly used with these principles and possessthe abilities to apply the skills systematically and to op timize the exp erime nt con diti ons. The goal of biochemistr

16、y exp erime nt is to make the stude nts stre ngthe n their gras p of the biochemistry theories and to in tegrate what they have lear ned with scie ntific research and cli ni cal app licati on.There are 9 exp erime nts that rep rese nt most imp orta nt areas of biochemistry in cludi ng characterizati

17、o n of p rote ins and nu cleic acid by electr op horesis and sp ectrosc opic or chromatogra phic an alysis. These exp erime nts are esse ntial for a typ ical on e-semester course and are to be revised and up dated whe n n ecessary. New exp erime nts will be added to this list in the future to cover

18、more topics of biochemistry and to reflect the many advances in biochemistry.Biochemistry Laboratory Rules1. Pre-Laboratory PreparationAll students must prepare BEFORE ARRIVING IN THE LABORATORY . Theexp erime nts are desig ned so that they can be carried owith proper adva nee planning -with in the

19、four-hour laboratory p eriods. It is exp ected that stude nts should have afun dame ntal un dersta nding of the theory and p ractices p erta ining to the exp erimebeforeen teri ng the laboratory to con duct these exp erime nts.should be s activitiesBiochemical exp erime nts ofte n emp loy toxic chem

20、icals . For the health and safety ofall stude nts, the exp erime ntal p rotocols must be studied and the dayplanned in adva nee. If it becomes obvious that a stude nt is ill-prep ared, he or she willnot be p ermitted to con ti nue the exp erime nt.2. Safety Precautions in the Biochemistry Laboratory

21、All INJURIES, no matter how mi nor, should be rep orted to the in structorIMMEDIATELY. If you have any questions regarding the safe handling of any3.biochemical, con sult your in structor.Strictly follow the exp erime ntal p rocedures.Turn to instructors immediately for help once the laboratory inst

22、ruments don' Work.DON T try to fix the breakdown by yourself.Proper compensation for loss because ofyour own fault will be dema nded.4.Dispo sal of Soluti onsIn most cases the soluti ons used duri ng the laboratory can be dis po sed of as directed bylaboratory personnel at the end of the period.

23、 Any volatile organic solvents should bep laced in the hood as directed. Laboratory personnel will the n dis pose of these solve nts.5.Solid trashes in clud ing waste papers are p rohibited to discard into the sink.6.All the glassware should be clea ned immediately after use. And all the reage nt bo

24、ttlesand in strume nts should be pl aced n eatly after use.7.An exp erime nt report should be submitted to the Pro fessor an d/or TAs in time.Laboratory Report1. Although stude nts will work in p airs for all exp erime nts, each stude nt must turn in anin dividual laboratory rep ort, writte n by him

25、self or herself . These rep orts should beclearly writte n in ink, typ ed, or prin ted and be clear and legible. If mistakes are made,n eatly cross them out and en ter the correct ions n earby. Rep orts should be writte n in the“ I ” or STAwe” )a Title Page to the top of the reportthird person (e.g.

26、, do not useand STAPLE the accompanying graphs, tables, and laboratory notebook sheets to theback. If the report is not clearly presented, the instructor may return the reportwithout grad ing it.2. Each laboratory report should consist of:a. Title P ageA title p age for each exp erime nt is required

27、 and should state the title of theexp erime nt, the n ame of the stude nt, the dates of the laboratory p eriods covered, then ames of the laboratory partn ers, and the date that the laboratory report is due.b. ObjectivesStateme nt of the point of the exp erime nt - in no more tha n two senten ces.c.

28、 P roceduresDO NOT recapitulate the laboratory protocol. Write in you OWN words. A clearflowchart of the p rocedures is recomme nded.d. ResultsThis sect ion should summarize your observati ons p rese nted in the form of graphs,calculati ons, tables, etc.e. Discussi onEvaluate your data.Explain what

29、you observed and also why you think the datawere as observed.Do not restate procedures! List possible sites of error.dem on strate your un dersta nding of the theory behi nd the exp erime nt. Support your results (eg:“ Using the lin ear p orti on of the Absorba neeWhenever possiblevs. Concen trati o

30、n graph to calculate the slop e, it was determ ined that.”)(Lonly one p age per exp erime nt for exp erime nts 1 - 6 and four p ages for exp erime nt7-9).3. If any laboratory report is not completed and turned in by the end of the quarter, the studentmaybe receive an IncompIete for the course at the

31、 discretion of the instructors;alternatively a “ zero ” for the missing laboratory report will be recorded and the final gradedeterm ined accordi ngly.實驗名稱(Title ofExp erimetn)血清Alb、丫 -G測定實驗日期(Date ofExp eriment)2013-12-09實驗地點（Lab No.）第四實驗室合作者(P artner)沈倩文吳利楊柳指導老師(Instructor)馮春瓊總分仃 otal Score)90教師簽名

32、(Signature)馮春瓊批改日期（Date）2014-1-10【實驗報告第一部分（預習報告內容）：實驗原理、實驗材料（包括實驗樣品、主要試劑、主要儀器與器材）、實驗步驟（包括實驗流程、操作步驟和注意事項）；評分(滿分 30 分) : XX、實驗原理 不同蛋白質的分子量、溶解度及在一定條件下的帶電的情況都有所不同。利用蛋白質的 這一特性，可以分離純化各種蛋白質。1. 鹽析法。由于血清中各種蛋白質分子的顆粒大小、所帶電荷的多少和親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣。因此調節鹽的濃度可使不同的蛋白質沉淀從而達到分離 的目的。如：血清清蛋白不溶于飽和硫酸銨溶液，而球蛋白不溶于半飽和硫酸銨溶液,

33、 從而將清、球蛋白分離開。2. 脫鹽。用鹽析法分離而得到的蛋白質中含有大量的中性鹽，會妨礙蛋白質的進一步純化。本實驗中我們采用葡聚糖凝膠（G-25）層析法。主要利用的是蛋白質與無機鹽類之 間的分子量的差異。當溶液通過凝膠柱時，溶液中分子直徑大的蛋白質不能進入凝膠顆 粒的網孔從而首先被洗脫出來；而無機鹽分子直徑小，能進入凝膠顆粒網孔中被阻滯而 后洗脫出來。3.純化（離子交換層析）離子交換層析是指流動相中的離子和固定相上的離子進行可逆的交換，利用化合物的電荷性質及電荷量不同進行分離。本實驗采用的DEA巳二乙基氨 基乙基）纖維素是一種陰離子交換劑。溶液中帶負電荷的離子可與其進行交換結合，帶 正電的離

34、子則不能，從而達到分離純化的目的。4.蛋白性質鑒定（沉淀法）。本實驗采用的是磺基水楊酸檢測蛋白質。因為蛋白質為兩性物質，在酸性環境中帶正電荷，而磺基水楊酸根帶負電，正好與蛋白質結合沉淀，顯 示液體中有蛋白存在。5. 純度鑒定（電泳）。本實驗采用的是醋酸纖維素薄膜電泳。血漿中各種蛋白質的等電點不同，一般都低于PH7.4。它們在PH8.6的緩沖液中均解離帶負電荷，在電場中向正 極移動。由于血漿中各種蛋白質分子大小、形狀及所帶的電荷量不同，因而在醋酸纖維素薄膜上電泳的速度也不同。因此可以將它們分離為清蛋白（Albumin）、a 1-球蛋白、a 2-球蛋白、P -球蛋白、丫 -球蛋白5條區帶。、實驗材

35、料1. 樣品。健康人血清 2.試劑。0.3mol/L pH6.5 醋酸銨（N4AC）緩沖液、0.06mol/L pH6.5 NH 4AC 緩沖液、0.02mol/L pH6.5 NH 4 AC緩沖液、1.5mol/LNaCI-0.3mol/L NH 4AC溶液、飽和硫酸銨溶液、1%BaCl2溶液、20%®基水楊酸3. 儀器及器材電泳儀、電泳槽、離心機、微量加樣槍、離心管、托盤天平、載玻片、蓋玻片、醋酸纖 維素薄膜、濾紙、試管、點樣板、滴管 三、實驗步驟1.流程：粗提-脫鹽-純化-鑒定2. 操作步驟(1)取0.8ml血清于試管中，邊搖邊緩慢滴加飽和硫酸銨溶液0.8ml，混勻室溫放置 1

36、0min, 4000r/min 離心 lOmin(2) 取沉淀(含球蛋白)加0.6ml蒸餾水溶解，過葡聚糖凝膠 G-25層析柱。(3)用1ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液清洗層析柱內壁,繼續用0.02mol/L pH6.5 NH4AC緩沖液(2ml)洗脫，流出液量約2ml(4)磺基水楊酸檢測是否有蛋白質被洗脫，當有沉淀且后一滴洗脫液產生的沉淀明顯多于前一滴時，收集含有較純凈球蛋白的峰液12d.(5)此時磺基水楊酸和BaCl2檢測可能同時陽性，繼續用 0.02mol/L NH4AC緩沖液洗滌約2ml，BaCl2檢測SO42陰性，用23ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液再生平衡(

37、6)上清液(含清蛋白、少量a球蛋白和p球蛋白)約0.8ml，加入到步驟(5)再生的葡聚凝膠層析柱中，重復步驟(3)-( 5)(7)除鹽后收集的球蛋白，過 DEAE纖維素層析柱。(8)用1ml 0.02mol/L NH4AC緩沖液清洗層析柱內壁,繼續用0.02mol/L pH6.5 NH4AC緩沖液(3ml)洗脫，流出液量約2ml時，用磺基水楊酸檢測是否有蛋白質生成(9)當點滴板上有沉淀生成時，收集含有球蛋白的洗脫液每管10d，連續收集3管(10) DEAE纖維素柱不用再生，可直接用于純化清蛋白(11)除鹽后收集的清蛋白過 DEAE纖維素層析柱，用1ml 0.0 6 mol/L NH4ACg沖液

38、清洗層析柱內壁,用約5 mL 0.06mol/L NH4AC緩沖液流洗，除去a球蛋白和p球蛋白(12)用磺基水楊酸檢測蛋白質呈陰性時，用 0.3mol/L NH4ACg沖液(約3ml)洗脫，流出液量約2.5ml(13)磺基水楊酸檢測蛋白質呈陽性時，收集含有清蛋白的洗脫液每管10d，連續收集(14) DEAE纖維素柱先用 6ml l.5mol/L NaCl - 0.3mol/L NH4AC溶液流洗，再用 10ml0.02mol/L NH4AC緩沖液流洗再生平衡(15)將收集到的3管丫 -球蛋白用磺基水楊酸做純度鑒定，取濃度最高的一管做純度鑒定，而收集到的兩管清蛋白都要做純度鑒定 醋酸纖維素薄膜電泳：取醋酸纖維素薄膜迎光找出粗糙面，在粗面距邊緣約1.5cm點樣, 然后將薄膜粗面向下，點樣端置陰極端，兩端緊貼在濾紙鹽橋上，膜應輕輕拉平，接通電源開始電泳。電泳完畢后，關閉電源，將膜取出，直接浸于染色液中5mi n。