1、2.2.22.2.2動物細胞融合與單克隆抗體動物細胞融合與單克隆抗體一、動物細胞融合一、動物細胞融合 細胞融合是正常的生命活動細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合兩個細胞正在融合 受精作用受精作用概念：概念： 動物細胞融合也稱動物細胞融合也稱細胞雜交細胞雜交，是指兩個或，是指兩個或多個動物細胞形成多個動物細胞形成一個細胞一個細胞的過程。的過程。一、動物細胞融合一、動物細胞融合誘導方式誘導方式物理法物理法化學法化學法生物法：生物法：滅活的病毒滅活的病毒滅活的仙臺病毒滅活的仙臺病毒喪失感染性喪失感染性（不感染細胞）（不感染細胞）保留融合活性保留融合活性（誘導細胞融合）（誘導細胞融合）方法：方法

2、：動物動物細胞細胞融合融合過程過程: :不同不同DNADNA的兩個細胞的兩個細胞滅活病毒誘導細胞融合滅活病毒誘導細胞融合融合后的細胞進行有絲分裂融合后的細胞進行有絲分裂動物細胞融合過程動物細胞融合過程原理：原理： 細胞膜的流動性細胞膜的流動性植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融合原理細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞融合的方法細胞融合的方法 去除細胞壁后誘導去除細胞壁后誘導原生質體融合原生質體融合使細胞分散后誘使細胞分散

3、后誘導細胞融合導細胞融合誘導方法誘導方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體二、單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機體受抗原刺激后產生的、抗體是機體受抗原刺激后產生的、并能與該抗原發生特異性結合的具有并能與該抗原發生特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。漿細胞產生抗體。漿細胞產生抗體。 抗原抗原刺激刺激漿細胞漿細胞 抗體抗體特異性差、純度低；產量低、反應不夠靈敏特異性差、純度低；產量低、反

4、應不夠靈敏傳統血清抗體的制備途徑：傳統血清抗體的制備途徑：二、單克隆抗體二、單克隆抗體動物體動物體傳統血清抗體的制備的缺陷：傳統血清抗體的制備的缺陷：如何大量生產單克隆抗體？如何大量生產單克隆抗體？ 利用淋巴細胞產生抗體的功能利用淋巴細胞產生抗體的功能 利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用腫瘤細胞無限增殖的特性 利用細胞融合的技術將兩種細胞融利用細胞融合的技術將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞性的雜交瘤細胞 利用動物細胞培養技術大量培養雜利用動物細胞培養技術大量培養雜交瘤細胞交瘤細胞科勒科勒米爾斯坦米爾斯坦榮獲榮獲19841984年諾貝爾生理學或醫

5、學獎年諾貝爾生理學或醫學獎一個一個B B淋巴細胞只分泌淋巴細胞只分泌一種特異性抗體一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞能小鼠骨髓瘤細胞能無限增殖無限增殖雜種雜種細胞細胞二、單克隆抗體二、單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體 由由單個單個B B淋巴細胞淋巴細胞經過經過無性繁殖無性繁殖（克隆克?。?，），形成基因型相同的細胞群，這一細胞群形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產生的所產生的化學性質單一、特異性強的抗體化學性質單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。稱為單克隆抗體。 特點：特點：特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高 1. 1. 細胞兩兩融合后，有哪些類型？細胞兩兩融合后，有哪些類型？B-B B-B B-B

6、-瘤瘤( (雜交瘤細胞雜交瘤細胞) ) 瘤瘤- -瘤瘤 2 2、如何篩選？、如何篩選？ （1 1）淋巴細胞合成）淋巴細胞合成DNADNA有有D D和和S S兩條兩條途徑，其中途徑，其中DD途徑能夠被途徑能夠被氨基蝶呤阻斷氨基蝶呤阻斷。但是一般不分裂增殖。但是一般不分裂增殖。（2 2）骨髓瘤細胞是特殊選擇的代謝缺）骨髓瘤細胞是特殊選擇的代謝缺陷型細胞陷型細胞，其其DNADNA合成過程只具有合成過程只具有D D途徑，能被途徑，能被氨基蝶呤阻斷氨基蝶呤阻斷。（3 3）雜交瘤細胞則既可無限增殖，又）雜交瘤細胞則既可無限增殖，又具備兩條具備兩條DNADNA合成途徑。合成途徑。資料：資料： 單克隆抗體制備

7、過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B B淋巴細胞淋巴細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選細胞融合、篩選雜交瘤細胞雜交瘤細胞細胞培養細胞培養篩選，繼續培養篩選，繼續培養足夠數量的、能產生足夠數量的、能產生特定抗體的細胞群特定抗體的細胞群體外培養體外培養注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：1 1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養原理免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養原理2 2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B B細胞融合？細胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承

8、了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有親細胞的遺傳物質，不僅具有B B細胞分細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可以獲得大量單克隆抗體本領，因而可以獲得大量單克隆抗體單克隆抗體的應用單克隆抗體的應用與常規抗體相比，單克隆抗體產量高，與常規抗體相比，單克隆抗體產量高，特異性強，靈敏度高特異性強，靈敏度高，優越性十分明顯。，優越性十分明顯。應用主要有：應用主要有：1 1、臨床診斷、臨床診斷2 2、作為載體，運載抗癌藥物，形成、作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈生物導彈”治療腫治療腫瘤瘤資料資料：目前世界各國已經研制出數以百計的單克隆抗體。：目前世界各國已經研

9、制出數以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內診斷，借以鑒別和定位然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內診斷，借以鑒別和定位體內體內“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。及心肌梗塞的診斷。 小結小結兩個過程兩個過程動物細胞培養過程動物細胞培養過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導細胞融合

10、的新方法一個誘導細胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細胞雜交瘤細胞一個新細胞雜交瘤細胞一個優勢單克隆抗體特異性一個優勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優勢強、靈敏度高的優勢植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合( (單克隆抗體制備單克隆抗體制備) )過過程程第第一一步步原生質體的原生質體的制備制備( (酶解酶解法法) )正常小鼠正常小鼠免疫處理免疫處理第第二二步步原生質體融原生質體融合合( (物、化物、化法法) )動物細胞動物細胞融合融合第第三三步步雜種細胞的雜種細胞的篩選與培養篩選與培養雜交瘤細雜交瘤細胞的篩選胞的篩選與培養與培養第第四四步步雜種植株誘雜種植株誘導與鑒定導與

11、鑒定單克隆抗單克隆抗體的提純體的提純意義意義和和用途用途克服遠緣雜交克服遠緣雜交不親和的障礙，不親和的障礙，大大擴展了可用大大擴展了可用于雜交的親本組于雜交的親本組合范圍合范圍突破有性雜交突破有性雜交的母系遺傳，獲的母系遺傳，獲得細胞質基因的得細胞質基因的雜合子，研究細雜合子，研究細胞質遺傳胞質遺傳制備單克隆抗體制備單克隆抗體診斷、治療和預防疾診斷、治療和預防疾病，例如：病，例如：a a腫瘤定位診斷，放射腫瘤定位診斷，放射性抗體性抗體腫瘤腫瘤b b生物導彈治療，抗體生物導彈治療，抗體抗癌藥物抗癌藥物腫瘤腫瘤練習：練習：1 1在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正在動物細胞融合和植物體細胞雜

12、交的比較中，正確的是（）確的是（）A A結果是相同的結果是相同的B B雜種細胞的形成過程基本相同雜種細胞的形成過程基本相同C C操作過程中酶的作用相同操作過程中酶的作用相同DD誘導融合的手段相同誘導融合的手段相同2. 2. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B B淋巴細胞淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養基篩選出雜交瘤細胞，誘導融合后，要用特定培養基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養基上不能存活增殖的細胞是（在這種培養基上不能存活增殖的細胞是（ ） 淋巴細胞淋巴細胞小鼠骨髓瘤細胞小鼠骨髓瘤細胞B B淋巴細胞自身融合細胞淋巴細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞小鼠

13、骨髓瘤細胞自身融合細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞A A B BC C DD C3 3下列關于單克隆抗體制備過程的敘下列關于單克隆抗體制備過程的敘述，正確的是述，正確的是 ( () )A A制備過程中不需要動物細胞培養技制備過程中不需要動物細胞培養技術術B B雜交瘤細胞具有漿細胞與癌細胞的雜交瘤細胞具有漿細胞與癌細胞的所有特點所有特點C C經選擇性培養基篩選出來的雜交瘤經選擇性培養基篩選出來的雜交瘤細胞即可用于單克隆抗體的生產細胞即可用于單克隆抗體的生產D D單克隆抗體最廣泛的用途是用作體單克隆抗體最廣泛的用途是用作體外診斷試劑外診斷試劑D 4. 4. 下圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產下圖

14、為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌的實驗方案破傷風桿菌的實驗方案2 2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4 4、圖中、圖中B B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導劑，該細胞繼作為誘導劑，該細胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,_,又能又能_。1 1、該實驗方案的目的是、該實驗方案的目的是_3 3、A A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,_,該細胞能夠產生該細胞能夠產生_5 5、C C過程指細胞培養，該過程包括過程指細胞培養，該過程包括_培養和培養和_培養兩個階段，其培養兩個階段，其中中_代以內的的細胞屬于細胞株。代以內的的

15、細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B B細胞細胞抗體抗體細胞融合細胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細胞雙親細胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代5050B體外培養體外培養骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞足夠數量的細胞群足夠數量的細胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC5.5.已知細胞合成已知細胞合成DNADNA有有D D和和S S兩條途徑，兩條途徑，其中其中DD途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩種巴細胞中有這兩種DNADNA的合成途徑，的合成途徑，但一般不分裂增殖。但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤細胞鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有中盡管沒有S S途徑，但能不斷分裂增途徑，但能不斷分裂增殖。將這兩種細胞在試管中混合，加殖。將這兩種細胞在試管中混合，加聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。請回聚乙二醇促融，獲得雜種細胞。請回答：答：（1 1）試管中除融合的雜種細胞外，還）試管中除融合的雜種細胞外，還有有_種融合細胞。種融合細胞。2（2 2）設計一方法（不考慮機械方）設計一方法（不考慮機械方法），從培養液中分離出雜種細胞，法），從培養液中分離出雜種