1、 張 婧 導師：羅深秋教授 時間：2006-03-23 肝臟疾病嚴重危害著人們的健康。 衛生部2005年的統計資料顯示： 我國約有1.2億人攜帶乙肝病毒，慢性乙肝患者約3000萬； 慢性丙肝患者3800萬； 脂肪肝患者約5000萬； 藥物、中毒、自身免疫性肝病患者1000萬人。 每年約有50萬人死于慢性乙肝相關疾病。 肝纖維化是諸多慢性肝病發展至肝硬化過程中所共有的病理組織學變化。近年來的研究已經證實肝纖維化是由于肝星狀細胞（hepatic stellate cell, HSC)分泌了過多的胞外基質，并在肝臟內沉積而形成的。 肝臟星形細胞(hepatic stellate cells ,HSC

2、) 又稱貯脂細胞(fatstoring cell ,FSC) ,具有貯存脂肪供肝細胞能量、貯存及代謝維生素A、合成細胞外基質的功能。在炎癥、化學物質等致病因素刺激下HSCs 可活化、增殖并產生大量的膠原,是形成肝纖維化的中心環節。 去除病因，減少炎癥; 抑制HSCs 激活和細胞外基質合成; 促進基質降解； 肝細胞再生； 促進HSCs的凋亡。 近來的研究表明，AMP激活的蛋白激酶（AMPK）持續性的激活可以引發細胞的凋亡 。有實驗證明持續的AMPK的活性可以誘導MIN6、原代的cell、Jurkat等細胞的凋亡。 香港大學徐愛民教授與倫敦MRC研究中心的 David Carling 博士的合作課

3、題中，對AMPK在激活的大鼠HSCs細胞的功能作用進行了初步的探討。他們發現腺病毒介導的組成性激活的他們發現腺病毒介導的組成性激活的AMPK的過的過表達能明顯的誘導激活的大鼠表達能明顯的誘導激活的大鼠HSCs 細胞產生凋細胞產生凋亡。亡。 HSCs的分離 HSCs的鑒定和培養 外源基因表達的檢測細胞凋亡的檢測人肝星狀細胞株LX-2的培養鑒定 腺病毒轉染動物實驗 分離、鑒定了大鼠的肝形狀細胞； 鑒定了LX2細胞 正在摸索合適的病毒感染的數量，以及感染后收獲細胞的時間。Thank you！ CL2MDP質脂體的制備 質脂體尾靜脈注射3d 灌注、分離肝臟 紗網過濾、密度梯度離心 培養1.Antide

4、smin的抗體做免疫組化2.油紅o染色3.熒光顯微鏡觀察 設置不同的病毒的梯度感染細胞：0、10、20、40、80、100pfu，分別在18h和、30h、48h提取蛋白，進行目的蛋白表達的檢測，以確定病毒的用量和收獲細胞的時間。 1.western blotting檢測外源基因的表達：用抗Myc-標簽的抗體作為一抗檢測。 2.免疫組化檢測 形態學的觀察 流式細胞儀的檢測 DNA ladder分析 JNK表達的變化 Caspase3表達的變化 Bcl2表達的變化酒精誘導的小鼠肝損傷 （含乙醇的高脂肪流質食物喂食4周）四氯化碳誘導的肝纖維化 （腹腔注射四氯化碳6周 ）動物模型通過尾靜脈注入表達組成性激活的AMPK或熒光素酶的重組腺病毒，在預定時間后，取老鼠的肝臟進行以下分析： （1）免疫組化評估肝損傷的程度，炎癥灶，HSCs細胞的激活，膠原的含量等； （2）檢測參與