1、一 實驗原理雙翅類昆蟲（搖蚊、果蠅等）幼蟲期的唾腺細胞很大，其中的染色體稱為唾腺染色體(salivary chromosome)。唾腺染色體的特征： 1. 唾腺細胞發育成熟后停滯于永久性有絲分裂永久性有絲分裂前期。前期。 2. 2. 體細胞同源染色體配對體細胞同源染色體配對，所以染色體只有半數（n）。各染色體的異染色質多的著絲粒部分互相靠攏形成染色中心染色中心（chromocenter.） 3. 唾腺染色體經過多次復制而并不分開，大約有10004000根染色體絲的拷貝，所以又稱多多線染色體線染色體（polytene chromosome）。 4. 這種染色體較普通染色體大得多，寬約5m，長約4

2、00m，相當于普通染色體的100150倍，又稱為巨大染色體。 5. 多線染色體經染色后，出現深淺、密疏不同的橫紋，深淺、密疏不同的橫紋，這些橫紋的數目和位置往往是恒定的，代表著果蠅等昆蟲的種的特征。如染色體有缺失、重復、倒位、易位等，在其上很容易被識別出來。二 實驗目的 練習取出果蠅等幼蟲唾腺的技術和制作唾腺染色體標本的方法。 觀察多線染色體的特征： a. 體細胞配對，所以染色體只有半數（n）；各染色體的異染色質多的著絲粒部分互相靠攏形成染色中心(chromocenter）; b.多線性和巨大性； c. 橫紋有深淺、疏密的不同，可作為染色體的識別標志。 把觀察到的好圖像畫下來。三 實驗材料 黑

3、腹果蠅的三齡幼蟲。這種材料易飼養又易取得唾腺，但為了得到更好的染色體標本，需要在2025和營養良好的條件下飼養幼蟲。選擇行動遲緩肥大，爬上管壁的三齡幼蟲（就要化蛹了）做標本最佳。四 實驗器具和藥品 用具：雙筒解剖鏡，顯微鏡，鑷子，解剖針，載玻片，蓋玻片，吸水紙。 藥品：改良苯酚品紅，生理鹽水。五 實驗步驟1.把載玻片置于解剖鏡下。載玻片上滴一滴生理鹽水，取三齡幼蟲放在其上，操作者兩手各握一只解剖針，一只解剖針壓住幼蟲后段1/31/2 處，固定幼蟲。一只解剖針按住幼蟲頭部口器，用力向前拉，把頭部從身體拉開，唾腺隨之而出，唾腺是一對透明的棒一對透明的棒狀腺體狀腺體。2.在載玻片上除去幼蟲其他組織部

4、分，把唾腺周圍的白色脂肪剝離干凈，再把唾腺移到干凈的載玻片上。3.染色10分鐘后，蓋上干凈的蓋玻片，用濾紙先輕輕壓一下，吸去多余的染液。然后放在平的桌子上，用大拇指用力壓片。用力方向可因人而異，多做幾次，可得較好的片子。 4.制成的片子在顯微鏡下觀察。5. 如得到片子完整良好，而且沒有氣泡，可在冰箱中保持數日。也可以制成永久片，步驟如下：先剔出封蠟，放入固定液（冰醋酸：酒精=1：3）中，待蓋玻片脫落，再把有材料的載玻片和蓋玻片通過下列順序：95%酒精1分鐘，純酒精1分鐘，再經純酒精1分鐘，再經過幾次不同比例的酒精和二甲苯混合液（3：1；2：1；1：1等），最后到純二甲苯，取出后用加拿大樹膠封片

5、。再取出蓋玻片蓋上即可。六 觀察標本 1.先用低倍鏡觀察片子，找到好的染色體圖像后，放到視野中心，再用高倍鏡觀察。 2.黑腹果蠅的唾腺染色體是2n=24=8（圖）,但因體細胞配對，又因短小的第4染色體和X染色體的著絲粒在端部，所以染色體的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一條線狀和點狀染色體。只有第2和第3染色體的著絲粒在中央，它們從染色體以V字形向外伸出（2L,2R,3L,3R）,因此共有6條。 在顯微鏡下，短小的第4染色體有時不易觀察到。雄果蠅的Y染色體幾乎包含在染色中心里，因為是異染色質,看起來染色可能淡些。有經驗的人可以發現雄果蠅的X染色體要細些，因為雄體只有一條X染色體。 3.唾腺

6、染色體上的橫紋寬窄、濃淡是一定的，但在果蠅的特定發育時期，它們會出現不連續的膨脹，這稱為疏松區（puff），目前人們認為這是這部分基因被激活的標志。 返回黑腹果蠅(D rosophila m elanogaster)唾腺染色體6條臂末端的特征。 箭頭指的是X染色體上永久性的蓬突與3L上的縊縮; 星號是染色較深的帶紋;小圓是著色較淺的帶紋(引自Graff, 1992) 。 第4 臂最短; X末端有一個永久性的膨大節段,稱蓬突(puff,或 “脹泡”,這是它特征性的標志) ,這是最易識別的兩條臂。 其他各臂的末端的形狀請見圖。四 實驗器具和藥品 用具：雙筒解剖鏡，顯微鏡，鑷子，解剖針，載玻片，蓋玻片，吸水紙。 藥品：改良苯酚品紅，生理鹽水。五 實驗步驟1.把載玻片置于解剖鏡下。載玻片上滴一滴生理鹽水，取三齡幼蟲放在其上，操作者兩手各握一只解剖針，一只解剖針壓住幼蟲后段1/31/2 處，固定幼蟲。一只解剖針按住幼蟲頭部口器，用力向前拉，把頭部從身體拉開，唾腺隨之而出，唾腺是一對透明的棒一對透明的棒狀腺體狀腺體。2.在載玻片上除去幼蟲其他組織部分，把唾腺周圍的白