1、微生物基礎知識微生物基礎知識培訓培訓寧波安聯檢測有限公司微生物的定義微生物的定義 微生物微生物（microorganism, microbe）:存在于自然界存在于自然界中的一群體型細小、結構簡單、肉眼看不見，必須中的一群體型細小、結構簡單、肉眼看不見，必須借助于特殊儀器放大后才能觀察到的微小生物借助于特殊儀器放大后才能觀察到的微小生物按其結構、化學組成及生活習性可分為按其結構、化學組成及生活習性可分為: :原核類:僅有原始核質，無核仁或核膜，細胞器很不完善。如細菌、僅有原始核質，無核仁或核膜，細胞器很不完善。如細菌、放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體、螺旋體放線菌、支原體、立克次氏體、衣原體、

2、螺旋體 真核類:細胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體，細胞器完細胞核的分化程度較高，有核膜、核仁和染色體，細胞器完整。如真菌（酵母菌和霉菌）、整。如真菌（酵母菌和霉菌）、 原生動物、藻類原生動物、藻類非細胞類:體積微小，能通過除菌過濾器。如病毒和朊病毒等體積微小，能通過除菌過濾器。如病毒和朊病毒等按其致病性可分為按其致病性可分為: :病原性微生物非病原性微生物微生物的特點微生物的特點個體小個體小,面積大：面積大：小于小于0.1mm。肉眼不可見。肉眼不可見。分布廣分布廣, ,種類多（種類多（10萬多種）萬多種） ：自然界中到處都：自然界中到處都有，如水、空氣、土壤等有，如水、空氣、土壤等,

3、 , 土壤中的數量最多。土壤中的數量最多。代謝強，轉化快：代謝強，轉化快：發酵乳糖的細菌在發酵乳糖的細菌在1小時內可小時內可分解其自重分解其自重100010000倍的乳糖；產朊假絲酵母倍的乳糖；產朊假絲酵母合成蛋白質的能力比食用公牛強合成蛋白質的能力比食用公牛強10萬倍萬倍生長旺，繁殖快：生長旺，繁殖快：微生物有驚人的繁殖速度，大微生物有驚人的繁殖速度，大多數微生物幾十分鐘內就可以繁殖一代多數微生物幾十分鐘內就可以繁殖一代適應性強，易變異適應性強，易變異（耐藥性產生的原因）（耐藥性產生的原因）葡萄球菌葡萄球菌 菌落單位菌落單位菌落單位菌落單位-CFU 由單個菌細胞或幾個同種菌細胞在培養基上長成

4、肉由單個菌細胞或幾個同種菌細胞在培養基上長成肉眼可見的菌落，每個菌落就是眼可見的菌落，每個菌落就是1CFU光滑型菌落光滑型菌落粗糙型菌落粗糙型菌落微生物的分布微生物的分布土壤：土壤：是微生物生活的最適環境是微生物生活的最適環境水：水：僅次于土壤的微生物分布、定居的第二場所僅次于土壤的微生物分布、定居的第二場所空氣空氣：空氣中的微生物主要來源于帶有微生物菌體及孢子空氣中的微生物主要來源于帶有微生物菌體及孢子的灰塵，這類微生物大多數是腐生性的，還來源于人和動的灰塵，這類微生物大多數是腐生性的，還來源于人和動物，它們大多數是通過呼吸道排出的，其中也包含有病原物，它們大多數是通過呼吸道排出的，其中也包

5、含有病原微生物，懸浮在大氣中。微生物，懸浮在大氣中。 微生物的類群和形態結構微生物的類群和形態結構 一、細菌一、細菌 細菌是一類細胞細而短、結構簡單、細胞壁堅韌，以二分裂方式無性細菌是一類細胞細而短、結構簡單、細胞壁堅韌，以二分裂方式無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。繁殖的原核微生物，分布廣泛。1.細菌的形態與結構細菌的形態與結構 （1） 球菌球菌 多數球菌直徑在多數球菌直徑在1微米左右，外觀呈球形微米左右，外觀呈球形或近似球形。由于繁殖時分裂平面不同可形成不同的排或近似球形。由于繁殖時分裂平面不同可形成不同的排列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。列方式，分為雙球菌、鏈球菌、葡萄球菌等。 （

6、2） 桿菌桿菌 形態多數呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多形態多數呈直桿狀，也有的菌體稍彎，多數呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈數呈分散存在，也有的呈鏈狀排列，分為棒狀桿菌、鏈狀桿菌、球桿菌等。狀桿菌、球桿菌等。 （3） 螺形菌螺形菌 菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺菌體彎曲，呈弧形或螺旋形。如幽門螺桿菌。桿菌。 細菌雖小，仍具有一定的細胞結構和功能。細胞壁、細胞細菌雖小，仍具有一定的細胞結構和功能。細胞壁、細胞膜、細胞質和核質等各種細菌都有，是細菌的基本結構。膜、細胞質和核質等各種細菌都有，是細菌的基本結構。球菌球菌(coccus)腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌桿菌桿

7、菌(bacillus)不同桿菌的大小、長短、粗細很不一致。不同桿菌的大小、長短、粗細很不一致。炭疽芽胞桿菌炭疽芽胞桿菌 3-10 m3-10 m大大中中大腸埃希菌大腸埃希菌 2-3 m2-3 m小小布魯菌布魯菌 0.6-1.5 m0.6-1.5 m細菌的繁殖細菌的繁殖 細菌生長速度很快，一般約細菌生長速度很快，一般約20min分裂一次。若按此速度分裂一次。若按此速度計算，細菌群體將龐大到難以想象的程度。但事實上由于計算，細菌群體將龐大到難以想象的程度。但事實上由于細菌繁殖中營養物質的逐漸消耗，有害代謝產物的逐漸積細菌繁殖中營養物質的逐漸消耗，有害代謝產物的逐漸積累，細菌不可能始終保持高速度的無

8、限繁殖。經過一段時累，細菌不可能始終保持高速度的無限繁殖。經過一段時間后，細菌繁殖速度逐漸減慢，死亡菌數增多，活菌增長間后，細菌繁殖速度逐漸減慢，死亡菌數增多，活菌增長率隨之下降并趨于停滯。率隨之下降并趨于停滯。熱原與內毒素熱原與內毒素許多細菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產生熱許多細菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能產生熱原。原。熱原是微量即可引起恒溫動物體溫異常升高熱原是微量即可引起恒溫動物體溫異常升高的物質的總稱。的物質的總稱。主要物質為細菌內毒素、胞壁酰主要物質為細菌內毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗體復合物、半抗體原物質和某二肽及其他抗原抗體復合物、半抗體原物質和某些藥物（類固醇）等。些藥物（

9、類固醇）等。1、細菌內毒素一般指革蘭陰性細菌細胞壁的結構成分，主、細菌內毒素一般指革蘭陰性細菌細胞壁的結構成分，主要是脂多糖。要是脂多糖。 2、細菌內毒素生物學活性可分為兩類：一是致病作用，一、細菌內毒素生物學活性可分為兩類：一是致病作用，一是保護性反應。是保護性反應。3、其他理化特性、其他理化特性耐熱性：耐熱性：120加熱加熱4h，可破壞，可破壞98%。180加熱加熱2h或或250加熱加熱30min，才可徹底破壞。，才可徹底破壞。濾過濾過性：其體積小，約在性：其體積小，約在15nm之間，故能通過濾器進入濾液之間，故能通過濾器進入濾液中。中。具有水溶性及不揮發性。具有水溶性及不揮發性。能被強酸

10、、強堿和氧化能被強酸、強堿和氧化劑破壞劑破壞消毒與滅菌消毒與滅菌下列術語常用于表示物理或化學方法對微生物的殺滅程度下列術語常用于表示物理或化學方法對微生物的殺滅程度 消毒：消毒：殺死物體上病源微生物的方法殺死物體上病源微生物的方法,并不一定能殺死細并不一定能殺死細菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。菌的芽胞。消毒所用的試劑稱為消毒劑。滅菌：滅菌：殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細菌芽孢在內的全部病原微生物和非病原微生物。包括殺滅細菌芽孢在內的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌：抑菌：抑制體內或體外細菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為

11、抑制體內或體外細菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細菌的繁殖。各種抗生素，可抑制細菌的繁殖。防腐：防腐：防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法，細菌一般不防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法，細菌一般不死亡。同一種化學藥品在高濃度時為消毒劑，低濃度時常死亡。同一種化學藥品在高濃度時為消毒劑，低濃度時常為防腐劑。為防腐劑。無菌：無菌：不存在活的細菌。防止細菌進入人體或其他物品的不存在活的細菌。防止細菌進入人體或其他物品的操作技術，為無菌操作。操作技術，為無菌操作。消毒與滅菌消毒與滅菌l輻射滅菌法輻射滅菌法 1、紫外線紫外線：波長波長200-300nm的紫外線具有殺的紫外線具有殺 菌作用。穿透物

12、質的能力很差，一般要求紫外燈菌作用。穿透物質的能力很差，一般要求紫外燈距離照射物不超過距離照射物不超過1.0米為宜米為宜 2、電離輻射、電離輻射 高速電子、高速電子、X射線、射線、射線射線 3、微波、微波 波長波長1mm1ml熱力滅菌法：使蛋白質、酶及核酸永久性破環，細胞膜溶使蛋白質、酶及核酸永久性破環，細胞膜溶解，導致細胞發生不可逆轉的死亡。解，導致細胞發生不可逆轉的死亡。1、干熱滅菌法干熱滅菌法采用灼燒或干熱空氣滅菌采用灼燒或干熱空氣滅菌 ，使用方便，使用方便，適用于玻璃器皿和瓷器等耐高溫的固體物的滅菌適用于玻璃器皿和瓷器等耐高溫的固體物的滅菌 。2、濕熱滅菌法濕熱滅菌法利用熱蒸汽殺死微生

13、物。利用熱蒸汽殺死微生物。 高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進行滅菌的方高壓蒸汽滅菌：利用高溫高壓蒸汽進行滅菌的方法法 ，蒸汽的穿透力較熱空氣強可以殺死一切微生，蒸汽的穿透力較熱空氣強可以殺死一切微生物，包括細菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐物，包括細菌的芽孢，真菌的孢子或休眠體等耐高溫的個體高溫的個體 。最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。最可靠最適用最廣泛的滅菌方法。水質微生物水質微生物 采樣采樣自來水：自來水：現將自來水龍頭用火焰燒灼3min，滅菌；再打開水龍頭防水5min（常用的水龍頭可以 防水23min）；采樣水置于無菌錐形瓶中，采樣總量占錐形瓶的80%左右，以便搖勻。水源水：水源水：選取可

14、疑及有代表性的水域，一般距離水面1015cm采樣；河道水采樣時，將瓶口朝向、水流方向，在指定位置打開瓶蓋。采樣結束后，樣品冷藏運輸，盡快檢測。樣品處理、實驗準備、實驗步驟及報告詳見作業指導書革蘭氏染色革蘭氏染色法法 革蘭染色法是丹麥內科醫生革蘭染色法是丹麥內科醫生 ChristainChristain Gram Gram于于18841884年創立的一種細菌年創立的一種細菌復染色復染色方法，已有方法，已有130130多年的歷史，仍在廣泛使用。多年的歷史，仍在廣泛使用。結晶紫結晶紫盧戈碘液液盧戈碘液液95%乙醇乙醇復紅復紅G-菌：菌：類脂質類脂質肽聚糖肽聚糖G+菌：菌：肽聚糖肽聚糖交聯度大交聯度大

15、類脂質類脂質通透性學說通透性學說、等電學說、化學學說v鑒別細菌：把細菌分成鑒別細菌：把細菌分成G G+ +和和G G- -兩大類。兩大類。v選擇抗菌藥物：例如選擇抗菌藥物：例如G G+ +球菌球菌對青霉素敏感對青霉素敏感, ,G G- -桿菌桿菌耐藥。耐藥。v了解細菌的致病機理：了解細菌的致病機理：G G+ +菌大多產生外毒素菌大多產生外毒素,G,G- -菌菌產生內毒素。產生內毒素。革蘭染色的步驟革蘭染色的步驟 涂片涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色紫紫碘酒紅，分分半半碘酒紅，分分半半意義滅菌接種環滅菌接種環無無菌菌操操作作 細菌合適 細菌較多接種環取鹽接種環取鹽水水3ul3ul2 2滴滴, ,水滴間距小于水滴間距小于2cm2cm。 取 菌 苔 少 許取 菌 苔 少 許（1mm1mm小菌落半個）小菌落半個）與鹽水混勻，涂成與鹽水混勻，涂成大于大于1cm1cm2 2均勻涂膜均勻涂膜。涂畢涂畢環移至涂膜中