1、638 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2007, 38(9 · · 中國醫藥工業雜志藥理與臨床鹽酸氨溴索顆粒的藥物動力學及生物等效性研究鄧鳴1，張彥玲2，胡玉欽1，侯艷寧1，牛坤1(1. 白求恩國際和平醫院臨床藥理室，河北石家莊 050082；2. 石藥集團中奇制藥技術(石家莊有限公司，河北石家莊 050051摘要：采用雙周期隨機交叉試驗設計，研究了19名健康男性受試者單劑量口服鹽酸氨溴索顆粒(受試制劑與鹽酸氨溴索片(參比制劑的藥動學。采用LC-MS/MS法測定血漿中氨溴索的濃度。受試制劑與參比制劑的c max 為(69.66

2、7;22.12和(67.89±25.08 ng/ml，t max 為(1.95±0.60和(1.89±0.43 h ，t 1/2為(7.77±0.93和(7.61±1.02 h ，AUC 024h 為(517.9±180.4和(518.3±215.5 ng·h·ml1。鹽酸氨溴索顆粒的相對生物利用度為(102.7±17.1，雙單側t 檢驗結果表明兩制劑具有生物等效性。關鍵詞：鹽酸氨溴索；液相色譜-串聯質譜；藥物動力學；生物等效性中圖分類號：R944.9 文獻標識碼：A 文章編號：1001-825

3、5(2007 09-0638-03Pharmacokinetics and Bioequivalence of Ambroxol Hydrochloride GranulesDENG Ming1, ZHANG Yan-ling2, HU Yu-qin1, HOU Yan-ning1, NIU Kun1(1. Dept. of Clinical Pharmacology, Bethune International Peace Hospital, Shijiazhuang 050082;2. Zhongqi Pharmaceutical Technology (Shijiazhuang Co.,

4、 Ltd., Shijiazhuang 050051ABSTRACT : The pharmacokinetics of ambroxol hydrochloride granules and reference tablets were investigated at a single oral dosage of 30mg in 19 healthy male volunteers, according to a randomized crossover design. The concentration of ambroxol in plasma was determined by a

5、LC-MS/MS method. The main pharmacokinetic parameters of test and reference preparations were c max (69.66±22.12 and (67.89±25.08 ng/ml, t max (1.95±0.60 and (1.89±0.43 h, t 1/2(7.77±0.93 and (7.61±1.02 h, AUC 024h(517.9±180.4 and (518.3±215.5 ng·h·ml

6、1. The relative bioavailability of ambroxol hydrochloride granules was(102.7±17.1. The result of two one-side t test showed that the two preparations were bioequivalent.Key Words: ambroxol hydrochloride; LC-MS/MS; pharmacokinetics; bioequivalence氨溴索(a m b r o x o l ，1是溴己新的活性代謝物，系黏液溶解劑，對呼吸系統有保護作

7、用，還有促進表面活性物質合成和分泌等作用，臨床用于治療急、慢性呼吸道疾病引起的痰液黏稠、咳痰困難等。國內有關1片劑、膠囊劑、口服液等劑型的藥物動力學和生物等效性研究已有報道1-5，但顆粒劑的藥物動力學研究尚未見報道。本研究以1片為收稿日期：2007-01-24作者簡介：鄧鳴(1973，女，碩士，主管藥師，從事藥物分析和藥物動力學研究。Tel -mail ：dm322參比制劑，采用LC-MS/MS法測定人血漿中1的濃度，研究了兩種1制劑的人體藥物動力學和生物等效性，為臨床合理用藥提供了依據。1儀器與試藥液相色譜-質譜聯用系統：Agilent 1100型液相色譜儀，包

8、括四元梯度泵、在線脫氣機、自動進樣器、柱溫箱；API 4000型三重四級桿質譜儀，配有電噴霧離子化(ESI 源、Analyst 1.4 軟件(美國ABI 公司。受試制劑(T ：鹽酸1顆粒劑(河北華威得菲爾藥業有限公司，規格 含1鹽酸鹽30mg ，批號060901；參比制劑(R ：鹽酸1片(上海勃林格殷格翰藥業有限公司，規格 含639中國醫藥工業雜志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2007, 38(9 · ·1鹽酸鹽30mg ，批號684069；1鹽酸鹽對照品(河北省藥品檢驗所，含量99.4，批號040801；維拉帕米(2鹽酸鹽對照品(

9、內標，中國藥品生物制品檢定所，含量100.0，批號0223-9601。和10h 后統一進餐。受試者于給藥前及給藥后20、40min 和1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10、12、24h 分別從肘靜脈取血2ml 置肝素管中放置1h ，離心(3000r/min 10min ，分離血漿，置-20凍存，備用。1周后交叉給藥。2.2血樣測定 2. 2. 1測定條件色譜條件：色譜柱Restek Allure C18柱(4.6mm×50mm ，5µm；流動相 甲醇-乙腈-0.5甲酸(55540；流速0.5ml/min；柱溫20；進樣量5µl。質譜條件：離子源 電噴霧離子

10、化(ESI 源；噴霧電壓5kV ；霧化溫度500；霧化氣流速40L/min；簾氣流速25L/min；碰撞氣流速4L/min；輔助氣流速40L/min；檢測方式 正離子多離子反應監測(MRM 。定量分析的離子反應m/z 379.1264.1(1 ，m/z 455.5m/z 165.2(2 ，碰撞誘導解離(CID 電壓25V (1和45V (2 ；駐留時間(dwell time 200ms 。在上述測定條件下，空白血漿中內源性物質不干擾1和2的測定，保留時間分別為1.5min 和1.7min 。空白血漿、加樣血漿和服藥后血漿的多反應監測(MRM 色譜圖見圖1。2方法與結果2. 1試驗設計試驗前對志

11、愿者進行病史詢問和體格檢查，包括心電圖、胸透、肝功能、腎功能、血常規、尿常規和乙肝表面抗原檢查等，共入選20名男性健康志愿者，19名完成試驗(1名退出。19名受試者平均年齡(23.6±2.5歲，平均體重(64.2±5.6 kg ，身高(1.72±0.06 m ；受試者試驗前兩周及試驗期間未服用其它任何藥物，試驗期間禁煙酒及含咖啡因的飲料，并自愿簽署知情同意書。試驗方案經本院倫理委員會批準通過。采用兩制劑雙周期交叉試驗設計，20名受試者隨機分為2組。試驗前12h 進清淡晚餐后禁食，翌晨8時空腹口服T 或R 制劑，劑量均為30mg (以1鹽酸鹽計，用溫開水250ml

12、送服。R 制劑直接吞服，T 制劑先用適量水攪拌均勻后服用，再用少量水分次沖洗杯中殘留藥物，服下。服藥2h 后統一飲水，40122012012A ：空白血漿，B ：空白血漿+1鹽酸鹽對照品+2鹽酸鹽對照品，C ：服藥后4h 血漿，I ：m/z 379.1264.1；II ：m/z 455.5m/z 165.211; 22圖1MRM 色譜圖2. 2. 2血樣預處理取血樣100µl，加入甲醇100µl和“2.2.3”項下內標溶液200µl，渦旋20s ，離心(10000r/min 5min ，取上清液進樣測定。640 Chinese Journal of Pharmac

13、euticals 2007, 38(9 · · 中國醫藥工業雜志表1主要藥動學參數結果( ± s，n =19參數max t max /ht 1/2 /hAUC 024h /ng·h·ml1AUC 0 /ng·h·ml1F/T 制劑1.95±0.607.77±0.93517.9±180.4577.3±200.5102.7±17.1R 制劑1.89±0.437.61±1.02518.3±215.5574.8±236.9AUC 經對數轉換后進

14、行方差分析，用雙單側t 檢驗進行生物等效性評價。結果表明，T 和R 制劑的t max 、c max 、AUC 024h、AUC 0均無顯著性差異(P 0.05 ；T 制劑圖2平均藥-時曲線(n = 192. 2. 3標準曲線精密稱取1鹽酸鹽對照品適量，用甲醇溶解配制成1濃度為1mg/ml的貯備液。將該貯備液用空白血漿稀釋成1濃度為2、5、10、25、50、100、200ng/ml的系列血漿。精密稱取2鹽酸鹽對照品適量，用甲醇溶解并稀釋成2濃度為100ng/ml的內標溶液。取上述含1的系列血漿，按“2. 2. 2”項下方法操作，進樣測定。以1濃度(c 為橫坐標，1與2的峰面積比(Y 為縱坐標，采

15、用加權(1/c 2最小二乘法進行回歸，得回歸方程為Y = 0.0135c +0.00277(r = 0.9993，表明1濃度在2200ng/ml范圍內與峰面積比線性關系良好。定量限為2ng/ml。2. 2. 4精密度與回收率取1低、中、高3個濃度(分別為5、25、160ng/ml的血漿樣品各6份，按“2.2.2”項下方法操作，分別于日內和3d 進樣測定。測得日內和日間RSD 分別為3.8、2.2、1.9(n =6 和5.6、7.7、1.8(n =18，方法回收率分別為101.2、99.9和97.6(n =6。2. 3藥動學參數和生物等效性評價19名健康受試者口服單劑量T 和R 制劑的平均藥-時

16、曲線見圖2，可見基本相同。將血藥濃度值錄入DAS 1.0統計軟件，計算各藥動學參數(見表1 ，并進行生物等效性統計分析。對T 和R 制劑的t max 進行非參數秩和檢驗，c max 和5 4 3 2c max 的90置信區間落在R 制劑的70143之間，AUC 的90置信區間均落在R 制劑的80125之間；以AUC 024h計算，T 制劑相對于R 制劑的生物利用度為(102.7±17.1 。結果表明兩制劑具有生物等效性。3討論人血漿中1測定多采用HPLC 法2-5，靈敏度較低，樣品處理復雜。本研究采用甲醇沉淀血漿蛋白后直接進樣的LC-MS/MS法，操作簡捷、特異性好、干擾少，每個樣品的測定僅需2min ，且靈敏度提高，定量限2ng/ml。在本研究中，受試者口服1制劑30mg 即可滿足研究需要，服藥劑量僅相當于文獻1-5報道的1/31/2，所有受試者試驗期間均未發生藥物不良反應。本研究所得的藥動學參數與文獻1,3,4報道基本一致。參考文獻：1徐紅蓉, 汪紅, 陳偉力, 等. 氨溴索分散片在健康志愿者的藥代動力學和生物等效性J . 中國臨床藥理學雜志, 2006, 22(3 : 180-183.劉書銘, 周遠大. 鹽