1、H ,ASCH ER K R S.Natural Pesticides from t he Neem Tree and Ot her Tropical Plant s.Eschborn :GTZ ,1987:2532271.27KAUSER G,BRANDTNER H M ,BIDMON H J ,et al.Ecdys 2one synthesis and release by the brain 2ring gland complex of blowfly larvaeJ .J Insect Physiol ,1988,34(7:5632569.28DORN A ,RADEMACH ER

2、J M ,SEHN E.Effect s of aza 2dirachtin on t he molting cycle ,endocrine system ,and ovaries in last 2instar larvae of t he milkweed bug ,Oncopelt us f asciat us J .J Insect Physiol ,1986,32(3:2312238.29CASSIER PIERRE ,BA GHDASSARIAN 2CHALA YE DEN 2ISE ,DE BESSE N ICOL E ,et al.Ecdysteroids and activ

3、ation of epidermal cells in t he locust L ocusta mi g ratoria J .J Insect Physiol ,1988,34(7:6692677.30MORDU E (L UN TZ A J ,BL ACKWELL A.Azadirachtin :anUpdateJ .J Insect Physiol ,1993,39(11:9032924.31BALANDRIN M F ,L EE S M ,KLOC KE J A.Biologically ac 2tive volatile organosulphur compounds from t

4、 he seeds of t he neem t ree ,A z adi rachta indica (Meliaceae J .J Agric Food Chem ,1988,36:104821054.32SIN GH S R ,L USE R A ,L EUSCHN ER K ,et al.Groundnutoil treat ment for t he control of Callosobruchus maculat us (F.during cowpea storage J .Journal of Stored Product s Re 2search ,1978,14:77280

5、.33DON 2PEDRO K N.Effect s of fixed vegetable oils on oviposi 2tion and adult mortality of Callosobruchus maculat us (F.on cowpeaJ .International Pest Control ,1989,31:34237.34DON 2PEDRO K N.Mode of action of fixed oils against eggs ofCallosobruchus maculat us (F.J .Pesticide Science ,1989,26:107211

6、5.35CRDLAND P F.The structure of bruchid eggs may explain t heovicidal effect of oilsJ .Journal of Stored Product s Research ,1992,28:129.收稿日期:2007202201修訂日期:20072032063通訊作者E 2mail :tingchangzhao 轉基因作物對土壤微生物多樣性影響王振1,2,趙廷昌23,劉學敏1,鄧欣2(1.東北農業大學農學院,哈爾濱150030;2.中國農業科學院植物保護研究所,植物病蟲害生物學國家重點實驗室,北京100094摘要土壤

7、微生物的多樣性及其活性是保持農業生態系統穩定的基礎,而作物的改變對土壤微生物的多樣性結構和活性具有顯著的影響。轉基因作物被引入到農田后所帶來的微生物群落的變化及對農業生態系統所帶來的不確定因素,已成為研究熱點。本文綜述了近年來轉基因作物對土壤微生物群落影響的研究進展,并且著重介紹了轉基因抗蟲棉對根際微生物多樣性影響的研究進展。關鍵詞轉基因作物;土壤微生物群落;生物安全;轉基因抗蟲棉中圖分類號X 172Advances in research on the impacts of transgenic crops on soil microbesWang Zhen 1,2,Zhao Tingcha

8、ng 2,Liu Xuemin 1,Deng Xin 2(1.College of A g ronom y ,N ortheast A g ricultural Universit y ,H arbin 150030,China;2.S tate Key L aboratory f or B iology of Plant Diseases and I nsect Pests ,I nstitute ofPlant Protection ,Chinese A cadem y of A g ricultural Sciences ,B ei j ing 100094,China Abstract

9、 Microbes in the soil play a key role in keeping a healthy and sustainable agroecosystem.Introduction of transgenic crop s significantly affects the structure and ecological f unctions of soil 2borne plant 2associated microorgan 2isms.This paper focused on the effects of transgenic crops and their r

10、esidues ,particularly the insect 2resistant trans 2genic cotton ,on various organisms in the rhizosphere in the soil.K ey w ords genetically modified crops ;soil microbes ;biosafety ;insect 2resistant transgenic cotton土壤是農業生產的基礎,而土壤微生物在土壤物質能量轉化過程中起著重要的作用。土壤微生物的多樣性與活性的保持是農業生態系統健康和穩定的基礎122。近年來的研究表明,轉基

11、因作物的外源基因和基因表達產物可通過根系分泌物或殘茬進入土壤生態系統,進而對土壤生物功能類群及多樣性51專論與綜述 造成影響325。因此,土壤微生物在轉基因作物風險評價中占有重要地位326。如美國環保局(署(En2 vironmental Protection Agency,EPA2000年將轉基因作物對土壤生態系統的影響列為風險評價的重要組成部分。本文簡要綜述了近幾年轉基因作物安全評價方面的發展狀況,外源基因及基因表達產物在土壤中的行為以及轉基因作物對土壤微生物影響的研究現狀。1引言近年來隨著轉基因作物的大面積種植,轉基因作物的生態安全性逐漸受到政府、科學家及民間的關注,研究的主要內容是關于

12、轉基因作物與近緣物種之間的水平基因轉移、靶標害蟲抗性的產生、對非靶標生物和生態系統的影響以及作為食品的安全性等問題。許多專家對其利弊做了分析,但對其是否會導致嚴重的生態環境問題有不同的觀點。目前對于轉基因作物對土壤微生物群落影響的途徑認識是比較明確的:首先,轉基因作物的外源基因主要是通過轉基因作物根系分泌物和轉基因作物殘體降解的途徑進入土壤生態系統從而影響土壤微生物群落,使土壤生物功能類群以及土壤生物多樣性都有可能因此改變,從而影響整個生態系統的功能與穩定性。其次,轉基因作物的遺傳改良可能會影響到植物本身的分解速度和碳、氮水平,進而影響土壤生物、生態過程,同樣影響到整個生態系統的功能。2轉基因

13、作物外源基因表達產物及其分解的殘體在土壤中的行為及其對土壤微生物的影響轉基因作物外源基因的產物釋放到環境尤其是土壤環境后,對土壤生物可能產生的影響已經引起人們的關注。有關轉基因作物外源基因的表達產物在土壤中的行為,目前主要以轉Bt基因作物表達產物Bt蛋白在土壤中行為研究為主。Saxena等通過沙培試驗和田間試驗證實,根系分泌物中的Bt蛋白在土壤中存在180d以后,仍有殺蟲活性7。更有科學家研究發現轉Bt基因玉米收獲后,根茬中的Bt 殺蟲蛋白1447d后才消失8。而Tapp等通過生物測定研究純化的Bt蛋白與土壤顆粒結合后的活性表明,結合態Bt蛋白的毒性比非結合態的還強9。有研究表明Bt毒素在土壤

14、中也能夠存留較長的一段時間,且不易被土壤微生物分解,其活性持續時間與黏粒含量成正比,而與土壤p H成反比10。如Rui等發現Bt棉根系分泌的Bt毒素的高活性可持續2個月11。Palm測定轉Bt蛋白和純化的Bt 蛋白降解速度在土壤的濃度均是在前14d里迅速下降,然后緩慢下降,并在幾個月內保持一定濃度,而這些較低含量的Bt蛋白可能會對非靶標的土壤微生物產生不利影響,并且隨著轉Bt植物的不斷種植而積累12。但Graham等報道,在連續種植了3 6年的轉Bt棉花田中,用EL ISA和生物檢測法未檢測到這種Bt毒蛋白13,認為種植了轉Bt棉花后殘留在田中的植株殘體向土壤釋放的Bt毒蛋白含量很低,生物活性

15、也不足以達到能檢測到的水平。芮玉奎通過對轉Bt棉花的根際土壤中毒蛋白的周年變化的試驗研究表明,Bt毒蛋白在盛蕾期到棉鈴發育期之間毒蛋白降解速度加快,最快時達到4ng/gh;到吐絮期以后毒蛋白的降解明顯放慢,降低幾十倍,降解速度不到0.2ng/gh。但到棉花收獲后,毒蛋白在抗蟲棉根際土壤中殘留降低到常規棉根際土壤的水平,據此認為轉基因抗蟲棉毒蛋白殘留不會對生態環境造成長時間的影響,但會對當季作物造成不利影響14。由于作物被收獲的只有一小部分,大部分會殘存或重新返回土壤中(秸稈還田等,增加了土壤微生物群落與作物殘體內存在的轉基因產物的接觸時間。另外,作物殘體在土壤中逐步分解的過程,其降解產物也會對

16、土壤微生物群落產生一系列影響。J ames報道,Bt毒素可通過枯枝落葉和根系分泌物殘留在土壤中,與土壤黏粒結合毒性難以降解15。Donegan等對轉蛋白酶抑制劑I基因煙草中蛋白酶抑制劑在土壤中的殘留進行了分析,發現含轉基因煙草葉片的垃圾袋埋入土壤后57d后仍能檢測到0.05%的蛋白酶抑制劑16。Widrner等利用枝葉埋入土壤法對轉基因煙草中抗生素基因在土壤微生態系統中的殘留進行了研究,發現120d之后土壤中仍能檢測到0.14%的外源抗生素序列17。Hoff mann等發現,轉基因油菜、黑芥菜、蒺藜和甜豌豆中抗抗生素基因(n pt可通過轉基因植株的殘枝落葉轉移到一種能與植物共生的黑曲霉微生物中

17、18。錢迎倩等報道,帶有幾丁質酶的抗真菌的轉基因作物可通過殘枝落葉的降解和根系分泌物減少土壤中菌根的種群19。 由上可知,轉基因作物的外源基因產物在土壤環境中的作用還存在爭議,但大多數科學家傾向于有影響,它的存在是引起土壤中微生物變化的一個原因。因此在轉基因作物安全評價體系中轉基因作物的外源基因產物在土壤的行為應該是評估的重要內容,而相應的土壤中微生物的變化也應是重要的評估內容。3轉基因作物的遺傳改良對土壤微生物的影響Dunfield研究了在加拿大的4個不同田塊連續2年種植4種轉抗除草劑基因的油菜和4種常規油菜品種對根際微生物多樣性的影響20。通過分析表明,轉基因油菜品種Quest的根內和根際

18、細菌群落與常規品種Excel和Fairview有差異。轉基因油菜的根際微生物群落在一些脂肪酸上顯著偏高,表明其微生物群落組成發生了變化。2003年Dunfield等又繼續對這個問題進行了進一步的研究21。他研究了連續2年種植轉抗除草劑基因油菜(抗草甘膦和常規油菜以及未種植油菜的田塊的微生物群落,結果表明土壤微生物群落隨著品種和生長季節而發生,在生長季節的某些時間觀察到了轉基因植物品種的差異。所有的分析表明,在越冬后轉基因油菜和非轉基因油菜的微生物群落沒有差異。轉基因植物對微生物群落的影響是暫時的,不會持續到下一個生長季節。Holger Heuer等研究了轉T4溶菌酶馬鈴薯,指出T4溶菌酶表達的

19、馬鈴薯與對照相比沒有發現根際群落有偏差,是季節、田塊的位置或年份相關的環境因子而不是轉基因植物表達的T4溶菌酶影響了根際群落22。Jana Lottmann等研究了轉T4溶菌酶馬鈴薯根際產生植物激素吲哚乙酸的有益細菌和對病原菌Erw inia carotovora和Verticillium dahliae 有抗性的抗生細菌的變化,也得出相似的結論,認為轉T4溶菌酶基因對這些微生物的影響與環境中的自然變異相比是很小的23。Jana Lottmann等還將利福平抗性突變的兩個植物結合細菌用于接種T4溶菌酶表達的轉基因馬鈴薯、轉基因對照馬鈴薯和非轉基因的親本馬鈴薯塊莖上,評估轉基因馬鈴薯產生的T4溶

20、菌酶對這些接種菌生存的影響24。結果發現,在所有取樣時間,根際和塊莖表面群落的DGGE模式在接種和非接種的馬鈴薯之間沒有差異。Griffiths等研究了轉兩種凝集素伴刀豆蛋白A (ConA和雪花凝集素(G NA的馬鈴薯以及純化的凝集素對土壤微生物群落的影響25。實驗室研究發現土壤細菌群落沒有檢測到直接影響。田間試驗表明轉G NA的馬鈴薯在收獲時改變了根際微生物群落,但是這種效應不能從一個季節持續到下一個季節,轉G NA馬鈴薯對后來種植的大麥生長沒有顯著影響。Step hen Gyamfi等研究了轉Basta抗性的油菜的種植以及相應的除草劑的使用對根際Pseu do2 monas和Eubacte

21、ri al群落結構的影響26。試驗結果表明,轉基因植物的根際微生物群落發生了輕微的變化,但是這個變化與植物生長帶來的變化相比是很微弱的。在生長后期都檢測到了兩種除草劑對Pseu domonas和Eubacteri al群落結構的暫時的改變。Saxena等把轉Bt基因玉米和非Bt轉基因玉米以及空白土壤對照相比,細菌、放線菌和真菌在數量和類群上沒有顯著差異27。而Thomas L ukow用末端限制性片段長度多態性(T2RFL P分析了轉GUS基因和B arnase/ B arst ar基因馬鈴薯和非轉基因馬鈴薯的土壤細菌群落,發現它們有顯著的差異28。S. D.Siciliano 的研究也表明抗

22、除草劑草甘膦的轉基因油菜與對照相比根內有更多的Fl avobacteri um和Pseu domonas 分離菌,而B acill us、M icrococcus和V ariovora x分離較少29。根際與對照相比A rt hrobacter和B acil2 l us分離菌較少。與對照相比轉基因油菜的微生物多樣性減少。G. D.Di G iovanni對轉木質素過氧化酶基因的苜蓿進行了研究,轉基因和非轉基因親本之間的Biolog GN的細菌群落的ERIC2PCR指紋聚類分析表明在根際富集的細菌類型有區別30。陳敏、應文荷通過研究轉Bt水稻與常規水稻根際土壤,初步判斷轉Bt水稻根際土壤的細菌生

23、理類群無論在數量或是結構組成上均明顯不同于常規水稻31。4轉基因棉對根際微生物多樣性的影響目前轉基因抗蟲棉所用的基因主要是Bt殺蟲蛋白基因(B acill us t huri niensis,Bt、豇豆胰蛋白酶抑制劑基因(cowpea tryp sin inhibitor,Cp TI、植物凝集素基因等。中國、美國、印度等幾個國家種植了轉基因抗蟲棉,其中我國是世界上抗蟲棉種植面積最大的國家。我國于1988年啟動了轉基因抗蟲棉的研究,十多年的研究取得了豐碩的成果,目前我國已審定了16個抗蟲棉品種,其中單價抗蟲棉13個,雙價棉3個。累計推廣面積達600萬hm2,累計產生的社會經71專論與綜述 濟效益

24、超過120億元,顯示了巨大的經濟效益32。伴隨著轉基因棉花的大面積種植,轉基因棉花對土壤微生物群落的影響逐漸成為研究熱點。Donegan等研究發現,2個轉Bt基因的棉花品系的處理小區,細菌和真菌的數量顯著高于其他處理,而另一個轉Bt基因的棉花品系及純化的Bt蛋白則不顯著33。通過微生物群落物質利用和DNA指紋分析也發現上述變化。他認為轉Bt基因棉可能由于遺傳修飾后的植株的生理生化特性發生變化而對土壤微生物產生影響,并非表達產物的直接影響。Oger等研究轉產冠癭堿基因植物根際分泌物對細菌群落的影響,結果發現,雖然轉基因植物和非轉基因植物根際的總細菌數無明顯差異,但在轉基因植物根際中利用冠癭堿的細

25、菌種群的個體數量是非轉基因植物的80倍,表明轉基因植物根系分泌物改變了根際微環境,導致細菌群落結構發生變化34。徐征研究指出抗蟲棉土壤的微生物種類、組成與常規棉差異顯著35。土壤中好氧細菌和真菌數量顯著增加,芽孢桿菌和鏈球菌是優勢種。Yudina等發現4種不同轉Bt基因棉花促使了土壤中細菌和真菌數量發生短暫性的顯著增加36。Wat rud和Seidier 也報道,轉Bt基因棉花可以提高土壤中細菌和真菌的數量37。Trevors等認為轉基因Bt抗蟲作物的遺傳體在土壤中被降解后,對土壤微生物活動過程(硝化作用、固氮作用等的影響,可導致土壤生物地球化學循環的嚴重變化38。但是,也有轉基因作物對微生物

26、群落沒有影響的報道。Tapp39與Stotzky10發現與土壤結合的Bt毒素不能作為碳源被微生物利用。沈法富等在大田栽培條件下,以轉Bt基因抗蟲棉GK212和常規棉花泗棉3號作為材料,研究根際土壤微生物的變化,表明不同年份和生育期棉花根際微生物數量存在差異,但年度間和相同的發育時期棉花根際微生物的數量變化趨勢一致40。裴克全采用對原核生物核糖體小亞基16S rDNA全序列分析的方法,研究轉基因抗蟲棉根際土壤微生物的多樣性,也沒有發現抗蟲棉田與非抗蟲棉田間有顯著的差異41。5結束語土壤中的微生物在農業生態系統中不僅可以調節植物生長發育、抑制病原微生物的生長,而且在生態系統中的營養元素礦化、土壤肥

27、力的保持和提高以及能量轉化和物質循環等方面具有其他生物無法代替的作用。隨著各種抗蟲、抗病等轉基因作物不斷選育種植,這種變化對土壤微生物存在潛在危險而可能造成對農業生態系統的影響成為研究熱點。但正如上面所述,有的學者認為轉基因作物對生態環境沒有影響,但也有學者認為轉基因作物對生態環境是有影響的,本人傾向于后者。因為耕作作物作為農業生態系統中重要的組成部分,它的改變必然會影響農業生態系統中其他的組成部分。轉基因作物對土壤生物的影響是復雜的,多方面的,例如它所產生的特有蛋白是否會對其他生物產生毒害作用,發生毒害作用所需要的積累時間有多長;為了適應轉基因作物而改變的生產勞動方式對原有的生物產生的負面影

28、響有多大等等。還有它與現有的策略是否相沖突。如T abashnik認為,轉基因作物使害蟲數量降低,對保持天敵的有效數量會有負面影響42。這些結果意味著轉基因作物與依賴健康天敵數量的IPM防治策略及生物保育存在潛在的沖突。另一方面,在美國威斯康星(Wisconsin進行的田間試驗發現,在轉Bt馬鈴薯田里捕食性昆蟲和寄生性昆蟲的數量要比傳統的采用化學殺蟲劑防治非轉基因馬鈴薯害蟲的田間大。但是這個試驗沒有檢測未施或少施化學殺蟲劑的傳統馬鈴薯田間的情況43。這些結果說明,在評價轉基因抗蟲作物的作用時,必須與現在的各種防治措施進行比較,包括頻繁使用化學藥劑、少用或根本不用化學藥劑的情況。因此對于轉基因作

29、物的評價必須建立生態學意義的評估方法和理論體系并加以科學驗證,尤其是需要加強分子生物學方法的應用,以獲得更精確的評價。同時應當認識到轉基因生物安全性的研究是一件長期而艱苦的任務,也許需要10年、20年或者更多年的積累。參考文獻1FINLA Y B J,MABERL Y S C,COOPER J I.Microbial diver2sity and ecological functionJ.Oikos,1997,80:2092213. 2GROFFMAN P M,BO HL EN P J.Soil and sediment biodiver2sity2cross2system compariso

30、ns and large2scale effect sJ.Bio2Science,1999,49:1392148.3AN G L E J S.Release of transgenic plants:biodiversity and popula2tion2level considerationsJ.Mol Ecol,1994,3:45250.4王洪興,陳欣,唐建軍,等.釋放后的轉抗病蟲基因作物對土壤生物群落的影響J.生物多樣性,2002,10(2:2322237.5王洪興,陳欣,唐建軍,等.轉Bt基因水稻秸稈降解對土壤微生物可培養類群的影響J.生態學報,2004,24(1:89294. 6J

31、 EPSON P C,CROFT B A,PRATT G E.T est systems to deter2 mine the ecological risks posed by toxin release from B acillus thuringiensis genes in cropplantsJ.Mol Ecol,1994,3:81289.7SAXENA D,FLORES S,STO TZKY G.Bt toxin is released inroot exudates from12transgenic corn hybrids representing three trans fo

32、rmation eventsJ.S oil Biol Biochem,2002,34:1332137.8SIMS S R,REAM J E.Soil inactivation of t he insecticidal pro2tein wit hin transgenic cotton tissue:laboratory microcosms and field studiesJ.Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1997,45(6:150221505.9TAPP H,STO TZKY G.Insecticidal activity of

33、t he toxinsfrom B acill uc t huringi gensis subsp.kurstaki and tenebrionis adsorbed and bound on pure and soil claysJ.Applied and En2 vironmental Microbiology,1995,61(5:178621790.10STO TZKY G.Persistence and biological activity in soil of in2secticidal proteins from B acill us t huringiensis and of

34、bacterial DNA bound on claysand humic acidsJ.J Environ Qual, 2000,29:6912705.11RU I Y K,YI G X,Zhao J,et al.Changes of Bt toxin in t herhizosphere of transgenic Bt cotton and it s influence on soil functional bacteriaJ.World Journal of Microbiology&Bio2 technology,2005,21:127921284.12PAL M C J,S

35、CHALL ER D L,DON EGAN K K,et al.Per2sistence in soil of t ransgenic plant produced B acill uc t huri ngi2 gensis var.kurstaki delta2endotoxinJ.Can J Microbil, 1996,42(12:125821262.13GRA HAM H,J AMES B S,JON A M,et al.No detection ofCry1Ac protein in soil after multiple years of transgenic Bt cotton

36、(BollgarduseJ.Envrion Entomol,2002,31(1:30236. 14芮玉奎.轉基因抗蟲棉生產安全性的研究D.北京:中國農業大學,2003.15J AMES R R.Utilizing a social et hic toward t he environment inassessing genetically engineered insect2resistance in treesJ.Agric Human Values,1997,14:2372249.16DON EGAN K K,SEIDL ER R,FIEL AND V J,et al.Decom2posi

37、tion of genetically engineered tobacco under field condi2 tions:persistence of t he proteinase inhibitor I product and effect s on soilmicrobial respiration and protozoa,nematode and microart h ropod populationJ.Journal of Applied Ecology, 1997,34(3:7672777.17WIDMER F,SEIDL ER R J,WA TRUD L S.Sensit

38、ive detec2tion of transgenic plant marker gene persistence in soilmicro2 cosmsJ.Molecular Ecology,1996,5(5:6032613. 18HOFFMANN T,G OLZ C,SCHIEDER O.Foreign DNA se2quences are received by a wild2type strain of A.ni ger after coculture with transgenic higher plantsJ.Curr G enet,1994,27:70276. 19錢迎倩,馬克

39、平.經遺傳修飾生物體的研究進展及其釋放后對環境的影響J.生態學報,1998,18(1:129.20DUN FIELD K E,GERMIDA J J.Diversity of bacterial com2munities in t he rhizosphere and root interior of field2grown ge2 netically modified B rassica napusJ.FEMS Microbiology E2cology,2001,38:129.21DUN FIELD K E,GERMIDA J J.Seaonal changes in t he rhi2z

40、osphere microbial communities associated wit h field2grown ge2 netically modified canola(B rassica nap usJ.Applied and Environmental Microbiology,2003,69(12:371023718. 22HOL GER H EU ER,KROPPENSTED T R M,J ANA LO T T2MANN,et al.Effect s of T4lysozyme release from transgenic potato root s on bacteria

41、l rhizosphere communities are negligible relative to natural factorsJ.Appl Environ Microbiol,2002, 68(3:132521335.23J ANA LO T TMANN,HOL GER H EU ER,KORN EL IASMALLA,et al.Influence of transgenic T42lysozyme2produ2 cing potato plant s on potentially beneficial plant2associated bac2 teriaJ.FEMS Micro

42、biology Ecology,1999,29:3652377. 24J ANA LO T TMANN,HOL GER H EU ER,J O HANN DEVRIES,et al.Establishment of introduced antagonistic bacte2 ria in t he rhizosphere of transgenic potatoes and t heir effect on t he bacterial communityJ.FEMS Microbiology Ecology, 2000,33:41249.25GRIFFIT HS B S,GEO GH EG

43、AN I E,ROBER TSON W M.Testing genetically engineered potato,producing t he lectins GNA and Con A,on non2target soil organisms and processes J.Journal of Applied Ecology,2000,37(1:1592170. 26STEP H EN GYAMFI,ULRIKE PFEIFER,MICHAEL STIER2SCHNEIDER,et al.E ffects of transgenic glufosinate2tolerant oil2

44、 seed rape(B rassica napusand the associated herbicide application on eubacterial and Pseudomonas communities in the rhizosphere J.FEMS Microbiology Ecology,2002,41:1812190.27SAXENA D,STO TZKY G.Insecticidal toxin from B acill ust huringi gensis is released from root s of transgenic Bt corn in vit r

45、o and in situJ.FEMS Microbial Ecol,2000,33:35239.28L U KOW T,DUN FIELD P F,L IESAC K W.U se of t he T2RFL P technique to assess spatial and temporal changes in t he bacterial community structure wit hin an agricultural soil plan2 ted wit h transgenic and non2transgenic potato plant sJ.FEMS Microbiol

46、ogy Ecology,2000,32:2412247.29SICIL IANO S D,GERMIDA J J.Taxonomic diversity of bac2teria associated wit h t he root s of field2grown transgenic B rassi2 ca nap us cv.Quest,compared to t he non2transgenic B.nap us cv.Excel and B.rapa cv.ParklandJ.FEMS Microbiology E2 cology,1999,29:2632272.30DI GIOV

47、ANNI G D,WA TRUD L S,SEIDL ER R J,et al.Comparison of parental and transgenic alfalfa rhizosphere bac2 terial communities using biolog GN metabolic fingerprinting and enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence2 PCR(ERIC2PCRJ.Microb Ecol,1999,37:1292139. 31陳敏,應文荷.轉Bt水稻與常規水稻根際土壤細菌類群的比較研究

48、J.杭州師范學院學報(自然科學版,2005,4(4:2902292. 32郭三堆,崔洪志.我國抗蟲棉的研究現狀及展望C中國-歐盟農業生物技術研討會資料匯編.2003:972102.91專論與綜述 33 卷第 4 期 ( 2007 第 20 PL AN T PRO TECTION Vol. 33 No . 4 (2007 專論與綜述 33 DONEGAN K K , PALM C J , FIELAND V J . Changes in levels , species and DNA fingerprint s of soil microorganisms associated wit h t

49、oxinJ . Applied Soil Ecology , 1995 , 2 (2 : 1112777. Nat ure Biotechnol , 1997 , 15 : 3692372. J . 中國農學通報 ,2004 ,20 (4 :47250. J . Microbiol , 1997 , 66 : 25231. cotton expressing t he B acilluc thuringi gensis var. kurstaki endo2 soil chemist ry and ecosystem healt h C . Wisonsin : Special Publica

50、2 39 TA PP H , S TO TZKY G. Insecticidal activit y of t he toxin f ro m sorbed and bound on pure and soil claysJ . Appl Environ Mi2 st udy of molecular ecology of t ransgenic cotton rhizo sp herical microbes D . Beijing : Instit ute of Botany ,CAS. 2001. Evolution of resistance of B acil l us Aca2de

51、mic Press , 1998 :1852205. B acill us t huri n giensis subspecies k urst aki and tenebrionis ad2 34 O GER P , PETI T A , DESSAU X Y. Genetically engineered plant s p roducing opines alter t heir biological environment J . 40 沈法富 ,韓秀蘭 ,范術麗 . 轉 Bt 基因抗蟲棉根際微生物區系和細 35 徐 征 . 農業轉基因生物對土壤生態系統功能影響的研究進展 41 P E

52、I K Q. Biosafet y information const ruction and preliminary 36 YUDINA T G , BU R TSEVA L I. Activit y of deltaendotoxins of four B acill us t huri n giensis subspecies against ro karyotes 42 TABASHN I K B E. 37 W ATRUD L S , SEIDL ER R J . Nontarget ecological effect s of plant , microbial ,and chemical introductions to terrestrial systems , tion 52. Soil Science Society of America , 1998 : 313