1、蒙藥材草烏及其炮制品中幾種雙酯型生物堿的含量比較        【摘要】     目的用高效液相色譜法比較蒙藥材草烏及其炮制品中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿的含量。方法色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm,5 m）；流動相A為乙腈-四氫呋喃（2515, V/V），B為 0.1 mol·L-1醋酸銨-冰醋酸(1000.05,V/V)，梯度洗脫；檢測波長為235 nm；流速1.0 ml·min-1；柱溫為30；進樣

2、量10 l。結果蒙藥材草烏經特殊炮制后，炮制品中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿的含量均低于草烏生品，訶子制草烏中含量最低，甘草制草烏含量次之，酸奶制草烏含量最高。結論3種炮制方法使草烏藥材中雙酯型生物堿含量大大降低，可用于指導蒙醫臨床用藥。     【關鍵詞】  草烏；炮制品；高效液相色譜法；烏頭堿；次烏頭堿； 新烏頭堿    Content Comparison of Aconitine, Hypaconine and Mesaconitine in Radix Aconiti Kusnezoffii an

3、d its Mongolian Distinct Preparations by HPLCL Ying, WANG Dong, LIN Yan, WANG Wei, SUN Lixin1.School of Pharmacology，Shenyang Pharmacological University，Shenyang 110016，Liaoning，China； 2.Chifeng Institute for  Drug Control, Chifeng 024000，Inner Mongolian，China; 3.Inner Mongolian Institute for F

4、ood and Drug Control,Huhehaote 010020，Inner Mongolia，ChinaAbstract:ObjectiveTo compare the contents of aconitine，hypaconitine and mesaconitine in Radix Aconiti Kusnezoffii and its mongolian distinct preparations by HPLC.MethodsDiamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 m) was used as chromatographic column,

5、 acetonitrile-tetrahydrofuran(2515,V/V) and 0.1 mol·L-1 ammonium acetate - acetic acid (1000.05,V/V) in gradient elution mode as mobile phase. The flow rate was set at 1.0 ml·min-1, the detection wavelength at 235 nm and the column temperature was at 30.ResultsAfter Radix Aconiti Kusnezoff

6、ii was processed by Mongolian distinct technology, the contents of aconitine, hypaconine and mesaconitine in its preparations were less than those in unprocessed Radix Aconiti. Kusnezoffii, and in these preparations the total content of three alkaloids thin myrobalan preparation of Radix Aconiti Kus

7、nezoffii was minimum,that in liquorice preparation of Radix Aconiti Kusnezoffii was second,and that in acidophilous milk preparation of Radix Aconiti Kusnezoffii was maximum.ConclusionThe contents of diesters alkaloid in Radix Aconiti Kusnezoffii processed by three Mongolian distinct technology decr

8、ease largely, which can help to guide traditional Mongolian clinical medication.Key words:Radix Aconiti Kusnezoffii；  Mongolian distinct preparations；  HPLC；  Aconitine；  Hypaconitine；  Mesaconitine    草烏為毛茛科植物北烏頭Aconitum kusnezo ffii Reichb.的干燥塊根，具有祛風除濕、溫經止痛功

9、能1，為蒙醫臨床常用藥物之一。草烏主要成分是生物堿，生物堿既是其生理活性物質，也是毒性物質，尤其是二萜雙酯型生物堿毒性最強，如烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿2。其用藥劑量與中毒劑量接近，經炮制加工后，毒性大大降低。因此，炮制過程中應嚴格控制雙酯型生物堿的轉化程度，防止炮制不充分，有毒成分含量偏高；炮制太過，有效成分流失嚴重，影響藥效。不同蒙藥炮制方法對草烏中所含雙酯型生物堿含量的影響報道較少，為保證蒙醫用藥安全，比較草烏藥材及炮制品中雙酯型生物堿的含量具有十分重要的意義。1  儀器與材料     LC-20AT高效液相色譜儀（SPD-M20A二極管

10、陣列檢測器，SIL-20AHT自動進樣器，CTO-20A柱溫箱，LC solution色譜工作站，日本島津公司），ME5型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司），RE-52AA型旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）。     對照品烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿（批號分別為110720-200410、110798-200404、110799-200404，中國藥品生物制品檢定所），乙腈（色譜純，CALEDON LABORATORIES LTD.Canada）、四氫呋喃（色譜純，天津市光復精細化工研究所），純化水（自制），其余試劑（分析純，市售）。 &#

11、160;   草烏藥材，采自內蒙古興安盟，經內蒙古食品藥品檢驗所蒙藥室康雙龍教授鑒定為毛茛科植物北烏頭Aconitum kusnezo ffii Reichb.的干燥塊根。訶子制草烏炮制品、甘草制草烏炮制品、酸奶制草烏炮制品（內蒙古食品藥品檢驗所蒙藥室炮制）。2  方法與結果2.1  對照品溶液與供試品溶液的制備2.1.1  對照品溶液的制備精密稱取烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿對照品各約12 mg，置25 ml量瓶中，加異丙醇-氯仿（11, V/V）溶解并稀釋至刻度搖勻。置冰箱4 冷藏，備用。2.1.2  供試品溶液的制備取草烏生品或炮

12、制品粉末約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液1 ml，放置片刻，精密加入異丙醇-乙酸乙酯（11, V/V）50 ml，稱定重量，超聲處理（功率150 W，頻率40 kHz）30 min，取出，放至室溫，再稱定重量，用異丙醇-乙酸乙酯（11, V/V）補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 ml，置旋轉蒸發器中，40 以下減壓回收溶劑至干，殘渣用異丙醇-氯仿（11, V/V）溶解并定容置5 ml量瓶中，用微孔濾膜（0.45 m）濾過，作為供試品溶液。2.2  色譜條件色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m）；流動相為A為乙腈

13、-四氫呋喃（2515，V/V），B為0.1 mol·L-1醋酸銨-冰醋酸（1000.05，V/V），梯度洗脫：015 min，VA：8578，VB：1522，1560 min，VAVB=7822；流速：1.0 ml·min-1；檢測波長235 nm；柱溫30 ；進樣量10 l。2.3  系統適用性試驗取供試品溶液，在上述色譜條件下進樣。以烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿色譜峰計算，理論板數均在5 000以上時，色譜峰對稱因子0.951.05，烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿色譜峰與其他成分分離度大于1.5。結果見圖1。2.4  線性關系考察分別取對照品溶液0.1，0

14、.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml，置5 ml量瓶中，加異丙醇-氯仿（11,V/V）稀釋至刻度，取上述溶液各10 l，分別注入液相色譜儀，按“2.2”項色譜條件測定峰面積，以對照品峰面積為縱坐標（Y），對照品進樣質量為橫坐標(X)，繪制標準曲線，得回歸方程分別為：烏頭堿Y=4.070×105X+82.47，r=0.999 7；次烏頭堿：Y=3.978×105X +7.269×103，r=0.999 9；新烏頭堿Y=3.965×105X +6.805×103，r=0.999 6。結果表明烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿分別在0.1014

15、.043，0.0893.546，0.1014.040 g呈良好的線性關系。2.5  精密度實驗精密吸取混合對照品溶液，在“2.2”項色譜條件下重復進樣5次，記錄烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿的峰面積，其RSD分別為0.71%，0.82%，0.70%。2.6  溶液穩定性實驗取草烏生品粉末(批號: 070906)適量，按“2.1”項方法制備供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下，分別于配制后0，2，4，8，12，24 h進樣測定，記錄色譜圖。結果烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿RSD分別為0.73%，0.81%，0.70%，表明溶液在24 h內基本穩定。2.7  重復性實驗取同

16、一批草烏生品粉末(批號: 070906)6份，按“2.1”項方法制備供試品溶液，并按“2.2”項色譜條件進樣測定，結果樣品中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿平均含量的RSD分別為1.8%，2.0%，1.7%。2.8  回收率實驗取已知烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿含量的草烏生品粉末(批號: 070906)6份，各約1 g，精密稱定，每份分別加入烏頭堿、次烏頭堿和新烏頭堿對照品適量，按“2.1”項方法制備，“2.2”項色譜條件下測定，計算回收率。結果表明，烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿平均回收率分別為99.7%，100.9%，99.5%，RSD分別為1.3%，0.9%，1.2%。結果見表1。表1&#

17、160; 回收率實驗結果（略）2.9  樣品測定取草烏生品粉末(批號: 070906)及以本批次生草烏為原料的不同炮制品按“2.1”項方法制備供試品溶液，按“2.2”項色譜條件進樣測定，根據3個成分的線性回歸方程，對各樣品中的成分含量進行計算。結果見表2。表2  樣品中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿的測定結果（略）3  討論     本文樣品提取采用超聲波法，曾考察了不同超聲時間（15，30，45 min）對含量的影響，結果超聲處理30 min時，含量不再增加，故本文選擇超聲處理30 min。     目前文獻報道的方法中多采用二乙胺或三乙胺為流動相2，堿性較強，易破壞色譜柱固定相。本文參考文獻3采用乙腈-四氫呋喃-醋酸銨-冰醋酸梯度洗脫系統，測定草烏和草烏炮制品中生物堿成分，專屬性強，可用于草烏藥材及炮制品的質量控制。     由樣品測定結果可知，蒙藥炮制草烏后，炮制品中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿的含量均低于草烏生品，訶子制草烏中含量最低，甘草